辣根过氧化物酶*针对缀合进行了优化*

辣根过氧化物酶*针对缀合进行了优化*

	货号	11021	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	10 mg	价格	960
	Ex (nm)		Em (nm)
	分子量		溶剂	Water
	产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：11021

产品名称：辣根过氧化物酶

规格：10 mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

 

产品物理化学光谱特性

溶剂：水

 

产品介绍

辣根过氧化物酶（HRP）是一种糖蛋白，分子量约为44 KD。它从辣根（Amoracia Rustana）中分离出来，属于过氧化物酶的铁原卟啉组。 HRP是包含四个二硫键的单链多肽。它是一种糖蛋白，含有18％的碳水化合物。碳水化合物组合物由半乳糖，阿拉伯糖，木糖，岩藻糖，甘露糖，甘露糖胺和半乳糖胺组成。 HRP容易与过氧化氢（H2O2）结合，生成的[HRP–H2O2]络合物可以氧化多种发色性氢供体。 AAT Bioquest提供了最大数量的HRP底物和缀合物。 HRP在许多不同的免疫化学应用（包括ELISA，免疫印迹和免疫组织化学）中被广泛用作免疫球蛋白的标记。 HRP可以通过几种不同的方法与抗体偶联，包括戊二醛，高碘酸盐氧化，通过二硫键以及氨基和硫醇定向的交叉油墨。迄今为止，我们的Buccutite HRP共轭技术是最有效的方法。 HRP是抗体最需要的标记，因为它是三种最流行的酶标记（HRP，碱性磷酸酶和B-半乳糖苷酶）中最小和最稳定的，其糖基化导致较低的非特异性结合。此纯化的辣根过氧化物酶（HRP）以无盐粉末形式冻干提供，用于重建并用于HRP检测或结合。

 

参考文献

Antibody-biotin-streptavidin-horseradish peroxidase (HRP) sensor for rapid and ultra-sensitive detection of fumonisins.
Authors: Yang, Hualin and Zhang, Qi and Liu, Xiaolei and Yang, Yuying and Yang, Yong and Liu, Mingyuan and Li, Peiwu and Zhou, Yu
Journal: Food chemistry (2020): 126356

Nanocapsulation of horseradish peroxidase (HRP) enhances enzymatic performance in removing phenolic compounds.
Authors: Liu, Shan and Huang, Biyan and Zheng, Guiqin and Zhang, Peng and Li, Juying and Yang, Bo and Chen, Yantao and Liang, Li
Journal: International journal of biological macromolecules (2020): 814-822

An efficient methodology for the purification of date palm peroxidase: Stability comparison with horseradish peroxidase (HRP).
Authors: Saud Al-Bagmi, Moneera and Shahnawaz Khan, Mohd and Alhasan Ismael, Mohamad and Al-Senaidy, Abdulrahman M and Ben Bacha, Abir and Mabood Husain, Fohad and Alamery, Salman Freeh
Journal: Saudi journal of biological sciences (2019): 301-307

Sensitive sulfide ion detection by optofluidic catalytic laser using horseradish peroxidase (HRP) enzyme.
Authors: Gong, Chaoyang and Gong, Yuan and Khaing Oo, Maung Kyaw and Wu, Yu and Rao, Yunjiang and Tan, Xiaotian and Fan, Xudong
Journal: Biosensors & bioelectronics (2017): 351-357

Ultrasensitive electrochemical immunosensor based on horseradish peroxidase (HRP)-loaded silica-poly(acrylic acid) brushes for protein biomarker detection.
Authors: Zhao, Yan and Zheng, Yiqun and Kong, Rongmei and Xia, Lian and Qu, Fengli
Journal: Biosensors & bioelectronics (2016): 383-8

Bioconjugation of Antibodies to Horseradish Peroxidase (HRP).
Authors: Hnasko, Robert M
Journal: Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) (2015): 43-50

Pb(2+)-introduced activation of horseradish peroxidase (HRP)-mimicking DNAzyme.
Authors: Zhu, Xi and Gao, Xiaoyao and Liu, Qida and Lin, Zhenyu and Qiu, Bin and Chen, Guonan
Journal: Chemical communications (Cambridge, England) (2011): 7437-9

Toxicity of textile dyes and their degradation by the enzyme horseradish peroxidase (HRP).
Authors: Ulson de Souza, Selene Maria Arruda Guelli and Forgiarini, Eliane and Ulson de Souza, Antônio Augusto
Journal: Journal of hazardous materials (2007): 1073-8

FIA-near-infrared spectrofluorimetric trace determination of hydrogen peroxide using tricarchlorobocyanine dye (Cy.7.Cl) and horseradish peroxidase (HRP).
Authors: Tang, Bo and Zhang, Li and Xu, Ke-hua
Journal: Talanta (2006): 876-82

Studies on the oxidation reaction of tyrosine (Tyr) with H2O2 catalyzed by horseradish peroxidase (HRP) in alcohol-water medium by spectrofluorimetry and differential spectrophotometry.
Authors: Tang, Bo and Wang, Yan and Liang, Huiling and Chen, Zhenzhen and He, Xiwen and Shen, Hanxi
Journal: Spectrochimica acta. Part A, Molecular and biomolecular spectroscopy (2006): 609-13

Amplite 荧光法谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒 红色荧光

Amplite 荧光法谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒 红色荧光

	货号	11560	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	200 Tests	价格	3924
	Ex (nm)	420	Em (nm)	480
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒 红色荧光 是美国AAT Bioquest生产的检测谷胱甘肽过氧化物酶的试剂盒，谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）是具有过氧化物酶活性的酶家族，以保护生物体免受氧化损伤。GPx在将有机氢过氧化物（例如脂质氢过氧化物）还原成其相应的醇或将游离过氧化氢还原成水。因此，它可以防止细胞膜和细胞中其他氧化剂敏感位点的氧化损伤。现在科研已经注意到，改变GPx水平与由许多评论和复杂疾病引起的损伤相关。在生物样品中测量GPx水平，作为潜在治疗癌症，糖尿病，神经退行性疾病和心血管疾病的潜在指标。AAT Bioquest的荧光谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒提供灵敏的荧光测定法，用于测量生物样品中的GPx水平。该测定基于GPx催化的谷胱甘肽（GSH）氧化成氧化型谷胱甘肽（GSSG）。生成的GSSG通过谷胱甘肽还原酶（GR）和NADPH再循环至还原态GSH：

 

R-O-O-H + 2GSH     ^GPx             R-O-H + GSSG + H₂O

GSSG + NADPH + H^{+        GR}           2GSH + NADP⁺

 

产品NADP +可以使用我们新开发的专有NADP传感器Quest Fluor™NADP Probe进行专门监控。 NADP传感器仅与NADP反应产生荧光产物。 荧光信号可以用荧光酶标仪在Ex / Em = 420 / 480nm处测量，其与GPx活性成正比。与测量NADPH在340 nm处吸光度降低的其他商业试剂盒相比，我们的Quest Fluor™NADP探针可用于直接量化NADP水平。通过这种荧光测定GPx测定，我们能够在155μL反应体积中检测低至1.2 mU / mL的GPx。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒。 

产品说明书

96孔板的测定方案

概述

准备GPx分析混合物（50μL）

添加GPx标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育30分钟

加入20μLQuestFluor™NADP探针

添加20μLNAP检测溶液

在室温下孵育10-20分钟

添加15μL增强剂

溶液在室温孵育30-60分钟，在Ex / Em = 420 / 480nm处记录荧光

注意1.为了获得最佳效果，强烈建议使用黑色版。

注意2.在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分的一个小瓶。

 

操作方法

 

1.制备谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）标准储备液：

将50μLddH2O或1×PBS缓冲液加入到GPx标准品（组分A）的小瓶中，制成10U / mL标准储备溶液。

注意：未使用的GPx标准储备溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20ºC。

 

2.准备GPx标准的系列稀释液：

2.1将4μLGPx标准储备溶液（10U / mL，来自步骤1）加入996L 1×PBS缓冲液中，以产生浓度为40mU / mL的标准溶液。

注意：稀释的GPx标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

2.2取200μL40mU / mL GPx标准溶液进行1：2连续稀释，得到大约20,10,5,2.5,1.25,0.625和0 mU / mL的GPx标准品系列稀释液。

2.3如表1和2中所述，将GPx标准品和含有GPx的测试样品的系列稀释液加入到固体黑色96孔微量培养板中。

 

表1实心黑色96孔微孔板中GPx标准品和测试样品的布局

BL	BL	TS	TS	….	….
GP 1	GP 1	….	….	….	….
GP 2	GP 2
GP 3	GP 3
GP 4	GP 4
GP 5	GP 5
GP 6	GP 6
GP 7	GP 7

注意：GP = GPx标准，BL =空白对照，TS =测试样品。

 

表2每个孔的试剂组成

GPx Standard	Blank Control	Test Sample
Serial Dilutions*: 50 μL	1×PBS Buffer : 50 μL	50 μL

*注意：将连续稀释的GPx标准品从大约0.6 mU / mL加到40 mU / mL，一式两份加入GP1到GP7的孔中。

 

3.准备GSH原液（100X）：

将100μlddH2 O加入到GSH小瓶（组分D）中以制备100X GSH储备溶液。

 

4.准备GPx底物储备液（100X）：

将100μlddH2O加入到基质小瓶（组分E）中以制备100X底物储备溶液。

 

5.准备GPx分析混合物：

5.1将5 mL测定缓冲液（组分B）加入一瓶酶混合物（组分C）中。

5.2将50μLGSH储备溶液（来自步骤3的组分D），50μL底物储备溶液（组分E，来自步骤4）加入到组分B + C的瓶子中（来自步骤5.1），并充分混合以进行GPx测定 混合物（组分B + C + D + E）。

注1：该GPx测定混合物足以用于一个96孔板。 它不稳定，请及时使用。

注2：不建议储存未使用的GPx分析混合物。 可以将未使用的组分B + C混合物（来自步骤5.1）分成单次使用的等分试样并储存在-20ºC，尽管灵敏度可能会降低。

注3; 将未使用的100X GSH储备溶液（来自步骤3）和100X GPx底物储备溶液（来自步骤4）分成单次使用的等分试样并储存在-20ºC。

 

6.运行GPx分析：

6.1将50μLGPx测定混合物（来自步骤5.2）加入到GPx标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤2.3），使总体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLGPx测定混合物。

6.2在室温下孵育反应30分钟，避光。

 

7.运行NADP测定：

7.1将20μLQuestFluor™NADP探针（组分F）加入到GPx标准品，空白对照品和测试样品的每个孔中，充分混合。

7.2在每个孔中加入20μLNAP检测溶液（组分G），充分混匀。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和10μLQuestFluor™NADP探针（组分F）和10μLNAP检测溶液（组分G）。

7.3在室温下孵育反应10-20分钟，避光。

7.4向每个孔中加入15μL增强剂（组分H），使总测定体积为155μL/孔，并在室温下孵育30-60分钟，避光。

注意：对于384孔板，添加7.5μL增强剂。

7.5使用荧光读板仪在Ex / Em = 420/480 nm处监测荧光增加。

 

参考文献

A mechanistic mathematical model for the catalytic action of glutathione peroxidase
Authors: Pannala VR, Bazil JN, Camara AK, Dash RK.
Journal: Free Radic Res (2014): 487

A supramolecular microgel glutathione peroxidase mimic with temperature responsive activity
Authors: Yin Y, Jiao S, Lang C, Liu J.
Journal: Soft Matter (2014): 3374

Basal levels of glutathione peroxidase correlate with onset of radiation induced lung disease in inbred mouse strains
Authors: Kunwar A, Haston CK.
Journal: Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol (2014): L597

Can recombinant human glutathione peroxidase 1 with high activity be efficiently produced in Escherichia coli
Authors: Guo X, Song J, Yu Y, Wei J.
Journal: Antioxid Redox Signal (2014): 1524

Changes of the Thioredoxin System, Glutathione Peroxidase Activity and Total Antioxidant Capacity in Rat Brain Cortex During Acute Liver Failure: Modulation by L-histidine
Authors: Ruszkiewicz J, Albrecht J.
Journal: Neurochem Res. (2014)

Characterization and structural analysis of human selenium-dependent glutathione peroxidase 4 mutant expressed in Escherichia coli
Authors: Yu Y, Song J, Guo X, Wang S, Yang X, Chen L, Wei J.
Journal: Free Radic Biol Med (2014): 332

Characterization of biochemical properties of a selenium-independent glutathione peroxidase of Cryptosporidium parvum
Authors: Kang JM, Ju HL, Sohn WM, Na BK.
Journal: Parasitology (2014): 570

Clinical significance and therapeutic value of glutathione peroxidase 3 (GPx3) in hepatocellular carcinoma
Authors: Qi X, Ng KT, Lian QZ, Liu XB, Li CX, Geng W, Ling CC, Ma YY, Yeung WH, Tu WW, Fan ST, Lo CM, Man K.
Journal: Oncotarget. (2014)

Construction of a highly stable artificial glutathione peroxidase on a protein nanoring
Authors: Miao L, Zhang X, Si C, Gao Y, Zhao L, Hou C, Shoseyov O, Luo Q, Liu J.
Journal: Org Biomol Chem (2014): 362

Daily rhythms of catalase and glutathione peroxidase expression and activity are endogenously driven in the hippocampus and are modified by a vitamin A-free diet
Authors: Navigatore-Fonzo LS, Delgado SM, Gimenez MS, Anzulovich AC.
Journal: Nutr Neurosci (2014): 21

Amplite 荧光法髓过氧化物酶检测试剂盒 红色荧光

Amplite 荧光法髓过氧化物酶检测试剂盒 红色荧光

	货号	11301	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	200 Tests	价格	2604
	Ex (nm)	571	Em (nm)	584
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法髓过氧化物酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的葡萄糖检测的试剂盒，髓过氧化物酶(MPO)是一类具有过氧化物酶活性的绿色血红素蛋白，大量存在于中性粒细胞和单核细胞中。它可以催化来自细胞毒素酸或者其他中间产物的双氧水或者卤化物反应，在氧依赖性杀死肿瘤细胞和微生物过程扮演着重要的角色。MPO的缺乏症是一种遗传性的酶缺乏，诱发免疫缺陷。因此治疗MPO的抑制剂具有很大的发展前景。Amplite髓过氧化物酶检测试剂盒能提供一种快速灵敏的检测方法来测定溶解状态或者细胞裂解液中的MPO。本试剂盒可以用于96或384微孔板分析，并且无需任何分步骤，就可以轻易地实现自动化。这个试剂盒使用我们的Amplite Red底物使其成为双记录模式。红色的荧光信号很容易的通过荧光酶标仪（540／590nm）检测到或者被吸收酶标仪（576nm）检测到。通过Amplite 荧光髓过氧化物酶检测试剂盒在100 ul检测体积中能检测到5ng／ml的髓过氧化物酶。本试剂盒可以自动的高通量筛选MPO的抑制剂。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法髓过氧化物酶检测试剂盒。 

点击查看光谱

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.MPO标准品或测试样品（50μL）
2.添加MPO工作溶液（50μL）
3.在室温下孵育30-60分钟
4.在Ex / Em = 540/590 nm处读取荧光强度（截止570 nm）

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1 Amplite 红色储备液（250X）：
将40μLDMSO（组分E）加入到Amplite Red底物（组分A）的小瓶中。应立即使用原液。注意：在硫醇如二硫苏糖醇（DTT）和2-巯基乙醇存在下，Amplite Red底物不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的最终浓度应不高于10μM。 Amplite Red底物在高pH（> 8.5）下也不稳定。因此，反应应在pH7-8下进行。推荐使用所提供的测定缓冲液，pH7.4。

1.2 H2O2储备溶液（500X，10 mM）：
将10μL的3％H₂O₂（0.88M，组分C）加入870μL的测定缓冲液（组分B）中。注意：稀释的H₂O₂溶液不稳定。应丢弃未使用的部分。

1.3 髓过氧化物酶（MPO）标准溶液（200 mU / mL）：
将50μL测定缓冲液（组分B）加入到髓过氧化物酶标准品（组分D）的小瓶中。注意：一个小瓶含有约5 – 10 mU的髓过氧化物酶。

2. HRP库存解决方案（50X）：
将1mL测定缓冲液（组分B）加入到辣根过氧化物酶（组分C）的小瓶中。

3.葡萄糖氧化酶标准溶液（100 U / mL）：
将1mL测定缓冲液加入葡萄糖氧化酶小瓶（组分D）中。

4.葡萄糖原液（10X）：
将5mL测定缓冲液加入葡萄糖小瓶（组分F）中。

 

2.标准溶液

MPO标准
将20μL200mU / mL MPO标准溶液加入380μL测定缓冲液（组分B）中，得到10 mU / mL MPO标准溶液（MPO7）。 取10 mU / mL MPO标准溶液进行1：3连续稀释，得到剩余的系列稀释MPO标准品（MPO6 – MPO1）。

 

3.工作溶液

将20μLDelterite 红色储备液（250X）和10μLH2O2（500X）加入5mL测定缓冲液（组分B）中，使总体积为5.03mL MPO工作溶液。 避光。

 

样品分析

表1. 96孔固体黑色微孔板中MPO标准品和测试样品的布局。 MPO =髓过氧化物酶标准品（MPO1-MPO7,0.01至10mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
MPO1	MPO1	…	…
MPO2	MPO2	…	…
MPO3	MPO3
MPO4	MPO4
MPO5	MPO5
MPO6	MPO6
MPO7	MPO7

表2.每个孔的试剂组成。 注意，由于Amplite Red底物（非荧光产物）的过度氧化，高浓度的MPO可能导致荧光信号降低。

孔	容积	试剂
MPO1-MPO7	50ul	连续稀释（0.01至10 mU / mL）
BL	50ul	分析缓冲液（组分B）
TS	50ul	测试样本

1.根据表1和2中提供的布局制备髓过氧化物酶标准品（MPO），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向髓过氧化物酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLMPO工作溶液，使总MPO测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLMPO工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应30至60分钟，避光。

4.用荧光板读数器在激发= 530-570nm，发射= 590-600nm（最佳Ex / Em = 540 / 590nm，截止= 570nm）监测荧光强度。 注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。 与荧光读数相比，吸收检测具有更低的灵敏度。

 

相关产品

产品名称	货号
Amplite NAD检测试剂盒 （荧光法）蓝色荧光	Cat#15280
Amplite NADP检测试剂盒（荧光法）蓝色荧光	Cat#15281
Amplite 荧光法过氧化氢酶检测试剂盒 红色荧光	Cat#11306