细胞膜荧光探针DiIC12(3)-DS 货号22050-AAT Bioquest荧光染料

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细胞膜荧光探针DiIC12(3)-DS

细胞膜荧光探针DiIC12(3)-DS

细胞膜荧光探针DiIC12(3)-DS    货号22050 货号 22050 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 5 mg 价格 1272
Ex (nm) 550 Em (nm) 564
分子量 825.21 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

细胞膜荧光探针DiIC12(3)-DS是美国AAT Bioquest生产的用于标记细胞膜的荧光探针,DiI,DiO,DiD和DiR染料是用于标记膜和其他疏水结构的亲脂荧光染料家族。当掺入膜中或与亲脂性生物分子如蛋白质结合时,这些对环境敏感的染料的荧光大大增强,尽管它们在水中是弱荧光的。它们具有高消光系数,极性依赖性荧光和短激发态寿命。一旦应用于细胞,这些染料在细胞质膜内横向扩散,导致整个细胞在其最佳浓度下均匀染色。 DiI(橙色荧光),DiO(绿色荧光),DiD(红色荧光)和DiR(深红色荧光)的独特荧光颜色为活细胞的多色成像和流式细胞分析提供了便利的工具。 DiO和DiI可分别与标准FITC和TRITC过滤器一起使用。其中DiD被633 nm He-Ne激光器激发,并且具有比DiI更长的激发和发射波长,为标记具有显着内在荧光的细胞和组织提供了有价值的替代方案。由于红外光通过细胞和组织的有效传输以及红外范围内的低水平自发荧光,DiR可用于体内成像或示踪。该特定的DiI衍生物是含有亲水和亲脂部分的两亲分子。它在水中具有比高亲脂性DiI类似物更强的荧光。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的细胞膜荧光探针DiIC12(3)-DS。

Di系列染料 特点 选择建议
DiO染料(绿色) 活细胞或固定细胞、组织的的长期示踪剂。荧光强度低于DiI。对某些固定组织的染色效果一般。 DiI, DiO, DiD 和 DiR均可染色活细胞或固定细胞及组织(请您根据您的需求选择相应的探针),DiI比DiO荧光更亮;DiD,DiR波长更长,更适合组织染色;
DiA染料(绿色) 一种细胞膜绿色荧光染料,它在细胞膜中的扩散速度比 DiO 快,并且经常和 DiI 一起使用于细胞膜双色标记。可以进行染色后的固定。DiA 对固定细胞的染色效果比 DiO 好。
DiI染料(橙色) 活细胞或固定细胞、组织的的长期示踪剂。除标记细胞膜外,还可以检测细胞的融合和粘附、细胞迁移等。
DiB染料(橘色) 一种检测细胞膜电位的亲脂性阴离子荧光染料,它本身无荧光,当进人细胞与胞浆内的蛋白质结合后才发出荧光。当它进入细胞后,指示细胞内荧光强度增加,即膜电位增加表示细胞去极化;反之,若细胞内荧光强度降低,即膜电位降低表示细胞超极化。
DiD染料(红色) 染色效率高,均一,不易猝灭,细胞毒性低,背景干扰小。
DiS染料(红色) 一种细胞膜红色荧光染料,它在细胞膜中的扩散速度比 DiD快,可以进行染色后的固定。DiS 对固定细胞的染色效果比 DiD好。
DiR染料(深红色) 常用于标记细胞膜,红外荧光可以穿透细胞和组织,在活体成像中用来示踪。DiR可以进行染色后的固定。

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产品说明书

操作方法

1.准备DiO,DiI,DiD,DiS或DiR膜染色溶液:

1.1制备DMSO或EtOH储备溶液:储备溶液应在DMSO或EtOH中以1-5mM制备。

注意:储备溶液的未使用部分应储存在-20 ℃。 避免反复冻/融循环。

1.2准备工作溶液:将储备溶液(步骤1.1)稀释到合适的缓冲液中,如无血清培养基,HBSS或PBS制备1至5μM的工作溶液。

注意:对于不同的细胞类型和/或实验条件,应根据经验确定工作溶液的最终浓度。 建议在至少超过十倍范围的浓度下进行测试。

 

2.将细胞染成悬浮液:

2.1在染料工作溶液中悬浮细胞密度为1×106 / mL(来自步骤1.2)。

2.2在37°C孵育2-20分钟。 最佳孵育时间取决于细胞类型。 首先孵育20分钟,然后根据需要进行优化以获得均匀的标记。

2.3将标记的悬浮管以1000至1500rpm离心5分钟。

2.4取出上清液,轻轻地将细胞重新悬浮在预热(37°C)的生长培养基中。

2.5按步骤2.3和2.4洗涤两次。

 

3.染色贴壁细胞:

3.1在无菌玻璃盖玻片上培养贴壁细胞。

3.2从生长培养基中取出盖玻片,轻轻地排出多余的培养基。 将盖玻片放在湿度箱中。

3.3将100μL染料工作溶液(来自步骤1.2)吸移到盖玻片的角落,轻轻搅拌直至所有细胞都被覆盖。

3.4将盖玻片在37°C孵育2-20分钟。 最佳孵育时间取决于细胞类型。 首先孵育20分钟,然后根据需要进行优化以获得均匀的标记。

3.5排出染料工作溶液,用生长培养基清洗盖玻片2-3次。每个洗涤循环用预热的生长培养基覆盖细胞,孵育5-10分钟后排出培养基。

 

4.显微镜检测:

4.1说明书中的表1总结了DiD,DiO,DiI,DiS和DiR滤波器组的选择。

4.2为了同时检测多种染料,可提供如下多波段滤波器组:

a)DiI和DiO = Omega XF52,Chroma 51004

b)DiI和DiD = Omega XF92,Chroma 51007

c)DiI,DiO和DiD = Omega XF93,Chroma 61005

 

5.流式细胞仪检测:

用DiO,DiI,DiD,DiS和DiR标记的细胞可分别使用常规FL1,FL2,FL3和FL4流式细胞仪检测通道进行分析。

 

参考文献

Exosomes from hyperglycemia-stimulated vascular endothelial cells contain versican that regulate calcification/senescence in vascular smooth muscle cells
Authors: Shuang Li, Jun-Kun Zhan, Yan-Jiao Wang, Xiao Lin, Jia-Yu Zhong, Yi Wang, Pan Tan, Jie-Yu He, Xing-Jun Cui, Yi-Yin Chen
Journal: Cell & Bioscience (2019): 1

The Influence of Cell Source and Donor Age on the Tenogenic Potential and Chemokine Secretion of Human Mesenchymal Stromal Cells
Authors: Weronika Zarychta-Wisniewska, Anna Burdzińska, Katarzyna Zielniok, Marta Koblowska, Kamila Gala, Piotr Pedzisz, Roksana Iwanicka-Nowicka, Anna Fogtman, Aleksandra Aksamit, Agnieszka Kulesza
Journal: Stem Cells International (2019)

Cyclic RGD peptide-modified liposomal drug delivery system for targeted oral apatinib administration: enhanced cellular uptake and improved therapeutic effects
Authors: Zhiwang Song, Yun Lin, Chan Feng Xia Zhang, Yonglin Lu, Yong Gao, Chunyan Dong
Journal: International Journal of Nanomedicine (2017): 1941

In vivo imaging system for explants analysis—A new approach for assessment of cell transplantation effects in large animal models
Authors: Weronika Zarychta-Wisniewska, Anna Burdzinska, Radoslaw Zagozdzon, Bartosz Dybowski, Marta Butrym, Zdzislaw Gajewski, Leszek Paczek
Journal: PloS one (2017): e0184588

Influence of Particle Geometry on Gastrointestinal Transit and Absorption following Oral Administration
Authors: Dong Li, Jie Zhuang, Haisheng He, Sifan Jiang, Amrita Banerjee, Yi Lu, Wei Wu, Samir Mitragotri, Li Gan, Jianping Qi
Journal: ACS Applied Materials & Interfaces (2017)

Mesenchymal stem cells increase skin graft survival time and up-regulate PD-L1 expression in splenocytes of mice
Authors: Ali Moravej, Bita Geramizadeh, Negar Azarpira, Amir-Hasan Zarnani, Ramin Yaghobi, Mehdi Kalani, Maryam Khosravi, Amin Kouhpayeh, Mohammad-Hossein Karimi
Journal: Immunology Letters (2017)

Novel approach for the detection of intraperitoneal micrometastasis using an ovarian cancer mouse model
Authors: Ayesha B Alvero, Dongin Kim, Eydis Lima, Natalia J Sumi, Jung Seok Lee, Carlos Cardenas, Mary Pitruzzello, Dan-Arin Silasi, Natalia Buza, Tarek Fahmy
Journal: Scientific Reports (2017)

On-Demand Drug Releasing from Dual Targeting Small Nanoparticles Triggered by High Intensity Focused Ultrasound Enhanced Glioblastoma Targeting Therapy
Authors: Zimiao Luo, Kai Jin, Qiang Pang, shun shen, Zhiqiang Yan, Ting Jiang, Xiaoyan Zhu, Lei Yu, Zhiqing Pang, Xinguo Jiang
Journal: ACS Applied Materials & Interfaces (2017)

Overexpression of c-Met in bone marrow mesenchymal stem cells improves their effectiveness in homing and repair of acute liver failure
Authors: Kun Wang, Yuwen Li, Tiantian Zhu, Yongting Zhang, Wenting Li, Wenyu Lin, Jun Li, Chuanlong Zhu
Journal: Stem Cell Research & Therapy (2017): 162

The accelerated blood clearance phenomenon of PEGylated nanoemulsion upon cross administration with nanoemulsions modified with polyglycerin
Authors: Yuqing Su, Lirong Wang, Kaifan Liang, Mengyang Liu, Xinrong Liu, Yanzhi Song, Yihui Deng
Journal: Asian Journal of Pharmaceutical Sciences (2017)

说明书
细胞膜荧光探针DiIC12(3)-DS.pdf

Cell Navigator 活细胞内质网染色试剂盒*蓝色荧光* 货号22634-AAT Bioquest荧光染料

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Cell Navigator 活细胞内质网染色试剂盒*蓝色荧光*

Cell Navigator 活细胞内质网染色试剂盒*蓝色荧光*

Cell Navigator 活细胞内质网染色试剂盒*蓝色荧光*    货号22634 货号 22634 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 Tests 价格 3924
Ex (nm) 344 Em (nm) 457
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Cell Navigator 活细胞内质网染色试剂盒是美国AAT Bioquest生产的内质网染色试剂盒,内质网(ER)是真核生物细胞中的一种细胞器,其形成扁平的,膜封闭的囊或称为池状的管状结构的互连网络。 ER的膜与外核膜连续。 ER在大多数类型的真核细胞中发生,但在红细胞和精子中不存在。 此Cell Navigator 活细胞内质网(ER)染色试剂盒使用我们的ER Tracer Blue作为ER标记。 ER Tracer 蓝色染料是一种可透过细胞的荧光染料,对ER具有高度选择性。 该染色剂由蓝色荧光染料和ER粘合剂组成,它们在大多数细胞类型中选择性结合ER。 对于某些细胞,ER Tracer Blue可能无法选择性结合ER。 ER Tracer Blue具有类似于DAPI的光谱特性,这使得该套件可与DAPI滤光片组一起使用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Cell Navigator 活细胞内质网染色试剂盒。 

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适用仪器


荧光显微镜  
激发: DAPI滤波片
发射: DAPI滤波片
推荐孔板: 黑色透明

产品说明书

样本分析方案

简要概述

  1. 在生长培养基中准备细胞
  2. 将细胞与ER Blue 工作溶液在37℃下孵育15-30分钟
  3. 使用DAPI滤光片组在荧光显微镜下分析

 

溶液配制

1.储备溶液配制

        除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
ER Blue 储备溶液(500X):将20 uL DMSO(组分C)添加到ER Blue (组分A)中,制成500X储备溶液。

2.工作溶液配制

ER Blue 工作溶液:将2 uL 500X储备溶液添加到1 mL活细胞染色缓冲液(组分B)中,并充分混合。 工作溶液在室温下稳定至少2小时。 注意:20 uL的500 X ER Blue 储备溶液足以容纳一个96孔板。 如果未密封的ER Blue 500X储备溶液可以分装,并在≤-20℃的温度下保存两周。 避光并避免反复冻融循环。 有关细胞样品制备的指南,请点击查看。

 

操作步骤

  1. 处理样品。注意:可以将工作溶液直接添加到细胞培养基中。或者,移出细胞培养基并用缓冲液洗涤。
  2. 在微孔板中添加100 uL /孔(96孔板)或50 uL /孔(384孔板)的ER Blue 工作溶液。将细胞与工作液在37℃下孵育15-30分钟,避光保存。注意:ER探针的最佳浓度取决于具体应用。浓度高于工作溶液可能对细胞有毒性。可以根据探针对特定的细胞类型和细胞/组织的渗透性来改变染色条件。
  3. 除去每个孔中的工作溶液。用缓冲液洗涤细胞三遍。
  4. 染色后固定细胞(可选)。用4%甲醛固定细胞5 -10分钟。缓冲液洗涤细胞三遍。
  5. 使用带有DAPI滤光片组的荧光显微镜观察细胞中的荧光信号。

 

图示

Cell Navigator 活细胞内质网染色试剂盒*蓝色荧光*    货号22634

图1.使用带有DAPI滤光片组的荧光显微镜在96孔黑色透明板中培养的HeLa细胞内质网(ER)染色的荧光图像。 (A)将活细胞与ER选择性探针ER Blue(Cat#22634,蓝色)和nuclear Red LCS1(Cat#17542,红色)共染色。 (B)将活细胞与ER选择性探针ER Blue (Cat#22634,蓝色)和Nuclear Red LCS1(Cat#17542,红色)共染色,然后用4%甲醛固定。

 

 

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钙离子荧光探针Cal-770-Dextran Conjugate *MW 3,000*

钙离子荧光探针Cal-770-Dextran Conjugate *MW 3,000*

钙离子荧光探针Cal-770-Dextran Conjugate *MW 3,000*    货号20461 货号 20461 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 0
Ex (nm) 758 Em (nm) 783
分子量 ~5000 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

钙测量对于许多生物学研究至关重要。显示结合钙后光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜,流式细胞仪,荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离钙浓度的变化。可以使用贴片移液器或显微注射将这些葡聚糖偶联的钙指示剂的细胞不渗透盐形式物理加载到细胞上。使用荧光显微镜测量来自这些细胞的荧光信号。与AM酯形式相比,我们的钙指示剂的右旋糖酐形式在泄漏和区室化方面均显着降低。在荧光红钙指示剂葡聚糖结合物中,Cal-770葡聚糖偶联物可能比其他红色荧光右旋糖酐偶联物更好,因为其更长的荧光波长已针对体内成像进行了优化。Cal-770 是近红外(NIR)钙指示剂,在〜775 nm处具有最大发射。它是唯一具有超过700 nm激发和发射波长的荧光钙指示剂。Cal-770 是极少数可用于体内成像的钙指示剂之一,因为它具有NIR荧光。

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钙离子篇:时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

产品说明书

使用Cal-520 AM,Cal-570 AM或Cal-630 AM酯类

1.使用Cal-520 ,Cal-590 或Cal-630 AM酯:

        AM酯是非极性酯,其易于穿过活细胞膜,并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是,使用AM酯时必须小心,因为它们易于水解,特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜(DMSO)。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下,AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南,实际应根据您的具体需求进行修改。

a)在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。

b)在实验当天,将Cal-520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液(HHBS)或您选择的缓冲液(0.04%Pluronic®F-127)中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。

注意:非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。

c)如果您的细胞(如CHO细胞)含有有机阴离子转运蛋白,可将丙磺舒(1-2 mM)加入染料工作溶液中(最终浓度为0.5-1 mM)以减少渗漏去酯化指标。

d)将等体积的染料工作溶液(来自步骤b或c)加入细胞板中。

e)将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟,然后在室温下将板孵育另外30分钟。

注意:孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f)用HHBS或您选择的缓冲液(含有阴离子转运蛋白抑制剂,如1mM丙磺舒,如果适用)替换染料工作溶液,以去除多余的探针。

g)在Ex / Em = 490 / 525nm(对于Cal-520 AM),540 / 5000nm(对于Cal-590 AM)或600 / 640nm(对于Cal-630 AM)进行实验。

 

2.测量细胞内钙响应:

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd,使用以下等式:

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光,Fmin是不存在钙时的荧光,Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数(Kd)是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比,荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者,细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。

 

参考文献

Spatio-temporal modulation of light for stimulation and recording of neuronal activity
Authors: He Ma, Michael Lawrence Castanares, Vincent Daria
Journal: (2018): 1072306

A Critical Period for the Rapid Modification of Synaptic Properties at the VPm Relay Synapse
Authors: Libiao Pan, Junhua Yang, Qian Yang, Xiaomeng Wang, Liya Zhu, Yali Liu, Huifang Lou, Chou Xu, Ying Shen, Hao Wang
Journal: Frontiers in molecular neuroscience (2017)

Advances in Two-Photon Scanning and Scanless Microscopy Technologies for Functional Neural Circuit Imaging
Authors: Simon R Schultz, Caroline S Copeland, Amanda J Foust, Peter Quicke, Renaud Schuck
Journal: Proceedings of the IEEE (2017): 139–157

Bidirectional communication between sensory neurons and osteoblasts in an in vitro co-culture system
Authors: Daisuke Kodama, Takao Hirai, Hisataka Kondo, Kazunori Hamamura, Akifumi Togari
Journal: FEBS Letters (2017)

Ca 2+ signals initiate at immobile IP 3 receptors adjacent to ER-plasma membrane junctions
Authors: Nagendra Babu Thillaiappan, Alap P Chavda, Stephen C Tovey, David L Prole, Colin W Taylor
Journal: Nature Communications (2017): 1505

Calcium Imaging Across Large Areas of Intact Vascular Endothelium Reveals Stimulus-Specific Sensory Cells
Authors: Matthew D Lee, Calum Wilson, John G McCarron
Journal: The FASEB Journal (2017): 1005–8

Calcium transient assays for compound screening with human iPSC-derived cardiomyocytes: Evaluating new tools
Authors: Neil J Daily, Radleigh Santos, Joseph Vecchi, Pinar Kemanli, Tetsuro Wakatsuki
Journal: Journal of evolving stem cell research (2017): 1

Characterization of postsynaptic calcium signals in the pyramidal neurons of anterior cingulate cortex
Authors: Xu-Hui Li, Qian Song, Tao Chen, Min Zhuo
Journal: Molecular Pain (2017): 1744806917719847

Direct measurement of TRPV4 and PIEZO1 activity reveals multiple mechanotransduction pathways in chondrocytes
Authors: M Rocio Servin-Vences, Mirko Moroni, Gary R Lewin, Kate Poole
Journal: eLife (2017): e21074

Expression of the GluA2 subunit of glutamate receptors is required for the normal dendritic differentiation of cerebellar Purkinje cells
Authors: Masahiko Tanaka, Tomomi Senda, Naohide Hirashima
Journal: Neuroscience Letters (2017)

 

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钙离子荧光探针Cal-770-Dextran Conjugate *MW 3,000*.pdf

荧光素-dT亚磷酰胺 CAS 289712-99-8 货号6201-AAT Bioquest荧光染料

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荧光素-dT亚磷酰胺 CAS 289712-99-8

荧光素-dT亚磷酰胺 CAS 289712-99-8

荧光素-dT亚磷酰胺 CAS 289712-99-8    货号6201 货号 6201 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 umoles 价格 2388
Ex (nm) 498 Em (nm) 517
分子量 1425.58 溶剂 MeCN
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号:6201

产品名称:荧光素-dT亚磷酰胺

CAS:289712-99-8

规格:100umoles

储存条件:-15℃避光防潮

保质期:6个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量:1425.58

外观:固体

溶剂:MeCN

激发波长(nm):498

发射波长(nm):517

 

产品介绍

荧光素-dT 亚磷酰胺含有一个 DMT 基团,可以对偶联进行量化。 它可以作为 dT 残基的替代物插入到目标序列中。 它可以将荧光素标签添加到寡核苷酸序列的所需位置。 它与常用的 6-FAM 亚磷酰胺互补,不含 DMT 基团,只能在 5′-末端添加,从而终止合成。我们还提供 HEX-dT 亚磷酰胺、TET-dT 亚磷酰胺、生物素-dT 亚磷酰胺、生物素-dT CPG 和荧光素-dT CPG。

点击查看光谱

 

参考文献

A Chiral-Nanoassemblies-Enabled Strategy for Simultaneously Profiling Surface Glycoprotein and MicroRNA in Living Cells.
Authors: Ma, Wei and Sun, Maozhong and Fu, Pan and Li, Si and Xu, Liguang and Kuang, Hua and Xu, Chuanlai
Journal: Advanced materials (Deerfield Beach, Fla.) (2017)

Sorting the unique chirality, right handed single wall carbon nanotubes via the dye modified ssDNA.
Authors: Liu, Ru and Chen, Zhong and Zhao, Feng and Chang, Xueling and Zu, Yan and Gao, Xueyun
Journal: Journal of nanoscience and nanotechnology (2011): 7587-92

Identification of unexpected modifications of fluorescein-labeled oligodeoxynucleotides by nuclease P1 digestion and mass spectrometric techniques.
Authors: Wu, H and Skrzypczynski, Z and Cornwell, M J and Aboleneen, H
Journal: Rapid communications in mass spectrometry : RCM (2000): 26-32

Recovery of an oligonucleotide using silver ions immobilized onto paramagnetic particles.
Authors: Ramírez-Vick, J E and García, A A and Lee, J
Journal: Preparative biochemistry & biotechnology (1998): 243-60

说明书
荧光素-dT亚磷酰胺 CAS 289712-99-8.pdf

StrandBrite 绿色荧光RNA定量试剂盒 高选择性 货号17657-AAT Bioquest荧光染料

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StrandBrite 绿色荧光RNA定量试剂盒 高选择性

StrandBrite 绿色荧光RNA定量试剂盒 高选择性

货号 17657 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 Tests 价格 4584
Ex (nm) 509 Em (nm) 529
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

StrandBrite 绿色荧光RNA定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的RNA检测试剂盒,检测和定量少量RNA对于各种分子生物学程序非常重要,例如测量体外转录RNA的产量和测量RNA浓度,然后进行Northern印迹分析,S1核酸酶测定,RNase保护测定,cDNA文库制备,反向转录PCR和差异显示PCR。最常用的测量核酸浓度的技术是测定260nm处的吸光度。基于吸光度的方法的主要缺点是由蛋白质,游离核苷酸和其他UV吸收化合物引起的干扰。使用敏感的荧光核酸染色可以缓解这种干扰问题。 StrandBrite RNA定量试剂是一种超灵敏荧光核酸染色剂,用于定量溶液中的RNA。 StrandBrite RNA定量试剂可使用荧光酶标仪或荧光分光光度计检测低至1.4 ng / mL的RNA。我们的StrandBrite 绿色荧光RNA定量试剂盒包括我们的StrandBrite 绿色核酸染色,具有优化且稳健的方案。它提供了一种方便的方法来量化溶液中的RNA。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的StrandBrite 绿色荧光RNA定量试剂盒 。 

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 490nm
发射: 540nm
cutoff: 515nm
推荐孔板: 黑色孔板

产品说明书

96孔板检测示例

操作步骤

以下方案是使用StrandBrite Green定量RNA的示例。 打开前让所有组件升温至室温。处理所有材料时,务必使用干净的一次性手套 使用无核酸酶水和无菌一次性聚丙烯塑料制品进行试剂制备。

注意:没有数据可用于解决StrandBrite Green RNA染色的致突变性或毒性。 因为这种试剂与核酸结合,所以应将其作为潜在的诱变剂进行处理,并进行适当的处理。 应谨慎处理DMSO储备溶液,因为已知DMSO有助于有机分子进入组织。

 

1.准备1X测定缓冲液

通过用无菌,蒸馏,无核酸酶的水稀释浓缩的缓冲液20X(组分B)来制备1X测定缓冲液。

 

2.准备StrandBrite 绿色工作溶液

通过在1X测定缓冲液中将浓缩的DMSO溶液稀释200倍来制备StrandBrite Green工作溶液。例如,将50μLStrandBrite Green(组分A)加入10 mL 1X测定缓冲液中(来自步骤1)。通过用铝箔覆盖或将其置于黑暗中来保护工作溶液免受光照。

注1:我们建议将此溶液用塑料容器而不是玻璃制备,因为染料可能会吸附到玻璃表面。

注2:为获得最佳结果,该溶液应在制备后几小时内使用。

 

3.准备RNA标准品的连续稀释液(0至1μg/ mL):

3.1将10μL100μg/ mL RNA原液(组分C)加入990μL分析缓冲液(组分B)中,得到1μg/ mL RNA溶液,然后进行1:3连续稀释,得到约1000,300, 100,30,10,3,1和0 ng / mL。

注意:未使用的核糖体RNA标准品(组分C)应在无核酸酶的塑料瓶中分成单次使用的等分试样,并储存在-20℃。

3.2如说明书中表1和2中所述,将RNA标准品和含有测试样品的RNA添加到96孔固体黑色微孔板中。

 

4.运行RNA测定:

4.1将100μLStrandBrite 绿色工作溶液(来自步骤2)添加到RNA标准品,空白对照和测试样品的每个孔中(参见步骤3)中,使总RNA测定体积为200μL/孔。

注意:对于384孔板,每孔加入25μL样品和25μLStrandBrite 绿色工作溶液。

4.2在室温下孵育反应2至5分钟,避光。

4.3使用荧光分光光度计在Ex / Em = 490 / 545nm(515nm处的截止值)下观察荧光增加。

注意:为尽量减少光漂白,请保持所有样品的荧光测量时间不变。

4.4空白孔中的荧光(仅含测定缓冲液)用作对照,并从具有RNA标准品或测试样品的那些比色皿的值中减去。根据RNA标准曲线确定样品的RNA浓度。

 

参考文献

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