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Cell Navigator NBD神经酰胺高尔基体染色试剂盒 绿色荧光
货号 | 22750 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 | |
规格 | 100 Tests | 价格 | 2604 | |
Ex (nm) | 467 | Em (nm) | 538 | |
分子量 | 溶剂 | |||
产品详细介绍 |
简要概述
高尔基体是大多数真核细胞胞质内囊泡和折叠膜的复合体,参与分泌和细胞内运输。它修饰内质网(ER)中内置的蛋白质和脂质,并准备将其输出到细胞外。它还在脂质在整个细胞中的运输和溶酶体的形成中起着重要作用。该Cell Navigator™NBD神经酰胺高尔基染色试剂盒提供了一种简便,快速的方法,可以选择性地对活细胞或醛固定细胞中的高尔基染色。将C6 NBD神经酰胺与牛血清白蛋白(C6-NBD-Ceramide-BSA)形成复合物给予细胞。高尔基体通过形成相应的荧光代谢产物而被染色。
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适用仪器
荧光显微镜 | |
激发: | 488nm |
发射: | 525nm |
推荐孔板: | 黑色透明 |
滤波片: | FITC滤波片组 |
产品说明书
样品实验方案
简要概述
- 根据需要处理细胞
- 加入C6 NBD神经酰胺工作溶液,在室温或37°C下孵育15〜30分钟
- 更换染色缓冲液,在室温或37°C下孵育15〜30分钟
- 使用FITC滤镜套件在显微镜下观察
- 可选:用4%甲醛固定细胞
储备溶液配制
除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。
1. C6 NBD神经酰胺储备溶液(100X):
将100 µL DMSO(组分C)加入小瓶C6 NBD神经酰胺(组分A)中并充分混合。注:将未使用的C6 NBD神经酰胺原液在-20℃保存。避免冻融循环。
工作溶液配制
1. C6 NBD神经酰胺工作液:
将10 µL NBD神经酰胺原液(100X)添加到990 µL染色缓冲液(组分B)中,制成NBD神经酰胺工作液。
可选:将10 µL Hoechst 33342(组分D)添加到1mL NBD神经酰胺工作溶液中以进行核染色。
操作步骤
- 接种并根据需要处理细胞。
- 直接在细胞培养基中加入100µL C6 NBD神经酰胺工作溶液。
- 在室温或37°C下孵育15〜30分钟。
- 除去C6 NBD神经酰胺工作溶液,并用100 µL /孔的染色缓冲液(组分B)代替。
- 在室温或37°C下孵育10〜15分钟。
- 在装有FITC滤光片的荧光显微镜下观察。
- 从步骤4中除去染色缓冲液,然后向每个孔中添加100 µL /孔/ 96孔板的4%甲醛固定缓冲液(未提供)。 注意:对于非贴壁细胞,请添加所需量(例如2X106细胞/ mL)的4%甲醛固定液。(可选)
- 在室温下将平板孵育20至30分钟。 去除固定剂。 用PBS洗涤细胞2-3次,然后用100 µL /孔的染色缓冲液(组分B)替换。(可选)
图例
图1. HeLa细胞中NBD神经酰胺高尔基染色的荧光图像。 细胞在37°C下用100 µL C6 NBD神经酰胺工作溶液染色20分钟,然后用Hoechst 33342染色。 高尔基体被认为是部分包围细胞核的强烈荧光线状结构。
参考文献
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An inducible ER-Golgi tether facilitates ceramide transport to alleviate lipotoxicity
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Ceramide Transport from the Endoplasmic Reticulum to the Trans Golgi Region at Organelle Membrane Contact Sites
Authors: K. Hanada
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Endoplasmic reticulum is the sorting core facility in the Golgi-lacking protozoan Giardia lamblia
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