样品实验方案

溶液配制

储备溶液配制

Buccutite MTA-Dye 650储备溶液（10 mM）：将200 uL DMSO添加到Buccutite MTA-Dye 650小瓶中以制备10 mM储备溶液。注意：Buccutite MTA-Dye 650储备溶液应在制备后储存在-20°C下，如果避免反复的冻融循环，则应稳定保存2个月。

实验步骤

MTA样品制备

1. 使用100 ug MTA修饰的样品（例如：用MTA组修饰的抗体或其他蛋白质，分子量应高于15,000）。
2. 用PBS将体积调节至100 uL。

运行MTA分析

1. 将10 uL 10 mM Buccutite MTA-Dye 650储备溶液添加到MTA样品溶液中。
2. 将反应混合物保持在室温下，旋转或摇动60分钟。
3. 准备离心柱（Cat＃60500）进行样品纯化。
4. 用干净的收集管将反应混合物上样至离心柱。将所有溶液加载到色谱柱后，在顶部添加10 uL PBS，然后以1,000 x g的速度离心色谱柱5分钟。
5. 用收集管收集溶液。
6. 用0.5 mL石英比色皿或Nanodrop测量吸收光谱。 注意：用PBS将洗脱液稀释5-10倍，测量800 nm至250 nm的吸收光谱，或仅读取280 nm和654 nm处的吸光度值。
7. 使用以下公式计算MTA＃（MTA摩尔数/分子摩尔数）。MTA＃=（A654 / 250000）/ {（A280-0.09 X A654）/ EC}

A280：在280 nm处洗脱液的吸光度
A654：在654 nm处洗脱液的吸光度
EC：样品的消光系数（M ^-1 cm ^-1）

数据分析

MTA计算：

样品：  GxM IgG-MTA，100μLPBS中的100 ug

用Nanodrop分光光度计测量吸光度：

A280 nm = 0.922，A654 nm = 2.270，CF280 = 0.09，654 nm时的
EC（Buccutite MTA-Dye 650）= 250,000 M ^-1 cm ^-1
280 nm IgG的IgG EC = 210,000 M ^-1 cm ^-1
MTA＃ （每摩尔IgG的MTA摩尔数）=（2.270 / 250000）/ {（0.922-0.09 X 2.270）/ 210000} = 2.6

图示

图1. Buccutite 交联技术提供了最方便，最有效的交联方法，以高共轭产率连接两个生物分子。我们的方法使用一对交联剂：Buccutite MTA和Buccutite FOL。MTA被添加到一个分子，而FOL被添加到另一分子。交联反应是通过将Molecule-1-Buccutite MTA和Molecule-2-Buccutite FOL混合而引发的。该交联反应在极其温和和中性的条件下发生，不需要任何催化剂。