Amplite 荧光法谷氨酸检测试剂盒 红色荧光

	货号	10054	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	200 Tests	价格	2604
	Ex (nm)	571	Em (nm)	585
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法谷氨酸检测试剂盒 红色荧光是美国AAT Bioquest生产的用于检测谷氨酸的试剂盒，谷氨酸是20种蛋白质氨基酸之一。 羧酸根阴离子和谷氨酸盐被称为谷氨酸。 谷氨酸是一种重要的神经递质，在长期增强中起关键作用，对学习和记忆很重要。 谷氨酸是GABA的前体，但具有相反的功能; 它可能在心脏和前列腺的正常功能中发挥作用。 作为跨越血脑屏障的少数营养素之一，谷氨酸用于治疗诸如抑郁症，ADD和ADHD，疲劳，酗酒，癫痫，肌肉萎缩，精神发育迟滞和精神分裂症等疾病。

Amplite 荧光谷氨酸检测试剂盒为各种生物样品中谷氨酸的测量提供了一种快速而灵敏的方法。 在该测定中，偶联酶系统催化L-谷氨酸和NADP之间的反应以产生NADPH，其被NADPH特异性识别并再循环回NADP。 在反应过程中产生红色荧光产物。 可以通过荧光酶标仪在Ex / Em = 530-570nm / 590-600nm（最佳Ex / Em = 540nm / 590nm）或576±5nm处的吸光度酶标仪读取信号。 使用我们的Amplite 荧光谷氨酸试剂盒，我们在100μL反应体积中检测到少至1μM的谷氨酸。 该检测是稳定的，并且可以容易地适用于需要测量谷氨酸的各种应用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的谷氨酸检测试剂盒。 

产品说明书

96孔板测定示例

概述

制备谷氨酸测定混合物（50μL）

加入谷氨酸标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育30分钟 –  2小时检测荧光增加，Ex / Em = 540/590 nm

操作方法

1.准备NADP储备液（200X）：

将100μL稀释缓冲液（组分E）加入到NADP（组分C）的小瓶中以制备200X NADP储备溶液。

注意：未使用的NADP储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.准备谷氨酸储备液：

将200μL稀释缓冲液（组分E）加入小瓶谷氨酸（组分D）中以制备100mM谷氨酸储备溶液。

注意：未使用的谷氨酸储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存于-20℃。

3.准备谷氨酸测定混合物：

3.1将10 mL测定缓冲液（组分B）加入酶混合物瓶（组分A）中。

3.2将50μL200XNADP储备液（来自步骤1）加入酶混合物瓶（来自步骤3.1），并充分混合。

注意：这种谷氨酸测定混合物足以用于两个96孔板。 未使用的谷氨酸测定混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

4.准备连续稀释的谷氨酸标准品（0至1 mM）：

4.1将10μL谷氨酸储备溶液（来自步骤2）加入990L稀释缓冲液（组分E）中以产生1mM谷氨酸标准溶液。

注意：稀释的谷氨酸标准溶液不稳定。 在2小时内使用。

4.2取200μL的1mM谷氨酸标准溶液进行1：3连续稀释，得到300,100,30,10,3,1和0μM连续稀释的谷氨酸标准品。

4.3如说明书中表1和2所述，将连续稀释的谷氨酸标准品和含有谷氨酸的测试样品加入到96孔板中。

5.运行谷氨酸测定：

5.1将50μL谷氨酸测定混合物（来自步骤3）添加到谷氨酸标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤4.3）以使总谷氨酸测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL谷氨酸测定混合物。

5.2在室温下孵育反应30分钟至2小时，避光。

5.3通过在Ex / Em = 530-570 / 590-600nm（最佳Ex / Em = 540 / 590nm）下使用荧光检测荧光。

注意：也可以将板中的混合物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

参考文献

Presenilin-1/γ-secretase controls glutamate release, tyrosine phosphorylation, and surface expression of N-methyl-d-aspartate receptor (NMDAR) subunit GluN2B
Authors: Zhao Xuan, Gael Barthet, Junichi Shioi, Jindong Xu, Anastasios Georgakopoulos, Julien Bruban, Nikolaos K Robakis
Journal: Journal of Biological Chemistry (2013): 30495–30501

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	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法谷氨酸氧化酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的谷氨酸检测的试剂盒，谷氨酸氧化酶属于氧化还原酶的一类，特别能对带有CH-NH2基团供氧受体起反应。它是一种能特异催化水中或者氧气中的L-谷氨酸的酶，可以通过氧化脱氨形成酮戊二酸，氨和过氧化氢。Amplite谷氨酸氧化酶荧光检测试剂盒提供了一种快速超敏感的方法，来检测溶解状态下或者细胞裂解液中的谷氨酸氧化酶。在分析中，L-谷氨酸可以通过谷氨酸氧化酶被氧化成酮戊二酸、氨或者过氧化氢。L-丙氨酸和L-谷氨酸-丙酮酸也参与了这个转氨酶反应，导致多次循环反应，因此显著的增加双氧水的产出。该试剂盒使用我们的Amplite Red底物使其成为双记录模式。红色的荧光信号很容易的通过荧光酶标仪（540／590nm）检测，或者使用酶标仪（576nm）检测。Amplite荧光法谷氨酸氧化酶检测试剂盒在100 ul检测体积中能检测到40U/ml的谷氨酸氧化酶。本试剂盒可以用于96或384微孔板分析，并且无需任何分步骤，就可以轻易地实现自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法谷氨酸氧化酶检测试剂盒。 

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.谷氨酸氧化酶标准品或测试样品（50μL）
2.添加谷氨酸氧化酶工作液（50μL）
3.在室温下孵育30-60分钟
4.在Ex / Em = 540 / 590nm处读取荧光强度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1 Amplite 红色储备液（250X）：
将40μLDMSO（组分F）加入到Amplite Red（组分A）的小瓶中。应立即使用原液。注意：在硫醇如二硫苏糖醇（DTT）和2-巯基乙醇存在下，Amplite Red不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的最终浓度应不高于10μM。 Amplite Red在高pH（> 8.5）下也不稳定。因此，反应应在pH7-8下进行。推荐使用所提供的测定缓冲液，pH7.4。

1.2 HRP库存解决方案（400X）：
将200μL测定缓冲液（组分B）加入到辣根过氧化物酶（组分C）的小瓶中。

1.3 谷氨酸储备溶液（400X）：
将1.0mL ddH 2 O加入到谷氨酸小瓶（组分D）中以制备400X谷氨酸储备溶液。

1.4 谷氨酸氧化酶（GO）标准溶液（150 mU / mL）：
将100μL测定缓冲液（组分B）加入到谷氨酸氧化酶标准品（冻干，组分E）的小瓶中以制备150mU / mL谷氨酸氧化酶（GO）标准溶液。

2.标准溶液

谷氨酸氧化酶标准
将30μL150mU/ mL GO标准溶液加入420μL测定缓冲液（组分B）中，得到10mU / mL GO标准溶液（GO7）。 取10 mU / mL GO标准溶液进行1：3连续稀释，得到剩余的连续稀释的GO标准品（GO6-GO1）。

3.工作溶液

将20μLDelterite Red储备液（250X），12.5μLHRP储备溶液（400X）和12.5μL谷氨酸储备溶液（400X）加入5 mL分析缓冲液（组分B）中，使总体积为5.07 mL谷氨酸氧化酶工作溶液（GO工作溶液），避光。

样品分析

表1.固体黑色96孔微孔板中GO标准品和测试样品的布局。 GO =谷氨酸氧化酶标准品（GO1-GO7,0.01至10mU / mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成。 较高浓度的GO可能由于Amplite Red（对非荧光产物）的过度氧化而导致荧光信号降低

1.根据表1和2中提供的布局制备GO标准品（GO），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向GO标准品，空白对照品和测试样品的每个孔中加入50μLGO工作溶液，使总GO测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLGO工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应30至60分钟，避光。

4.用荧光板读数器在激发= 530-570nm，发射= 590-600nm（最佳Ex / Em = 540 / 590nm），截止= 570nm监测荧光强度。 注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。 与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

参考文献

Extracellular polymeric substrates of Chlorella vulgaris F1068 weaken stress of cetyltrimethyl ammonium chloride on ammonium uptake
Authors: Feng Li, Yangduo Kuang, Na Liu, Fei Ge
Journal: Science of The Total Environment (2019)

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