胱天蛋白酶Caspase 9荧光底物 FITC-C6-LEHD-FMK 绿 货号13407-AAT Bioquest荧光染料

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胱天蛋白酶Caspase 9荧光底物 FITC-C6-LEHD-FMK 绿

胱天蛋白酶Caspase 9荧光底物 FITC-C6-LEHD-FMK 绿

胱天蛋白酶Caspase 9荧光底物 FITC-C6-LEHD-FMK 绿    货号13407 货号 13407 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 6564
Ex (nm) 491 Em (nm) 516
分子量 1031.07 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

胱天蛋白酶Caspase 9荧光底物 FITC-C6-LEHD-FMK 绿是美国AAT Bioquest生产的荧光底物,激活的caspases在凋亡中占有主导地位,FITC-C6-LEHD-FMK能提供简便灵敏的方法对活细胞中对激活的caspase-9进行检测。FITC-C6-LEVD-FMK在凋亡细胞中具有通透性,无毒性和不可逆结合激活的caspase-9的特点,是带有FITC标记的特异性Caspase 9抑制剂。FITC标记能直接通过荧光显微镜,流式细胞仪或者荧光酶标仪测定激活的Caspase 9。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的胱天蛋白酶Caspase 9荧光底物 FITC-C6-LEHD-FMK 绿。

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产品说明书

操作方法

以下协议仅提供指导,应根据您的特定需求进行修改。

使用AMC,AFC,pNA,R110和ProRed底物的常规解决方案胱天蛋白酶测定

1.在DMSO中准备10 mM的储备溶液。

2.如下准备2X半胱天冬酶底物(50 µM)分析溶液:50 µL底物原液,100 µL DTT(1M),400 µL EDTA(100 mM),10 mL Tris Buffer(20 mM),pH = 7.4。

3.将等体积的半胱天冬酶标准品或样品与2X半胱天冬酶底物测定溶液混合,并在室温下孵育至少1小时。

4.使用荧光酶标仪监测荧光,或使用酶标仪监测吸光度。

 

使用细胞渗透性FMK Caspase探针的细胞Caspase测定

1.在DMSO中准备2-5 mM的储备溶液。

2.根据需要处理细胞。

3.通过用20 mM Hepes缓冲液(HHBS)在Hanks中稀释DMSO储备溶液(来自步骤2.1),制备2X渗透性半胱天冬酶底物(20 µM)分析溶液。

4.将等体积的处理过的细胞与2X半胱天冬酶底物测定溶液混合(来自步骤2.3),并在37°C,5%CO2的培养箱中孵育细胞至少1小时。

5.用HHBS清洗细胞至少一次。

6.通过流式细胞仪,荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

 

使用细胞渗透性FMK Caspase探针进行细胞半胱天冬酶测定(仅适用于#13470-13476)

1.通过向小瓶中加入50 µL DMSO制备250X储备液。

2.根据需要处理细胞。

3.以1:250的比例将250 X DMSO储备溶液添加到细胞溶液中(例如2 µL至500 µL细胞),并将细胞在37°C,5%CO2的培养箱中孵育1小时。

4.用HHBS清洗细胞至少一次。

5.通过流式细胞仪,荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

 

参考文献

Endoplasmic reticulum stress and trophic factor withdrawal activate distinct signaling cascades that induce glycogen synthase kinase-3 beta and a caspase-9-dependent apoptosis in cerebellar granule neurons
Authors: Brewster JL, Linseman DA, Bouchard RJ, Loucks FA, Precht TA, Esch EA, Heidenreich KA.
Journal: Mol Cell Neurosci (2006): 242

Enhanced 15-HPETE production during oxidant stress induces apoptosis of endothelial cells
Authors: Sordillo LM, Weaver JA, Cao YZ, Corl C, Sylte MJ, Mullarky IK.
Journal: Prostaglandins Other Lipid Mediat (2005): 19

P2X7 receptor-mediated apoptosis of human cervical epithelial cells
Authors: Wang Q, Wang L, Feng YH, Li X, Zeng R, Gorodeski GI.
Journal: Am J Physiol Cell Physiol (2004): C1349

Caspase activation during Haemophilus somnus lipooligosaccharide-mediated apoptosis of bovine endothelial cells
Authors: Sylte MJ, Leite FP, Kuckleburg CJ, Inzana TJ, Czuprynski CJ.
Journal: Microb Pathog (2003): 285

Induction of apoptosis by apicidin, a histone deacetylase inhibitor, via the activation of mitochondria-dependent caspase cascades in human Bcr-Abl-positive leukemia cells
Authors: Cheong JW, Chong SY, Kim JY, Eom JI, Jeung HK, Maeng HY, Lee ST, Min YH.
Journal: Clin Cancer Res (2003): 5018

Protein kinase Cdelta amplifies ceramide formation via mitochondrial signaling in prostate cancer cells
Authors: Sumitomo M, Ohba M, Asakuma J, Asano T, Kuroki T, Hayakawa M.
Journal: J Clin Invest (2002): 827

3-m-bromoacetylamino benzoic acid ethyl ester: a new cancericidal agent that activates the apoptotic pathway through caspase-9
Authors: Schlesinger M, Jiang JD, Roboz JP, Denner L, Ling YH, Holland JF, Bekesi JG.
Journal: Biochem Pharmacol (2000): 1693

Human malignant glioma therapy using anti-alpha(v)beta3 integrin agents
Authors: Chatterjee S, Matsumura A, Schradermeier J, Gillespie GY.
Journal: J Neurooncol (2000): 135

Phenylephrine protects neonatal rat cardiomyocytes from hypoxia and serum deprivation-induced apoptosis
Authors: Zhu H, McElwee-Witmer S, Perrone M, Clark KL, Zilberstein A.
Journal: Cell Death Differ (2000): 773

 

相关产品

产品名称 货号
胱天蛋白酶Caspase 3/7荧光底物 FITC-C6-DEVD-FMK 绿 Cat#13406

说明书
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ReadiCleave FITC AML-NHS酯 货号7004-AAT Bioquest荧光染料

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ReadiCleave FITC AML-NHS酯

ReadiCleave FITC AML-NHS酯

ReadiCleave FITC AML-NHS酯    货号7004 货号 7004 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 4836
Ex (nm) Em (nm)
分子量 966.98 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号:7004

产品名称:ReadiCleave FITC AML-NHS酯

规格:1mg

储存条件:-15℃避光防潮

保质期:12个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量:955.01

外观:固体

溶剂:DMSO

 

产品介绍

荧光法生物检测在灵敏度和便利性的方面具有很大的优势。许多生物分子可以很容易地用荧光标签标记,用于荧光成像和流式细胞仪分析。 然而,大多数现有的荧光标签用于永久性标记生物靶标,从中不能切割添加的荧光标签以进行进一步的下游分析,例如质谱分析。 AAT Bioquest的ReadiCleave 探针使荧光标签与生物靶标结合,可以在需要时从中去除附加的荧光标签。 此ReadiCleave AML FITC包含一个叠氮基甲基化合物,可以用TCEP裂解该化合物,以从靶分子中除去FITC荧光团。 可以通过添加10 mM TCEP溶液(pH 7.5)并在65°C孵育1-5分钟来进行裂解。

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参考文献

Biomedical and Pharmacological Uses of Fluorescein Isothiocyanate Chitosan-Based Nanocarriers.
Authors: Caprifico, Anna E and Polycarpou, Elena and Foot, Peter J S and Calabrese, Gianpiero
Journal: Macromolecular bioscience (2021): e2000312

Research Note: Modified serum fluorescein isothiocyanate dextran (FITC-d) assay procedure to determine intestinal permeability in poultry fed diets high in natural or synthetic pigments.
Authors: Vuong, Christine N and Mullenix, Garrett J and Kidd, Michael T and Bottje, Walter G and Hargis, Billy M and Tellez-Isaias, Guillermo
Journal: Poultry science (2021): 101138

Development of fluorescein isothiocyanate conjugated gellan gum for application of bioimaging for biomedical application.
Authors: Cho, Hun Hwi and Choi, Joo Hee and Been, Su Young and Kim, Namyeong and Choi, Jeong Min and Kim, Wooyoup and Kim, David and Jung, Jun Jae and Song, Jeong Eun and Khang, Gilson
Journal: International journal of biological macromolecules (2020): 2804-2812

Evaluation of Blood-Brain Barrier Integrity Using Vascular Permeability Markers: Evans Blue, Sodium Fluorescein, Albumin-Alexa Fluor Conjugates, and Horseradish Peroxidase.
Authors: Ahishali, Bulent and Kaya, Mehmet
Journal: Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) (2020)

Fluorescein isothiocyanate and blue light irradiation alter cell-adhesiveness of cross-linked albumin films for cell patterning.
Authors: Tachibana, Akira and Iida, Atsuko and Tanabe, Toshizumi
Journal: Bioscience, biotechnology, and biochemistry (2020): 800-803

Influence of Liver Intoxication by Carbon Tetrachloride or D-Galactosamine on Absorption of Fluorescein Isothiocyanate-Dextran-10 and Other Marker Compounds with Different Molecular Weights from the Rat Liver Surface.
Authors: Miyamoto, Hirotaka and Tsuda, Kayoko and Honda, Tominori and Tokunaga, Ayako and Fumoto, Shintaro and Nishida, Koyo
Journal: Biological & pharmaceutical bulletin (2020): 319-324

Technical note: fluorescein as an indicator of enteric mucosal barrier function in preruminant lambs.
Authors: Duff, Audrey F and Bielke, Lisa R and Relling, Alejandro E
Journal: Journal of animal science (2020)

Competitive and noncompetitive immunoassays for the detection of benzothiostrobin using magnetic nanoparticles and fluorescein isothiocyanate-labeled peptides.
Authors: Chen, He and Yang, Qian and Ding, Yuan and Vasylieva, Natalia and Bever, Candace S and Hua, Xiude and Wang, Minghua and Hammock, Bruce D
Journal: Analytical and bioanalytical chemistry (2019): 527-535

Electromembrane Extraction of Unconjugated Fluorescein Isothiocyanate from Solutions of Labeled Proteins Prior to Flow Induced Dispersion Analysis.
Authors: Restan, Magnus Saed and Pedersen, Morten E and Jensen, Henrik and Pedersen-Bjergaard, Stig
Journal: Analytical chemistry (2019): 6702-6708

Fluorescein- and EGFR-Antibody Conjugated Silica Nanoparticles for Enhancement of Real-time Tumor Border Definition Using Confocal Laser Endomicroscopy in Squamous Cell Carcinoma of the Head and Neck.
Authors: Watermann, Anna and Gieringer, Rita and Bauer, Anna-Maria and Kurch, Sven and Kiesslich, Ralf and Tremel, Wolfgang and Gosepath, Jan and Brieger, Juergen
Journal: Nanomaterials (Basel, Switzerland) (2019)

说明书
ReadiCleave FITC AML-NHS酯.pdf

荧光底物FITC-C6-D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMK 货号13417-AAT Bioquest荧光染料

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荧光底物FITC-C6-D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMK

荧光底物FITC-C6-D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMK

荧光底物FITC-C6-D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMK    货号13417 货号 13417 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 ug 价格 2604
Ex (nm) 491 Em (nm) 516
分子量 1037.07 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

荧光底物FITC-C6-D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMK是美国AAT Bioquest生产的荧光底物,半胱天冬酶的激活在细胞凋亡中起重要作用。 FITC-C6-D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMK为活细胞中活化的胱天蛋白酶-3的灵敏检测提供了方便的手段。 FITC-C6-D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMK是细胞可渗透的,无毒的,并且在凋亡细胞中不可逆地结合活化的胱天蛋白酶-3。 基于我们的内部研究,与我们测试的其他DEVD-FMK探针相比,FITC-C6-D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMK具有最高的信号/背景比。 FITC标签允许通过荧光显微镜,流式细胞术或荧光板读数器直接检测凋亡细胞中活化的半胱天冬酶。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的荧光底物FITC-C6-D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMK。

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产品说明书

样品实验方案

以下说明书仅提供指南,实际应根据您的具体需求进行修改。

1.使用AMC,AFC,pNA,R110和ProRed底物的一般溶液Caspase测定

1.1在DMSO中制备10mM储备溶液。

1.2制备2X半胱天冬酶底物(50μM)测定溶液,如下所示:

50 L基质原液

100L DTT(1M)

400L EDTA(100 mM)

10mL Tris缓冲液(20mM),pH = 7.4

1.3将等体积的半胱天冬酶标准品或样品与2X半胱天冬酶底物测定溶液(来自步骤1.2)混合,并在室温下孵育溶液至少1小时。

1.4使用荧光酶标仪检测荧光,或使用吸光度酶标仪检测吸光度。

 

2.细胞Caspase检测使用细胞渗透FMK半胱天冬酶探针

2.1在DMSO中制备2-5mM储备溶液。

2.2根据需要对细胞进行处理。

2.3通过用20mM Hepes缓冲液(HHBS)稀释Hanks中的DMSO储备溶液(来自步骤2.1),制备2X可渗透的半胱天冬酶底物(20μM)测定溶液。

2.4用2X半胱天冬酶底物测定溶液(来自步骤2.3)混合等体积的处理细胞,并将细胞在37℃,5%CO 2培养箱中孵育至少1小时。

2.5用HHBS洗涤细胞至少一次。

2.6用流式细胞仪,荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

 

3.细胞Caspase检测使用细胞渗透性FMK Caspase探针(仅适用于#13470-13476)

3.1通过向小瓶中加入50μLDMSO制备250X储备溶液。

3.2根据需要对细胞进行处理。

3.3将250 X DMSO储备溶液(来自步骤3.1)以1:250的比例(例如2 uL至500 uL细胞)添加到细胞溶液中,并将细胞在37°C,5%CO 2培养箱中孵育1 小时。

3.4用HHBS洗涤细胞至少一次。

3.5用流式细胞仪,荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

 

参考文献

Activation of caspase-like activity and poly (ADP-ribose) polymerase degradation during sporulation in Aspergillus nidulans
Authors: Thrane C, Kaufmann U, Stummann BM, Olsson S.
Journal: Fungal Genet Biol (2004): 361

[Antitumor mechanism of 3-bromopropionylamino benzoylurea on leukemia and lymphoma]
Authors: Li JN, Song DQ, Jiang JD.
Journal: Yao Xue Xue Bao (2004): 491

Caspase-dependent and independent cell death in rat hepatoma 5123tc cells
Authors: Pandey S, Smith B, Walker PR, Sikorska M.
Journal: Apoptosis (2000): 265

C-myc antisense oligodeoxynucleotides can induce apoptosis and down-regulate Fas expression in rheumatoid synoviocytes
Authors: Hashiramoto A, Sano H, Maekawa T, Kawahito Y, Kimura S, Kusaka Y, Wilder RL, Kato H, Kondo M, Nakajima H.
Journal: Arthritis Rheum (1999): 954

说明书
荧光底物FITC-C6-D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMK.pdf

Annexin V, FITC标记 货号20030-AAT Bioquest荧光染料

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Annexin V, FITC标记

Annexin V, FITC标记

Annexin V, FITC标记    货号20030 货号 20030 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 tests 价格 2604
Ex (nm) 491 Em (nm) 516
分子量 ~36000 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

Annexin V, FITC标记是美国AAT Bioquest生产的膜联蛋白,膜联蛋白是在钙存在下与磷脂膜结合的蛋白质家族。膜联蛋白V是研究细胞凋亡的有用工具。它被用作探针以检测在细胞表面上表达磷脂酰丝氨酸的细胞,这是细胞凋亡中发现的特征以及其他形式的细胞死亡。有多种参数可用于监测细胞活力。膜联蛋白V-染料结合物广泛用于通过测量磷脂酰丝氨酸(PS)的易位来监测细胞凋亡。在细胞凋亡中,PS被转移到质膜的外部小叶。磷脂酰丝氨酸在细胞表面上的出现是细胞凋亡的初始/中间阶段的通用指示,并且可以在观察到形态变化之前检测到。该荧光FITC-膜联蛋白V缀合物广泛用于通过流式细胞仪或荧光显微镜监测细胞凋亡。对于基于膜联蛋白V的细胞凋亡检测的微孔板检测,我们建议您使用我们的Cell Meter 试剂盒。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商,为您提供最优质的Annexin V, FITC标记探针。

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产品说明书

操作步骤

1.用膜联蛋白V缀合物制备和孵育细胞:

1.1     制备膜联蛋白V缀合测定缓冲液:10mM HEPES,140mM NaCl和2.5mM CaCl2,pH 7.4。

1.2     用测试化合物处理细胞一段时间(用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时)以诱导细胞凋亡。

1.3     离心细胞,得到1-5×10 5个细胞/管。

1.4     将细胞重悬于200μLAnnexin V缀合测定缓冲液中(来自步骤1.1)。

1.5     在细胞中加入2μL膜联蛋白V缀合物。

可选:在细胞内加入死细胞染色剂如碘化丙锭,用于死细胞。

1.6     在室温下进行30至60分钟,避光。

1.7     在用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前,加入300μLAnnexin V缀合测定缓冲液(来自步骤1.1)以增加体积(参见下面的步骤1.8)。

1.8     使用流式细胞仪或荧光显微镜检测荧光强度(参见下面的步骤2或3)。

 

2.使用流式细胞仪分析:

通过使用具有适当滤波器的流式细胞仪来量化膜联蛋白V缀合物。

注意:对贴壁细胞的膜联蛋白V结合流式细胞术分析未经过常规测试,因为在细胞分离过程中可能会发生特定膜损伤。

 

3.使用荧光显微镜分析:

3.1    吸取步骤1.6中的细胞悬液,用膜联蛋白V结合测定缓冲液(步骤1.1)冲洗1-2次,然后用膜联蛋白V结合测定缓冲液(步骤1.1)重悬细胞。 将细胞添加到载玻片上并盖上盖玻片。

注意:对于贴壁细胞,建议直接在盖玻片上培养细胞。 与膜联蛋白V结合物孵育后(步骤1.6),用膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)冲洗1-2次,然后将膜联蛋白V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)加回到盖玻片上。 将盖玻片倒在载玻片上并使细胞可视化。 与膜联蛋白V缀合物一起孵育后,也可以将细胞固定在2%甲醛中,并在显微镜下观察。

3.2     在荧光显微镜下用适当的滤光片分析膜联蛋白V缀合物的凋亡细胞。

 

参考文献

Response of Mammalian cells to non-thermal intense narrowband pulsed electric fields
Authors: Sunao Katsuki, Yulan Li, Daiki Miyakawa, Ryo Yamada, Nobuaki Onishi, Soowon Lim
Journal: (2017): 1358–1361

 

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产品名称 货号
Annexin V, TRITC标记 Cat#20031

说明书
Annexin V, FITC标记.pdf

荧光底物FITC-C6-D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMK 货号13418-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

荧光底物FITC-C6-D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMK

荧光底物FITC-C6-D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMK

荧光底物FITC-C6-D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMK    货号13418 货号 13418 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 12588
Ex (nm) 491 Em (nm) 516
分子量 1037.07 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

荧光底物FITC-C6-D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMK是美国AAT Bioquest生产的荧光底物,半胱天冬酶的激活在细胞凋亡中起重要作用。 FITC-C6-D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMK为活细胞中活化的胱天蛋白酶-3的灵敏检测提供了方便的手段。 FITC-C6-D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMK是细胞可渗透的,无毒的,并且在凋亡细胞中不可逆地结合活化的胱天蛋白酶-3。 基于我们的内部研究,与我们测试的其他DEVD-FMK探针相比,FITC-C6-D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMK具有最高的信号/背景比。 FITC标签允许通过荧光显微镜,流式细胞术或荧光板读数器直接检测凋亡细胞中活化的半胱天冬酶。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的荧光底物FITC-C6-D(OMe)E(OMe)VD(OMe)-FMK。

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产品说明书

样品实验方案

以下说明书仅提供指南,实际应根据您的具体需求进行修改。

1.使用AMC,AFC,pNA,R110和ProRed底物的一般溶液Caspase测定

1.1在DMSO中制备10mM储备溶液。

1.2制备2X半胱天冬酶底物(50μM)测定溶液,如下所示:

50 L基质原液

100L DTT(1M)

400L EDTA(100 mM)

10mL Tris缓冲液(20mM),pH = 7.4

1.3将等体积的半胱天冬酶标准品或样品与2X半胱天冬酶底物测定溶液(来自步骤1.2)混合,并在室温下孵育溶液至少1小时。

1.4使用荧光酶标仪检测荧光,或使用吸光度酶标仪检测吸光度。

 

2.细胞Caspase检测使用细胞渗透FMK半胱天冬酶探针

2.1在DMSO中制备2-5mM储备溶液。

2.2根据需要对细胞进行处理。

2.3通过用20mM Hepes缓冲液(HHBS)稀释Hanks中的DMSO储备溶液(来自步骤2.1),制备2X可渗透的半胱天冬酶底物(20μM)测定溶液。

2.4用2X半胱天冬酶底物测定溶液(来自步骤2.3)混合等体积的处理细胞,并将细胞在37℃,5%CO 2培养箱中孵育至少1小时。

2.5用HHBS洗涤细胞至少一次。

2.6用流式细胞仪,荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

 

3.细胞Caspase检测使用细胞渗透性FMK Caspase探针(仅适用于#13470-13476)

3.1通过向小瓶中加入50μLDMSO制备250X储备溶液。

3.2根据需要对细胞进行处理。

3.3将250 X DMSO储备溶液(来自步骤3.1)以1:250的比例(例如2 uL至500 uL细胞)添加到细胞溶液中,并将细胞在37°C,5%CO 2培养箱中孵育1 小时。

3.4用HHBS洗涤细胞至少一次。

3.5用流式细胞仪,荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

 

参考文献

Activation of caspase-like activity and poly (ADP-ribose) polymerase degradation during sporulation in Aspergillus nidulans
Authors: Thrane C, Kaufmann U, Stummann BM, Olsson S.
Journal: Fungal Genet Biol (2004): 361

[Antitumor mechanism of 3-bromopropionylamino benzoylurea on leukemia and lymphoma]
Authors: Li JN, Song DQ, Jiang JD.
Journal: Yao Xue Xue Bao (2004): 491

Caspase-dependent and independent cell death in rat hepatoma 5123tc cells
Authors: Pandey S, Smith B, Walker PR, Sikorska M.
Journal: Apoptosis (2000): 265

C-myc antisense oligodeoxynucleotides can induce apoptosis and down-regulate Fas expression in rheumatoid synoviocytes
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Journal: Arthritis Rheum (1999): 954

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