Helixyte Green双链DNA定量检测试剂盒

简要概述

DNA定量是DNA样品制备过程中的一项重要工作，Helixyte 绿色双链DNA定量检测试剂盒提供了一种用Helixyte Green BR快速测定dsDNA的方法。该测定法在三个数量级上是线性的，并且比紫外线吸收度读数灵敏度高几个数量级。Helixyte Green-BR与dsDNA结合后荧光增强，序列依赖性小，可准确测定基因组DNA、病毒DNA、miniprep-DNA或PCR扩增产物等多种来源的DNA样品。该方法对RNA上的双链DNA（dsDNA）具有高度的选择性，并且被优化以测量从10 pg/ul到10 ng/ul的DNA浓度。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Helixyte 绿色双链DNA定量检测试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 准备dSDNA标准品，测试样品和染料工作溶液
2. 添加DNA标准液或测试样品（50 uL）
3. 添加Helixyte Green-BR工作溶液（50 uL）
4. 在室温下孵育2分钟
5. 检测Ex / Em = 490/530 nm的荧光强度

提示：操作前将所有组件加热到室温。暂时没有关于Helixyte Green dsDNA染色剂的致突变性或毒性的数据。由于该试剂与核酸结合，因此应将其视为潜在的诱变剂，应谨慎处理。DMSO储备溶液应特别小心，因为已知DMSO有助于有机分子进入组织。

 

溶液配制

标准溶液配制

将100 uL的100 ug / mL dsDNA标准溶液（组分C）添加到400 uL的测定缓冲液（组分B）中，以生成20 ug / mL的dsDNA标准溶液。然后用测定缓冲液（组分B）进行1：3的系列稀释，以得到0至20 ug / mL的系列稀释的dsDNA标准品。

 

工作溶液配制

Helixyte Green BR工作溶液：将50 uL Helixyte Green BR（组分A）添加到5 mL的测定缓冲液（组分B）中，使总体积为5.050 mL。通过用箔纸覆盖或将其置于黑暗中来保护工作溶液免受光照。 注意：我们建议在塑料容器中而不是玻璃中制备该溶液，因为染料可能会吸附到玻璃表面。为了获得最佳结果，应在准备后的几个小时内使用此溶液。

 

实验步骤

表1.  在透明底部96孔微孔板中的dsDNA标准品和测试样品的布局。DS = dsDNA标准品（DS1-DS7，20至0.027 ug / mL）; BL =空白对照；TS =测试样品

BL	BL	TS	TS
DS1	DS1	…	…
DS2	DS2	…	…
DS3	DS3
DS4	DS4
DS5	DS5
DS6	DS6
DS7	DS7

表2.  每个孔的试剂组成

Well	Volume	Reagent
DS1-DS7	50 uL	连续稀释 (20 to 0.027 ug/mL)
BL	50 uL	缓冲液 (Component B)
TS	50 uL	实验样品

1. 根据表1和表2提供的布局，制备dsDNA标准品（DS）、空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 uL试剂，而不是50 uL。注：根据需要处理细胞或组织样本。
   
2. 添加50 uL Helixyte Green-BR染料工作液（2X）分别加入dsDNA标准液、空白对照液和供试品中，使总分析体积为100ul/孔。对于384孔板，添加25 uL的Helixyte Green-BR染料工作溶液，每孔总体积为50 uL/孔。
   
3. 在室温下避光培养2分钟。
   
4. 在Ex/Em=490/530 nm（截止=515nm）处用荧光酶标仪检测荧光强度。

 

图示

 

 

图1.用Helixyte Green dsDNA定量试剂盒在96孔黑色孔板中测量了dsDNA剂量反应。

 

 

参考文献

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Helixyte Green 双链DNA定量试剂

简要概述

Helixyte Green dsDNA染料是美国AAT Bioquest生产的一种超灵敏荧光核酸染料，Helixyte Green dsDNA染色是一种超灵敏荧光核酸染色，用于定量溶液中的双链DNA（dsDNA）。最近，Helixyte Green dsDNA染料用于PCR产物的直接循环测序方法中的PCR扩增产量。使用标准光谱荧光计和2.5 ng / mL带有荧光酶标仪的dsDNA检测到少至25 pg / mL的dsDNA（在2 mL测定体积中50 pg dsDNA），在ssDNA，RNA和ss存在下检测效果最小 游离核苷酸。该测定在三个数量级上是线性的并且几乎没有序列依赖性。它是从多种来源准确测量DNA的理想选择，包括基因组DNA，病毒DNA，小量制备DNA或PCR。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Helixyte Green 双链DNA定量试剂。 

产品说明书

分析方案

以下方案是使用Helixyte Green 定量dsDNA的实例。 在打开样品瓶之前，让Helixyte Green 温热至室温。

注意：没有数据可用于解决Helixyte Green dsDNA染色的致突变性或毒性。 因为这种试剂与核酸结合，所以应将其作为潜在的诱变剂进行处理，并进行适当的处理。 应特别小心处理DMSO储备溶液，因为已知DMSO有助于有机分子进入组织。

1.准备Helixyte Green 工作解决方案：

1.1通过在TE（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 7.5-8.0）中浓缩DMSO溶液200倍稀释，制备Helixyte Green的水性工作溶液。 例如，将50μLHelixyteGreen添加至10 mL TE，以制备足够的工作溶液，以在200μL终体积中测定100个样品。通过用铝箔覆盖或将其置于黑暗中来保护工作溶液免受光照。

注1：我们建议将此溶液用塑料容器而不是玻璃制备，因为染料可能会吸附到玻璃表面。

注2：为获得最佳结果，该溶液应在制备后几小时内使用。

2.准备dsDNA标准品的连续稀释液（0至3 ng / mL）：

2.1在ddH2O中制备1mg / mL的dsDNA原液（如来自Sigma的小牛胸腺DNA）。

2.2将10μL1mg / mL dsDNA原液（步骤2.1）加入到998 L TE缓冲液中，得到10μg/ mL dsDNA溶液，然后进行1:10和1：2连续稀释，得到1000,100,50,25 ，12.5,6.25,3.125和0 ng / mL。

2.3如说明书中的表1和2中所述，将dsDNA标准品和含有测试样品的DNA添加到96孔固体黑色微孔板中。

3.运行dsDNA测定：

3.1将100μLdsDNA测定混合物（来自步骤1.1）添加至dsDNA标准品的每个孔，空白对照和测试样品（参见步骤2.3）以使总dsDNA测定体积为200μL/孔。

注1：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLdsDNA测定混合物。

注2：对于基于曲线的测定，每曲线添加1mL样品和1mL dsDNA测定混合物。

3.2在室温下孵育反应5至10分钟，避光。

3.3使用荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm（在515nm处截止）观察荧光增加。

3.4空白孔中的荧光（仅含TE缓冲液）用作对照，并从具有dsDNA反应的那些孔的值中减去。 从DNA标准曲线中产生的标准曲线确定样品的DNA浓度。

参考文献

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