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ReadiLink DIG（地高辛） 缺口平移 dsDNA 标记试剂盒 货号17473-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

ReadiLink DIG（地高辛） 缺口平移 dsDNA 标记试剂盒

ReadiLink DIG（地高辛） 缺口平移 dsDNA 标记试剂盒

ReadiLink DIG（地高辛） 缺口平移 dsDNA 标记试剂盒 货号17473 货号 17473 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 20 Reactions 价格 3612
Ex (nm) Em (nm)
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

ReadiLink DIG（地高辛） 缺口平移 dsDNA 标记试剂盒提供了一种简单有效的方法，可以使用明亮且光稳定的 DIG（地高辛）染料标记双链 DNA 样本。标记试剂盒为 DNA 标记所需的完整工作流程提供了所有必要的试剂。该方法使用 DNAse 和 DNA 聚合酶的组合来切割 DNA 螺旋的一条链，DIG（地高辛）染料与之结合。此外，该试剂盒允许用户通过调整 DIG（地高辛）-dUTP 偶联物与 dTTP 的比例来优化掺入和产品大小。它与多种样品材料兼容，包括细菌人工染色体 (BAC) DNA、人类基因组 DNA、纯化的 PCR 产物、超螺旋和线性化质粒 DNA。得到的 DIG（地高辛）标记 DNA 可用于多种分子生物学技术，例如荧光原位杂交 (FISH)。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的ReadiLink DIG（地高辛） 缺口平移 dsDNA 标记试剂盒。

 

适用仪器

热循环仪  
仪器规格： N/A

产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 准备 DNA 样本
  2. 向试管中加入试剂
  3. 短暂混合并离心
  4. 在 15°C 下孵育 60 分钟
  5. 将反应置于冰上，然后加入停止溶液并在 65°C 下加热
  6. 使用前在冰上放置 5 分钟或在 4°C 下储存
  7. 纯化标记的 DNA

 注：在开始实验之前，解冻所有成分。在开始标记过程之前，将所有试剂短暂涡旋至底部。

 

实验步骤

表 1. 各反应每管试剂组成

成分 规格
DNA样本 1 µg DNA 在无核酸酶水中稀释至终体积 34 µL
Nick Translation 缓冲液 5 µL
dNTP 混合物 5 µL
dTTP 2 µL
DIG（地高辛）-dUTP 工作溶液 2 µL
DNA聚合酶I 1 µL
DNA酶I 1 µL
总容积 50 µL

可以优化DIG（地高辛）-dUTP（组分 A）：dTTP（组分 E）的比例以获得最佳标记条件。
可以优化孵育时间以获得更好的标记。 更长的孵育时间将有助于更多的标记，但可能会缩短最终产品的尺寸。
1.向干净的（无核酸酶）0.5 mL 微型离心管或 0.2 mL PCR 管中，按表 1 中所示的顺序添加试剂。
2.通过短暂的涡旋和短暂的离心小心混合试剂。
3.将反应在 15°C 下孵育 60 分钟。
4.孵育后，将反应置于冰上。
5.要终止反应，请添加 5 µL 停止溶液并将样品加热至 65 °C。
6.使用前在冰上放置 5 分钟或在 4°C 下储存。
7.纯化标记的 DNA。

 
参考文献

[In situ hybridization of cells infected by Chlamydia trachomatis].
Authors: Mortemousque, B and Verin, P and Bebear, C and de Barbeyrac, B and Gendre, P
Journal: Revue internationale du trachome et de pathologie oculaire tropicale et subtropicale et de sante publique : organe de la Ligue contre le trachome avec la collaboration de l’International Organization against Trachoma et des organisation… (1994): 47-62

Use of M13 single-stranded DNA digoxigenin labelled probe for detection of human parvovirus B19 viraemia.
Authors: Prato, C and Paper, T and Morinet, F
Journal: Journal of virological methods (1991): 227-31

说明书
ReadiLink DIG（地高辛） 缺口平移 dsDNA 标记试剂盒.pdf

ReadiLink DIG（地高辛） 缺口平移 dsDNA 标记试剂盒 货号17472-AAT Bioquest荧光染料

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ReadiLink DIG（地高辛） 缺口平移 dsDNA 标记试剂盒

ReadiLink DIG（地高辛） 缺口平移 dsDNA 标记试剂盒

ReadiLink DIG（地高辛） 缺口平移 dsDNA 标记试剂盒 货号17472 货号 17472 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 10 Reactions 价格 2388
Ex (nm) Em (nm)
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

ReadiLink DIG（地高辛） 缺口平移 dsDNA 标记试剂盒提供了一种简单有效的方法，可以使用明亮且光稳定的 DIG（地高辛）染料标记双链 DNA 样本。标记试剂盒为 DNA 标记所需的完整工作流程提供了所有必要的试剂。该方法使用 DNAse 和 DNA 聚合酶的组合来切割 DNA 螺旋的一条链，DIG（地高辛）染料与之结合。此外，该试剂盒允许用户通过调整 DIG（地高辛）-dUTP 偶联物与 dTTP 的比例来优化掺入和产品大小。它与多种样品材料兼容，包括细菌人工染色体 (BAC) DNA、人类基因组 DNA、纯化的 PCR 产物、超螺旋和线性化质粒 DNA。得到的 DIG（地高辛）标记 DNA 可用于多种分子生物学技术，例如荧光原位杂交 (FISH)。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的ReadiLink DIG（地高辛） 缺口平移 dsDNA 标记试剂盒。

 

适用仪器

热循环仪  
仪器规格： N/A

产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 准备 DNA 样本
  2. 向试管中加入试剂
  3. 短暂混合并离心
  4. 在 15°C 下孵育 60 分钟
  5. 将反应置于冰上，然后加入停止溶液并在 65°C 下加热
  6. 使用前在冰上放置 5 分钟或在 4°C 下储存
  7. 纯化标记的 DNA

 注：在开始实验之前，解冻所有成分。在开始标记过程之前，将所有试剂短暂涡旋至底部。

 

实验步骤

表 1. 各反应每管试剂组成

成分 规格
DNA样本 1 µg DNA 在无核酸酶水中稀释至终体积 34 µL
Nick Translation 缓冲液 5 µL
dNTP 混合物 5 µL
dTTP 2 µL
DIG（地高辛）-dUTP 工作溶液 2 µL
DNA聚合酶I 1 µL
DNA酶I 1 µL
总容积 50 µL

可以优化DIG（地高辛）-dUTP（组分 A）：dTTP（组分 E）的比例以获得最佳标记条件。
可以优化孵育时间以获得更好的标记。 更长的孵育时间将有助于更多的标记，但可能会缩短最终产品的尺寸。
1.向干净的（无核酸酶）0.5 mL 微型离心管或 0.2 mL PCR 管中，按表 1 中所示的顺序添加试剂。
2.通过短暂的涡旋和短暂的离心小心混合试剂。
3.将反应在 15°C 下孵育 60 分钟。
4.孵育后，将反应置于冰上。
5.要终止反应，请添加 5 µL 停止溶液并将样品加热至 65 °C。
6.使用前在冰上放置 5 分钟或在 4°C 下储存。
7.纯化标记的 DNA。

 
参考文献

[In situ hybridization of cells infected by Chlamydia trachomatis].
Authors: Mortemousque, B and Verin, P and Bebear, C and de Barbeyrac, B and Gendre, P
Journal: Revue internationale du trachome et de pathologie oculaire tropicale et subtropicale et de sante publique : organe de la Ligue contre le trachome avec la collaboration de l’International Organization against Trachoma et des organisation… (1994): 47-62

Use of M13 single-stranded DNA digoxigenin labelled probe for detection of human parvovirus B19 viraemia.
Authors: Prato, C and Paper, T and Morinet, F
Journal: Journal of virological methods (1991): 227-31

说明书
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DIG Styramide * DIG酪胺的优异替代品* 货号45305-AAT Bioquest荧光染料

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DIG Styramide * DIG酪胺的优异替代品*

DIG Styramide * DIG酪胺的优异替代品*

DIG Styramide * DIG酪胺的优异替代品* 货号45305 货号 45305 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 Slides 价格 5244
Ex (nm) Em (nm)
分子量 840.07 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

Power Styramide 信号放大（PSA）系统是可以检测细胞和组织中极低丰度靶标最灵敏的方法之一，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。当与iFluor 染料结合使用时，iFluor 染料标记的Styramide 缀合物可以产生比标准ICC 更高精度和灵敏度（超过100倍）的荧光信号。PSA利用辣根过氧化物酶（HRP）来催化活性原位共价沉积荧光团，PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多，这使PSA系统比传统的TSA试剂更快，更耐用，更灵敏。与酪酰胺试剂相比，Styramide 缀合物具有更高效率标记靶标的能力，因此产生更高的荧光信号。与标准直接偶联法或酪酰胺扩增相比、与相同水平的敏感性相比，Styramide 偶联物还可以明显减少一级抗体的消耗。DIG Styramide是DIG酪胺的优良替代品，后者广泛用于众所周知的酪胺信号放大（TSA）。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的DIG Styramide。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 修复/透化细胞或组织
  2. 在封闭缓冲液中添加一抗
  3. 加入结合HRP的二抗
  4. 准备Styramide工作溶液，并在室温下添加到细胞或组织中（5-10分钟）

 

溶液配制

储备溶液配制

1.Styramide 储备溶液（100X）：将100 µL DMSO加入iFluor 染料标记的含有Styramide 缀合物的小瓶中，制成100X Styramide 储备溶液。注意：一次性使用等分试样，并将未使用的100X储备溶液在2-8 ℃的冰箱避光保存，并避免重复冻融循环。

2.H2O2储备溶液：将90 µL的ddH2O加入10 µL 3％过氧化氢中（未提供）。注意：在使用当天准备新鲜的100X H2O2溶液，做到现用现配。

 

工作溶液配制

1.Styramide 工作溶液（1X）：每1 mL反应缓冲液需要10 µL Styramide 储备溶液和10 µL H2O2储备溶液。注意：盖玻片或96孔板中每孔所需100 µL Styramide 工作溶液，（提供的Styramide 足以进行100次测试。）注意：必须在制备后2小时内使用Styramide 工作溶液，并避免直接暴露在光线下。

2.二级抗体-HRP工作溶液：根据所使用的二抗说明书中的建议配制适当浓度的二级抗体-HRP工作溶液。

3.Anti-DIG抗体工作溶液：按照相应说明书的步骤调配适当浓度的Anti-DIG抗体缀合物工作溶液。 

 

实验步骤

（该步骤适用于细胞或组织染色）

细胞固定和透化

1.在室温下用3.7％甲醛或低聚甲醛的PBS固定细胞或组织20分钟。

2.用PBS冲洗细胞或组织两次。

3.在室温下用0.1％Triton X-100溶液透化细胞1-5分钟。

4.用PBS冲洗细胞或组织两次。

 

组织固定，脱石蜡和补液

（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）

 

过氧化物酶标记

1.可选：通过在过氧化物酶淬灭溶液（例如3％过氧化氢）中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性，然后在室温下用PBS冲洗两次。

2.可选：如果使用结合HRP的链霉亲和素，建议通过生物素封闭缓冲液封闭内源性生物素。

3.在4°C下用封闭溶液（例如含1％BSA的PBS）封闭30分钟。

4.除去封闭溶液，并添加稀释好的一抗，在室温下放置60分钟或在4°C下放置过夜。

5.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

6.将100 µL二级抗体-HRP工作溶液添加到每个样品中，并在室温下孵育60分钟。注意：孵育时间和浓度可以根据信号强度而变化。

7.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

 

Styramide标记

1.向每个样品中添加100 µL Styramide 工作溶液，并在室温下孵育5-10分钟。 注意：如果您观察到非特异性信号，则可以缩短Styramide的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照确定样品的最佳孵育时间，或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的Styramide。

2.用PBS冲洗3次。

 

DIG标记

1.将100 µL二级抗DIG抗体缀合物工作溶液加到于每个样品中，并在室温下孵育60分钟。

2.用PBS洗涤3次，每次5分钟。

 

复染和荧光成像

1.根据需要对细胞或组织样本进行复染。AAT提供了一系列核复染色试剂，如表1所示。请按照试剂附带的说明进行操作。

2.加上盖玻片。

3.使用适当的滤波器观察Styramide的荧光信号。

表1.建议用于核复染色的产品。 

货号 产品名称 Ex/Em(nm)
17548 核蓝 DCS1 350/461
17550 核绿 DCS1 503/526
17551 核橙 DCS1 528/576
17552 核红 DCS1 642/660

 

图示

 

DIG Styramide * DIG酪胺的优异替代品* 货号45305

图1.Power Styramide 信号放大（PSA）系统是可以检测细胞和组织中极低丰度的靶标最灵敏的方法之一，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。与iFluor染料结合使用后具有更高荧光强度、更高的光稳定性和增强的水溶性，iFluor染料标记的Styramide缀合物可以产生比标准ICC /明显更高的精度和灵敏度（超过100倍）的荧光信号。PSA利用辣根过氧化物酶（HRP）的催化活性原位共价沉积荧光团。PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多，这使PSA系统比传统的TSA试剂更快，更耐用，更灵敏。
DIG Styramide * DIG酪胺的优异替代品* 货号45305

图2.用兔抗Tubulin一抗标记的HeLa细胞的荧光图像。然后将细胞分别用HRP标记的山羊抗兔IgG二抗和iFluor Styramide（左）或AlexaFluor 350酪酰胺（中和右）染色。使用DAPI滤光片组拍摄荧光图像，并相应地标记曝光时间。在相同的曝光时间（25毫秒）下，iFluor 350 Styramide 显示出比AlexaFluor 350酪酰胺明显更高的荧光强度。AlexaFluor 350酪酰胺需要更长的曝光时间（125毫秒）才能使染色可视化。

 

说明书
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DIG-HRP缀合物 货号11023-AAT Bioquest荧光染料

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DIG-HRP缀合物

DIG-HRP缀合物

DIG-HRP缀合物 货号11023 货号 11023 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 1836
Ex (nm) Em (nm)
分子量 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：11023

产品名称：DIG-HRP缀合物

规格：1 mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

 

产品介绍

地高辛配基（DIG）缀合的辣根过氧化物酶（HRP）是用于ELISA和其他DIG缀合测定进行生物检测的出色工具。抗DIG抗体可选择性地与DIG结合，结合的HRP通过适当的HRP底物系统通过颜色，荧光或发光为检测提供酶活性。该产品主要用于抗DIG抗体的一致性测量，主要用于ELISA应用。

 

参考文献

Genosensors for differential detection of Zika virus.
Authors: Alzate, Daniel and Cajigas, Sebastian and Robledo, Sara and Muskus, Carlos and Orozco, Jahir
Journal: Talanta (2020): 120648

Responsive surface bioaffinity binding to construct flexible and sensitive electrochemical aptasensors.
Authors: Liu, Ying and Zhu, Zhencai and Wang, Chao and Gao, Rui and Yang, Xiaoyan and Liu, Shufeng
Journal: The Analyst (2019): 2130-2137

Designing a new biosensor “DNA ELISA” to detect Escherichia coli using genomic DNA and comparison of this method to PCR-ELISA.
Authors: Hashemi, Elaheh and Forouzandeh, Mehdi
Journal: Journal of enzyme inhibition and medicinal chemistry (2018): 722-725

Accurate Electrochemistry Analysis of Circulating Methylated DNA from Clinical Plasma Based on Paired-End Tagging and Amplifications.
Authors: Chen, Feng and Wang, Xuyao and Cao, Xiaowen and Zhao, Yongxi
Journal: Analytical chemistry (2017): 10468-10473

High Resolution Fluorescent In Situ Hybridization in Drosophila Embryos and Tissues Using Tyramide Signal Amplification.
Authors: Jandura, Allison and Hu, Jack and Wilk, Ronit and Krause, Henry M
Journal: Journal of visualized experiments : JoVE (2017)

TFDP3 was expressed in coordination with E2F1 to inhibit E2F1-mediated apoptosis in prostate cancer.
Authors: Ma, Yueyun and Xin, Yijuan and Li, Rui and Wang, Zhe and Yue, Qiaohong and Xiao, Fengjing and Hao, Xiaoke
Journal: Gene (2014): 253-9

An enzyme substrate binding aptamer complex based time-resolved fluorescence sensor for the adenosine deaminase detection.
Authors: Zhang, Kai and Yang, Qianlu and Zhang, Jue and Fu, Lixin and Zhou, Yan and Wu, Bing and Xie, Minhao and Huang, Biao
Journal: Biosensors & bioelectronics (2013): 87-92

Radioactive in situ hybridization for detecting diverse gene expression patterns in tissue.
Authors: Chen, Chun-Chun and Wada, Kazuhiro and Jarvis, Erich D
Journal: Journal of visualized experiments : JoVE (2012)

A novel homogeneous Biotin-digoxigenin based assay for the detection of human anti-therapeutic antibodies in autoimmune serum.
Authors: Qiu, Zhihua Julia and Ying, Yong and Fox, Michael and Peng, Kun and Lewin-Koh, Sock-Cheng and Coleman, Daniel and Good, Jeremy and Lowe, John and Rahman, Amena and Yang, Jihong and Jiang, Jenny and Quarmby, Valerie and Song, An
Journal: Journal of immunological methods (2010): 101-11

Double-tagging polymerase chain reaction with a thiolated primer and electrochemical genosensing based on gold nanocomposite sensor for food safety.
Authors: Marques, Paulo R Brasil de Oliveira and Lermo, Anabel and Campoy, Susana and Yamanaka, Hideko and Barbé, Jordi and Alegret, Salvador and Pividori, M Isabel
Journal: Analytical chemistry (2009): 1332-9

说明书
DIG-HRP缀合物.pdf