Amplite 荧光法神经鞘磷脂检测试剂盒 红色荧光 货号13625-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Amplite 荧光法神经鞘磷脂检测试剂盒 红色荧光

Amplite 荧光法神经鞘磷脂检测试剂盒 红色荧光

Amplite 荧光法神经鞘磷脂检测试剂盒  红色荧光     货号13625 货号 13625 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 Tests 价格 3924
Ex (nm) 571 Em (nm) 584
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法神经鞘磷脂检测试剂盒  红色荧光 是美国AAT Bioquest生产的用于检测鞘磷脂的试剂盒,鞘磷脂主要发现在细胞外表面,特别是神经组织中,其在信号传导中扮演着重要角色。有研究发现,鞘磷脂在尼曼匹克症和无脂蛋白血症中存在不正常的积累。Amplite鞘磷脂荧光法检测试剂盒采用了最灵敏的方法检测中性鞘磷脂的活性和筛选其抑制剂。这个试剂盒利用独特的Amplite Red作为荧光探针直接定量被鞘磷脂酶水解作鞘磷脂所产生的磷酸胆碱的含量。它可以用来检测血液、细胞提取物或者其他溶液中鞘磷脂的含量。Amplite Red的荧光强度与磷酸胆碱产生成比例,从而实现鞘磷脂酶的定量。本试剂盒可用于96或384微孔板分析,并且无需任何额外步骤,就可以轻易地实现自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Amplite 荧光法神经鞘磷脂检测试剂盒。 

点击查看光谱

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 540nm
发射 590nm
cutoff: 570nm
推荐孔板: 黑色孔板

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备SMase工作溶液(50 µL)
2.加入鞘磷脂标准品或测试样品(50 µL)
3.在37°C下孵育1-2小时
4.加入鞘磷脂测定混合物(50 µL)
5.在室温下孵育0.5-2小时
6.监视Ex / Em = 540/590 nm处的荧光强度(在570 nm处截止)

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 SMase储备溶液(100X):
将50 µL含0.1%BSA的PBS加入鞘磷脂酶(小瓶B)中,制成SMase储备液(100X)。

1.2 Amplite Red储备液(200X):
将80 µL DMSO(组分G)加入小瓶Amplite Red(组分C)中,制成200X Amplite Red储备液,避光。 注意:Amplite Red在存在硫醇(例如DTT和2-巯基乙醇)的情况下不稳定。 反应中DTT或2-巯基乙醇的终浓度应低于10 µM。 Amplite Red在高pH(> 8.5)时也不稳定。 反应应在pH 7-8下进行。建议将pH 7.4用于测定缓冲液。

 

2.标准溶液

鞘磷脂标准品
向1000 µL SMase反应缓冲液(组分D)中加入2 µL 50 mM鞘磷脂(组分F),得到100 µM鞘磷脂标准溶液(SM7)。取100 µM鞘磷脂标准溶液进行1:3连续稀释,以得到连续稀释的鞘磷脂标准品(SM6-SM1)。

 

3.工作溶液

3.1 鞘磷脂酶(SMase)工作液:
将100X SMase储液的全部内容物(50 µL)加入5 mL SMase Reaction Buffer(组分D)中,并混合均匀,以制备SMase工作溶液。 注意:应立即使用SMase工作解决方案。

3.2 鞘磷脂工作液:
将全部含量(5 mL)的测定缓冲液(组分E)添加到酶混合瓶(组分A)中,并充分混合。 在开始测定之前,将25 µL 200X Amplite Red储备液加到Enzyme Mix溶液瓶中以制成鞘磷脂测定混合物。 注意:鞘磷脂测定混合物应立即使用,并避免光照。 较长的存储时间可能会导致较高的测定背景。

点击查看细胞制备方案

 

样品操作及实验分析

表1.黑色素96孔微孔板中鞘磷脂标准品和测试样品的布局。 SM =鞘磷脂标准品(SM1-SM7,0.1至100 µM),BL =空白对照,TS =测试样品。

BL BL TS TS
SM1 SM1
SM2 SM2
SM3 SM3    
SM4 SM4    
SM5 SM5    
SM6 SM6    
SM7 SM7    

表2.每个孔的试剂组成

容积 试剂
SM1-SM7 50ul 连续稀释液(0.1至100 µM)
BL 50ul SMase反应缓冲液
TS 50ul 测试样本

1.根据表1和2中提供的布局,准备鞘磷脂标准品(SM),空白对照(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25 µL试剂代替50 µL。注意:根据需要处理细胞或组织样本。

2.将50 µL SMase工作溶液添加到鞘磷脂标准品,空白对照和测试样品的每个孔中,使鞘磷脂的总测定体积为100 µL /孔。对于384孔板,向每个孔中添加25 µL SMase工作溶液,总体积为50 µL /孔。

3.将反应混合物在37°C下孵育1-2小时。

4.将50 µL鞘磷脂测定混合物添加到鞘磷脂标准品,空白对照和测试样品的每个孔中,使鞘磷脂测定总体积为150 µL /孔。对于384孔板,将25 µL鞘磷脂测定混合物加到每个孔中,总体积为75 µL /孔。

5.将反应混合物在室温下孵育1-2小时(避光)。

6.使用荧光酶标仪在Ex / Em = 540/590 nm(在570 nm截止)处监测荧光的增加。

 

参考文献

Doxepin mitigates noise induced neuronal damage in primary auditory cortex of mice via suppression of acid sphingomyelinase/ceramide pathway
Authors: Yu-Ting Su, Xing-Xing Meng, Xi Zhang, Yi-Bin Guo, Hai-Jun Zhang, Yao-Ping Cheng, Xiao-Ping Xie, Yao-Ming Chang, Jun-Xiang Bao
Journal: The Anatomical Record (2017)

New Aspects of Silibinin Stereoisomers and their 3-O-galloyl Derivatives on Cytotoxicity and Ceramide Metabolism in Hep G2 hepatocarcinoma Cell Line
Authors: Mahdi Mashhadi Akbar Boojar, Shahram Ejtemaei Mehr, Mahsa Hassanipour, Masoud Mashhadi Akbar Boojar, Ahmad Reza Dehpour
Journal: Iranian Journal of Pharmaceutical Research (2016): 421–433

Riccardin DN induces lysosomal membrane permeabilization by inhibiting acid sphingomyelinase and interfering with sphingomyelin metabolism in vivo
Authors: Lin Li, Huanmin Niu, Bin Sun, Yanan Xiao, Wei Li, Huiqing Yuan, Hongxiang Lou
Journal: Toxicology and Applied Pharmacology (2016): 175–184

Mitochondrial respiration controls lysosomal function during inflammatory T cell responses
Authors: Francesc Baixauli, Rebeca Acín-Pérez, Carolina Villarroya-Beltrí, Carla Mazzeo, Norman Nunez-Andrade, Enrique Gabandé-Rodriguez, Maria Dolores Ledesma, Alberto Blázquez, Miguel Angel Martin, Juan Manuel Falcón-Pérez
Journal: Cell metabolism (2015): 485–498

The ATP-binding cassette transporter-2 (ABCA2) regulates esterification of plasma membrane cholesterol by modulation of sphingolipid metabolism
Authors: Warren Davis
Journal: Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular and Cell Biology of Lipids (2014): 168–179

A high-throughput sphingomyelinase assay using natural substrate
Authors: Miao Xu, Ke Liu, Noel Southall, Juan J Marugan, Alan T Remaley, Wei Zheng
Journal: Analytical and bioanalytical chemistry (2012): 407–414

 

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产品名称 货号
Amplite NAD检测试剂盒 (荧光法)蓝色荧光 Cat#15280
Amplite NADP检测试剂盒(荧光法)蓝色荧光 Cat#15281
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说明书
Amplite 荧光法神经鞘磷脂检测试剂盒 红色荧光 .pdf

Amplite 荧光法酸性鞘磷脂酶检测试剂盒 红色荧光 货号13622-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Amplite 荧光法酸性鞘磷脂酶检测试剂盒 红色荧光

Amplite 荧光法酸性鞘磷脂酶检测试剂盒 红色荧光

Amplite 荧光法酸性鞘磷脂酶检测试剂盒 红色荧光    货号13622 货号 13622 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 200 Tests 价格 3924
Ex (nm) 571 Em (nm) 584
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法酸性鞘磷脂酶检测试剂盒 红色荧光是美国AAT Bioquest生产的用于检测鞘磷脂的试剂盒,鞘磷脂酶(SMase)是一种酶,负责将鞘磷脂(SM)切割成磷酸胆碱和神经酰胺。SMase的激活在细胞反应中起重要作用,例如细胞生长调节,细胞分化,细胞周期停滞和程序性细胞死亡。已经基于它们的阳离子依赖性和最佳作用pH鉴定了五种类型的鞘磷脂酶(SMase)。 它们是溶酶体酸性SMase,分泌锌依赖性酸性SMase,镁依赖性中性SMase,镁非依赖性中性SMase和碱性SMase。在五种类型的鞘磷脂酶中,溶酶体酸性SMase和镁依赖性中性SMase被认为是细胞应激反应中产生神经酰胺的主要因素。

我们的Amplite 荧光酸性鞘磷脂酶检测试剂盒是检测酸性SMase活性或筛选其抑制剂的最灵敏方法之一。该试剂盒使用Amplite™Red作为荧光探针,间接定量鞘磷脂酶(SMase)水解鞘磷脂(SM)产生的磷酸胆碱。Amplite Red的荧光强度与磷酸胆碱的形成成正比,因此与SMase活性成正比。 它可用于测量血液,细胞提取物或其他溶液中的SMase活性。该试剂盒是一种优化的“混合和读数”测定,与HTS液体处理仪器兼容。

点击查看光谱

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 540nm
发射 590nm
cutoff: 570nm
推荐孔板: 黑色孔板

产品说明书

96孔板测定示例

概述

准备鞘磷脂工作溶液(50μL)

添加SMase标准品和/或SMase测试样品(50μL)

在37°C孵育1-2小时加入鞘磷脂酶测定混合物(50μL)

在室温下孵育持续1-2小时

监测Ex / Em = 540/590 nm处的荧光强度(在570 nm处截止)

注意:在开始实验之前,在室温下解冻每个试剂盒组分的一个小瓶(或瓶)。

 

操作方法

 

1.准备鞘磷脂工作液:

将50μL鞘磷脂(组分B)加入5mL SMase反应缓冲液(组分D)中,并充分混合。

注意:应及时使用鞘磷脂工作液。

 

2.制备鞘磷脂酶标准品和/或含鞘磷脂酶的样品:

2.1将20μL含0.1%BSA的PBS加入到鞘磷脂酶标准品(组分F)的小瓶中,制成10单位/ mL鞘磷脂酶标准储备液。

注意:应将未使用的鞘磷脂酶标准储备液等分并保存在-20℃。

2.2将1μL的10单位/ mL鞘磷脂酶标准储备液(来自步骤2.1)加入1000μL测定缓冲液(组分E)中以产生10mU / mL鞘磷脂酶标准品。

注意:稀释的鞘磷脂标准储备液不稳定,应在4小时内使用。

2.3取500μL10mU / mL鞘磷脂酶标准品进行1至2次连续稀释,得到5,2.5,1.25,0.625,0.313,0.156,0.078和0 mU / mL连续稀释的鞘磷脂酶标准品。

2.4将连续稀释的鞘磷脂酶标准品和/或含鞘磷脂酶的测试样品加入固体黑色96孔微量培养板中,如说明书中的表1和2所示。

注意:根据需要处理您的细胞或组织样本。

2.5将50μL鞘磷脂工作溶液(来自步骤1)加入到鞘磷脂酶标准品,空白对照和测试样品的每个孔中(来自步骤2.4)。

2.6将反应混合物在37℃下孵育1-2小时。

 

3.准备200X Amplite Red原液:

将80μLDMSO(组分G)加入到Amplite Red(组分C)的小瓶中以制备200X Amplite Red储备溶液。

注意1:未使用的Amplite Red原液应等分并保存在-20℃(避光)。

注意2:在硫醇(如DTT和2-巯基乙醇)存在下,Amplite Red不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的最终浓度应低于10μM。 Amplite Red在高pH(> 8.5)下也不稳定。反应应在pH 7-8下进行。建议将pH 7.4用于测定缓冲液。

 

4.准备鞘磷脂酶测定混合物:

4.1将5 mL测定缓冲液(组分E)加入酶混合物瓶(组分A)中,并充分混合。

4.2在开始测定之前,将25μL的200X Amplite Red储备溶液(来自步骤3)加入到酶混合物溶液瓶(来自步骤4.1)中以制备鞘磷脂酶测定混合物。

注意:应立即使用鞘磷脂酶试验混合物并避光; 较长的储存可能会导致高分析背景。

 

5.运行鞘磷脂酶测定:

5.1将50μL鞘磷脂酶测定混合物(来自步骤4.2)加入鞘磷脂酶标准品,空白对照和测试样品(来自步骤2.4)的每个孔中,以使总鞘磷脂酶测定体积为150μL/孔。

注意:对于384孔板,每孔加入25μL样品,25μL鞘磷脂工作溶液和25μL鞘磷脂酶测定混合物。

5.2在室温下孵育反应混合物1-2小时(避光)。

5.3使用荧光酶标仪在Ex / Em = 540 / 590nm(在570nm处截止)观察荧光增加。

 

参考文献

Doxepin mitigates noise induced neuronal damage in primary auditory cortex of mice via suppression of acid sphingomyelinase/ceramide pathway
Authors: Yu-Ting Su, Xing-Xing Meng, Xi Zhang, Yi-Bin Guo, Hai-Jun Zhang, Yao-Ping Cheng, Xiao-Ping Xie, Yao-Ming Chang, Jun-Xiang Bao
Journal: The Anatomical Record (2017)

New Aspects of Silibinin Stereoisomers and their 3-O-galloyl Derivatives on Cytotoxicity and Ceramide Metabolism in Hep G2 hepatocarcinoma Cell Line
Authors: Mahdi Mashhadi Akbar Boojar, Shahram Ejtemaei Mehr, Mahsa Hassanipour, Masoud Mashhadi Akbar Boojar, Ahmad Reza Dehpour
Journal: Iranian Journal of Pharmaceutical Research (2016): 421–433

Riccardin DN induces lysosomal membrane permeabilization by inhibiting acid sphingomyelinase and interfering with sphingomyelin metabolism in vivo
Authors: Lin Li, Huanmin Niu, Bin Sun, Yanan Xiao, Wei Li, Huiqing Yuan, Hongxiang Lou
Journal: Toxicology and Applied Pharmacology (2016): 175–184

Mitochondrial respiration controls lysosomal function during inflammatory T cell responses
Authors: Francesc Baixauli, Rebeca Acín-Pérez, Carolina Villarroya-Beltrí, Carla Mazzeo, Norman Nunez-Andrade, Enrique Gabandé-Rodriguez, Maria Dolores Ledesma, Alberto Blázquez, Miguel Angel Martin, Juan Manuel Falcón-Pérez
Journal: Cell metabolism (2015): 485–498

The ATP-binding cassette transporter-2 (ABCA2) regulates esterification of plasma membrane cholesterol by modulation of sphingolipid metabolism
Authors: Warren Davis
Journal: Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular and Cell Biology of Lipids (2014): 168–179

A high-throughput sphingomyelinase assay using natural substrate
Authors: Miao Xu, Ke Liu, Noel Southall, Juan J Marugan, Alan T Remaley, Wei Zheng
Journal: Analytical and bioanalytical chemistry (2012): 407–414

说明书
Amplite 荧光法酸性鞘磷脂酶检测试剂盒 红色荧光.pdf

Amplite 荧光法鞘磷脂酶检测试剂盒 红色荧光 货号13621-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Amplite 荧光法鞘磷脂酶检测试剂盒 红色荧光

Amplite 荧光法鞘磷脂酶检测试剂盒 红色荧光

Amplite 荧光法鞘磷脂酶检测试剂盒 红色荧光     货号13621 货号 13621 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 200 Tests 价格 2604
Ex (nm) 571 Em (nm) 584
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法鞘磷脂酶检测试剂盒 红色荧光 是美国AAT Bioquest生产的用于检测鞘磷脂的试剂盒,阳离子依赖性和最佳作用pH鉴定了五种类型的鞘磷脂酶(SMase),它们是溶酶体酸性SMase,分泌锌依赖性酸性SMase,镁依赖性中性SMase,镁依赖性中性SMase和碱性SMase。 在这五种类型中,溶酶体酸性SMase和镁依赖性中性SMase被认为是细胞对应激反应中产生神经酰胺的主要候选物。

我们的Amplite 荧光鞘磷脂酶检测试剂盒为检测中性SMase活性或筛选其抑制剂提供了最灵敏的方法。该试剂盒使用Amplite Red作为荧光探针,间接定量鞘磷脂酶(SMase)水解鞘磷脂(SM)产生的磷酸胆碱。它可用于测量血液,细胞提取物或其他溶液中的SMase活性。Amplite Red的荧光强度与磷酸胆碱的形成成正比,因此与SMase活性成正比。Amplite Red使测定可在荧光强度模式或吸收模式下读取。该试剂盒是一种优化的“混合和读取”试验,可用于Smase活动的实时监测。我们的试剂盒13622已经开发用于监测酸性SMase活性。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Amplite 荧光法鞘磷脂酶检测试剂盒。 

点击查看光谱

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 540nm
发射 590nm
cutoff: 570nm
推荐孔板: 黑色孔板

产品说明书

96孔板测定示例

概述

准备鞘磷脂工作溶液(50μL)

添加SMase标准品和/或SMase测试样品(50μL)

在37°C孵育1-2小时加入鞘磷脂酶测定混合物(50μL)

在室温下孵育持续1-2小时

监测Ex / Em = 540/590 nm处的荧光强度(在570 nm处截止)

注意:在开始实验之前,在室温下解冻每个试剂盒组分的一个小瓶(或瓶)。

 

操作方法

 

1.准备鞘磷脂工作液:

将50μL鞘磷脂(组分B)加入5mL SMase反应缓冲液(组分D)中,并充分混合。

注意:应及时使用鞘磷脂工作液。

 

2.制备鞘磷脂酶标准品和/或含鞘磷脂酶的样品:

2.1将20μL含0.1%BSA的PBS加入到鞘磷脂酶标准品(组分F)的小瓶中,制成10单位/ mL鞘磷脂酶标准储备液。

注意:应将未使用的鞘磷脂酶标准储备液等分并保存在-20℃。

2.2将1μL的10单位/ mL鞘磷脂酶标准储备液(来自步骤2.1)加入1000μL测定缓冲液(组分E)中以产生10mU / mL鞘磷脂酶标准品。

注意:稀释的鞘磷脂标准储备液不稳定,应在4小时内使用。

2.3取500μL10mU / mL鞘磷脂酶标准品进行1至2次连续稀释,得到5,2.5,1.25,0.625,0.313,0.156,0.078和0 mU / mL连续稀释的鞘磷脂酶标准品。

2.4将连续稀释的鞘磷脂酶标准品和/或含鞘磷脂酶的测试样品加入固体黑色96孔微量培养板中,如说明书中的表1和2所示。

注意:根据需要处理您的细胞或组织样本。

2.5将50μL鞘磷脂工作溶液(来自步骤1)加入到鞘磷脂酶标准品,空白对照和测试样品的每个孔中(来自步骤2.4)。

2.6将反应混合物在37℃下孵育1-2小时。

 

3.准备200X AmpliteRed原液:

将80μLDMSO(组分G)加入到Amplite™Red(组分C)的小瓶中以制备200X Amplite™Red储备溶液。

注意1:未使用的Amplite™Red原液应等分并保存在-20℃(避光)。

注意2:在硫醇(如DTT和2-巯基乙醇)存在下,Amplite™Red不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的最终浓度应低于10μM。 Amplite™Red在高pH(> 8.5)下也不稳定。反应应在pH 7-8下进行。建议将pH 7.4用于测定缓冲液。

 

4.准备鞘磷脂酶测定混合物:

4.1将5 mL测定缓冲液(组分E)加入酶混合物瓶(组分A)中,并充分混合。

4.2在开始测定之前,将25μL的200X Amplite™Red储备溶液(来自步骤3)加入到酶混合物溶液瓶(来自步骤4.1)中以制备鞘磷脂酶测定混合物。

注意:应立即使用鞘磷脂酶试验混合物并避光; 较长的储存可能会导致高分析背景。

 

5.运行鞘磷脂酶测定:

5.1将50μL鞘磷脂酶测定混合物(来自步骤4.2)加入鞘磷脂酶标准品,空白对照和测试样品(来自步骤2.4)的每个孔中,以使总鞘磷脂酶测定体积为150μL/孔。

注意:对于384孔板,每孔加入25μL样品,25μL鞘磷脂工作溶液和25μL鞘磷脂酶测定混合物。

5.2在室温下孵育反应混合物1-2小时(避光)。

5.3使用荧光酶标仪在Ex / Em = 540 / 590nm(在570nm处截止)观察荧光增加。

 

参考文献

Doxepin mitigates noise induced neuronal damage in primary auditory cortex of mice via suppression of acid sphingomyelinase/ceramide pathway
Authors: Yu-Ting Su, Xing-Xing Meng, Xi Zhang, Yi-Bin Guo, Hai-Jun Zhang, Yao-Ping Cheng, Xiao-Ping Xie, Yao-Ming Chang, Jun-Xiang Bao
Journal: The Anatomical Record (2017)

New Aspects of Silibinin Stereoisomers and their 3-O-galloyl Derivatives on Cytotoxicity and Ceramide Metabolism in Hep G2 hepatocarcinoma Cell Line
Authors: Mahdi Mashhadi Akbar Boojar, Shahram Ejtemaei Mehr, Mahsa Hassanipour, Masoud Mashhadi Akbar Boojar, Ahmad Reza Dehpour
Journal: Iranian Journal of Pharmaceutical Research (2016): 421–433

Riccardin DN induces lysosomal membrane permeabilization by inhibiting acid sphingomyelinase and interfering with sphingomyelin metabolism in vivo
Authors: Lin Li, Huanmin Niu, Bin Sun, Yanan Xiao, Wei Li, Huiqing Yuan, Hongxiang Lou
Journal: Toxicology and Applied Pharmacology (2016): 175–184

Mitochondrial respiration controls lysosomal function during inflammatory T cell responses
Authors: Francesc Baixauli, Rebeca Acín-Pérez, Carolina Villarroya-Beltrí, Carla Mazzeo, Norman Nunez-Andrade, Enrique Gabandé-Rodriguez, Maria Dolores Ledesma, Alberto Blázquez, Miguel Angel Martin, Juan Manuel Falcón-Pérez
Journal: Cell metabolism (2015): 485–498

The ATP-binding cassette transporter-2 (ABCA2) regulates esterification of plasma membrane cholesterol by modulation of sphingolipid metabolism
Authors: Warren Davis
Journal: Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular and Cell Biology of Lipids (2014): 168–179

A high-throughput sphingomyelinase assay using natural substrate
Authors: Miao Xu, Ke Liu, Noel Southall, Juan J Marugan, Alan T Remaley, Wei Zheng
Journal: Analytical and bioanalytical chemistry (2012): 407–414

 

相关产品

产品名称 货号
Amplite NAD检测试剂盒 (荧光法)蓝色荧光 Cat#15280
Amplite NADP检测试剂盒(荧光法)蓝色荧光 Cat#15281

说明书
Amplite 荧光法鞘磷脂酶检测试剂盒 红色荧光 .pdf

Amplite 比色法鞘磷脂酶检测试剂盒 蓝色荧光 货号13620-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Amplite 比色法鞘磷脂酶检测试剂盒 蓝色荧光

Amplite 比色法鞘磷脂酶检测试剂盒 蓝色荧光

Amplite 比色法鞘磷脂酶检测试剂盒 蓝色荧光    货号13620 货号 13620 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 200 Tests 价格 2604
Ex (nm) 655 Em (nm)
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 比色法鞘磷脂酶检测试剂盒 蓝色荧光是美国AAT Bioquest生产的用于检测鞘磷脂的试剂盒,鞘磷脂酶(SMase)是一种酶,负责将鞘磷脂(SM)切割成磷酸胆碱和神经酰胺。细胞中SMase的激活在细胞反应中起重要作用。已经基于它们的阳离子依赖性和最佳作用pH鉴定了五种类型的鞘磷脂酶(SMase)。它们是溶酶体酸性SMase,分泌锌依赖性酸性SMase,镁依赖性中性SMase,镁依赖性中性SMase和碱性SMase。在这五种类型中,溶酶体酸性SMase和镁依赖性中性SMase被认为是细胞对应激反应中产生神经酰胺的主要候选物。

我们的Amplite 比色鞘磷脂酶检测试剂盒为检测中性SMase活性或筛选其抑制剂提供了一种灵敏的方法。 该试剂盒使用我们专有的Amplite Blue作为比色探针,间接定量鞘磷脂酶(SMase)水解鞘磷脂(SM)产生的磷酸胆碱。它可用于测量血液,细胞提取物或其他溶液中的SMase活性。655nm处的光吸收与磷酸胆碱的形成成比例,因此与SMase活性成比例。该试剂盒是一种优化的“混合和读数”分析,与HTS液体处理仪器兼容。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Amplite 比色法鞘磷脂酶检测试剂盒 。 

 

适用仪器


光吸收酶标仪  
吸收: 655nm
推荐孔板: 透明底板

产品说明书

96孔板测定示例

概述

准备鞘磷脂工作溶液(50μL)

添加SMase标准品和/或SMase测试样品(50μL)

在37°C孵育1-2小时加入鞘磷脂酶测定混合物(50μL)

在室温下孵育

持续1-2小时监测655nm处的吸光度

注意:在开始实验之前,在室温下解冻每个试剂盒组分的一个小瓶(或瓶)。

 

操作方法

1.准备鞘磷脂工作液:

将50μL鞘磷脂(组分B)加入5mL SMase反应缓冲液(组分D)中,并充分混合。

注意:应及时使用鞘磷脂工作液。

 

2.制备鞘磷脂酶标准品和/或含鞘磷脂酶的样品:

2.1将20μL含0.1%BSA的PBS加入到鞘磷脂酶标准品(组分F)的小瓶中,制成10单位/ mL鞘磷脂酶标准储备液。

注意:应将未使用的鞘磷脂酶标准储备液等分并保存在-20℃。

2.2将1μL的10单位/ mL鞘磷脂酶标准储备液(来自步骤2.1)加入1000μL测定缓冲液(组分E)中以产生10mU / mL鞘磷脂酶标准品。

注意:稀释的鞘磷脂标准储备液不稳定,应在4小时内使用。

2.3取500μL10mU / mL鞘磷脂酶标准品进行1至2次连续稀释,得到5,2.5,1.25,0.625,0.313,0.156,0.078和0 mU / mL连续稀释的鞘磷脂酶标准品。

2.4将连续稀释的鞘磷脂酶标准品和/或含鞘磷脂酶的测试样品加入白壁/透明底或透明96孔微孔板中,如说明书中的表1和2所示。

注意:根据需要处理您的细胞或组织样本。

2.5将50μL鞘磷脂工作溶液(来自步骤1)加入到鞘磷脂酶标准品,空白对照和测试样品的每个孔中(来自步骤2.4)。

2.6将反应混合物在37℃下孵育1-2小时。

 

3.准备200X Amplite Blue原液:

将100μLDMSO(组分G)加入到Amplite Blue(组分C)的小瓶中以制备200X Amplite Blue原液。

注意1:未使用的Amplite Blue原液应等分并保存在-20℃(避光)。

注意2:在硫醇(如DTT和2-巯基乙醇)存在下,Amplite Blue不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的最终浓度应低于10μM。Amplite Blue在高pH(> 8.5)下也不稳定。反应应在pH 7-8下进行。建议将pH 7.4用于测定缓冲液。

 

4.准备鞘磷脂酶测定混合物:

4.1将5 mL测定缓冲液(组分E)加入酶混合物瓶(组分A)中,并充分混合。

4.2将50μL200XAmplite Blue原液(来自步骤3)加入到酶混合溶液瓶中(来自步骤4.1,在开始测定之前制备鞘磷脂酶测定混合物)。

注意1:应立即使用鞘磷脂酶试验混合物并避光; 较长的储存可能会导致高分析背景。

注意2:混合物的混浊是正常的; 它不会干扰分析性能。

 

5.运行鞘磷脂酶测定:

5.1将50μL鞘磷脂酶测定混合物(来自步骤4.2)加入鞘磷脂酶标准品,空白对照和测试样品(来自步骤2.4)的每个孔中,以使总鞘磷脂酶测定体积为150μL/孔。

注意:对于384孔板,每孔加入25μL样品,25μL鞘磷脂工作溶液和25μL鞘磷脂酶测定混合物。

5.2在室温下孵育反应混合物1-2小时(避光)。

5.3使用吸光度酶标仪在655 nm处检测吸光度的增加。

 

参考文献

Doxepin mitigates noise induced neuronal damage in primary auditory cortex of mice via suppression of acid sphingomyelinase/ceramide pathway
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Journal: The Anatomical Record (2017)

New Aspects of Silibinin Stereoisomers and their 3-O-galloyl Derivatives on Cytotoxicity and Ceramide Metabolism in Hep G2 hepatocarcinoma Cell Line
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The ATP-binding cassette transporter-2 (ABCA2) regulates esterification of plasma membrane cholesterol by modulation of sphingolipid metabolism
Authors: Warren Davis
Journal: Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular and Cell Biology of Lipids (2014): 168–179

A high-throughput sphingomyelinase assay using natural substrate
Authors: Miao Xu, Ke Liu, Noel Southall, Juan J Marugan, Alan T Remaley, Wei Zheng
Journal: Analytical and bioanalytical chemistry (2012): 407–414

 

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