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D-荧光素 游离酸 CAS 2591-17-5 货号12503-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

D-荧光素 游离酸 CAS 2591-17-5

D-荧光素 游离酸 CAS 2591-17-5

D-荧光素 游离酸 CAS 2591-17-5 货号12503 货号 12503 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 g 价格 7296
Ex (nm) 328 Em (nm) 533
分子量 280.32 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

D-荧光素是最流行的多功能生物发光底物。萤火虫荧光素酶/荧光素生物发光系统存在于萤火虫（Photinus pyralis）和其他几种甲虫中。荧光素酶通过二氧杂环丁酮中间体氧化ATP进行活化荧光素。萤火虫荧光素酶通过荧光素的ATP依赖性氧化产生光。来自该反应的560nm化学发光在数秒内达到峰值，当荧光素和ATP过量存在时，光输出与荧光素酶活性成比例。萤火虫荧光素酶长期以来与抗体结合，并在荧光素作为检测底物的免疫测定中用作标记物。与HRP和碱性磷酸酶相比，荧光素酶对化学修饰的耐受性较差。该酶的一个特别优点是除了其高灵敏度之外，在哺乳动物组织中存在低内源荧光素酶活性。荧光素酶的另一个重要用途是卫生监测领域，荧光素酶/荧光素系统可用于检测污染，因为存在于所有生物体中的ATP需要发光，这种ATP生物发光的主要应用是通过测试食品加工厂中的表面来确定质量，以确定是否存在设备或产品的污染。D-荧光素 游离酸 D-Luciferin 是美国AAT Bioquest 的产品。

D-荧光素钾盐及D-荧光素使用中的常见问题

金畔问号：荧光素酶到底该如何检测？

产品说明书

操作方法 

以下方案是钾盐和钠盐制备的一个例子，它可以适用于大多数细胞类型和体内动物用途。

1.用于体外生物发光图像测定的实施方案

1.1在无菌水中制备100mM（100-200X）荧光素原液，混合均匀。随配随用，或使用等分试样，其他等分储存在-20°C，避免冻融循环，避免暴露在光线下。

1.2在预热的组织培养基中制备0.5-1mM D-荧光素的工作溶液。

1.3从培养的细胞中分离培养基。

1.4将荧光素工作溶液加入细胞中，并在成像前将细胞在37°C孵育5-10分钟。

 

2.用于体内生物发光图像测定的实施方案

2.1在DPBS中制备15mg / mL荧光素储备溶液，不含Mg2+和Ca2+。 混合均匀。

2.2通过0.2μm过滤器过滤灭菌溶液。随配随用或单独使用等分试样，其余等分储存在-20°C，避免冻融循环，避免暴露在光线下。

2.3在动物体重150mg / kg（或10μL/ g荧光素储备溶液）成像前10-15分钟在腹膜内（i.p.）注射荧光素。

注意：应对每种动物模型进行荧光素的动力学研究，以确定峰值信号时间。

 

3.荧光素报告分析分子测定的实施方案

3.1在无菌水中制备100mM荧光素储备溶液。 随配随用或单独使用等分试样，其余等分储存在-20°C，避免冻融循环，避免暴露在光线下。

3.2制备1mM D-荧光素的工作溶液，其中含有3mM ATP，1mM DTT和15mM MgSO4的25mM tricine缓冲液，pH7.8。

3.3将5-10μl细胞裂解液移入微孔板中。使用不含裂解液的裂解试剂或缓冲液作为空白对照。

3.4根据制造商的说明，使用荧光素工作溶液的普利光度计。

3.5注入200μl荧光素工作溶液。

 

注意1：D-荧光素钾盐溶于无菌水和缓冲液，溶解度可高达25mg/mL。一般使用浓度为3-15 mg/mL。溶液的pH值、溶液中的氧气和保存时间对其保存过程中的稳定性非常重要。当溶液的pH<6.5（发生水解作用）或>7.5（发生消旋化作用，D型转化为L型）的情况下，D-荧光素钾盐相对不稳定。如果溶液中存在少量的氧气，将加速D-荧光素钾的降解速度。储备溶液可以在不含ATP的水中制备，并在-20°C下避光储存。必须用适当的碱中和游离酸溶解。

注意2：D-荧光素可与任何现有的文献或ATP分析系统一起使用。

注意3：如果检测ATP，请戴上手套并使用无ATP容器，尽量减少所有可能的ATP污染源。仅使用无菌无ATP水和试剂。使用高压灭菌水进行所有试剂制备。

 

参考文献

C3-Luc Cells Are an Excellent Model for Evaluation of Cellular Immunity following HPV16L1 Vaccination
Authors: Li-Li Li, He-Rong Wang, Zhi-Yi Zhou, Jing Luo, Xiao-Li Wang, Xiang-Qian Xiao, Yu-Bai Zhou, Yi Zeng
Journal: PloS one (2016): e0149748

Genome-wide microRNA analysis identifies miR-188-3p as novel prognostic marker and molecular factor involved in colorectal carcinogenesis
Authors: Martin Pichler, Verena Stiegelbauer, Petra Vychytilova-Faltejskova, Cristina Ivan, Hui Ling, Elke Winter, Xinna Zhang, Matthew Goblirsch, Annika Wulf-Goldenberg, Masahisa Ohtsuka
Journal: American Association for Cancer Research (2016): clincanres–0497

Identification of a Novel Protein Kinase A Inhibitor by Bioluminescence-Based Screening
Authors: Tetsuya Ishimoto, Kenji Azechi, Hisashi Mori
Journal: Biological and Pharmaceutical Bulletin (2015): 1969–1974

Discovery of novel adenylyl cyclase inhibitor by cell-based screening
Authors: Hiroki Mano, Tetsuya Ishimoto, Takuya Okada, Naoki Toyooka, Hisashi Mori
Journal: Biological and Pharmaceutical Bulletin (2014): 1689–1693

说明书
D-荧光素 游离酸 CAS 2591-17-5.pdf

Amplite 海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒 货号12537-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Amplite 海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒

Amplite 海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒

货号 12537 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 plates 价格 52308
Ex (nm) 429 Em (nm) 466
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于荧光素酶报告基因检测的试剂盒，β-半乳糖苷酶，β-葡萄糖醛酸酶和荧光素酶是常见的报告基因，而这其中，萤火虫荧光素酶是功能最多的报告基因。最近，其它荧光素酶的使用在逐渐稳固的上升，例如海肾荧光素酶。由于海肾荧光素酶受体分子非常小，因此不需要ATP的辅助。Amplite 海肾荧光素酶报告基团检测试剂盒提供了一个快速灵敏的检测海肾荧光素酶活性的方案。该方案使用了独特的荧光基质形成以实现基于细胞的胞内海肾荧光素酶活性检测。独特的荧光基质与海肾荧光素酶反应时，产生强烈的荧光。本试剂盒提供所有必需组分，并且适用于HTS（高通量筛选）研究。本试剂盒灵敏度高，可以便捷地用于96或384微孔板分析。本检测法适合标准的细胞生长培养基，也可用于原始或合成的hRluc基因表达检测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒。 

金畔问号：荧光素酶到底该如何检测？

 

适用仪器

发光酶标仪  
推荐孔板： 白色孔板

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备细胞板
2.根据需要处理细胞
3.从细胞板中去除培养基
4.加入海肾荧光素酶工作溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）
5.在室温下孵育5-10分钟
6.检测荧光强度

 

溶液制备  

1.工作溶液

将1体积100X荧光素酶底物（组分A）添加到100体积的测定缓冲液（组分B）中，制成海肾荧光素酶工作溶液。 注意：海肾荧光素酶工作溶液对光非常敏感，应避免光照。 另外，它不稳定，应放在冰上并在2小时内使用。

点击查看细胞制备指南

 

样品操作及分析

1.用测试化合物处理细胞（或样品），在所需化合物缓冲液中加入10 µL 10X测试化合物（96孔板）或5 µL 5X测试化合物（384孔板）。
 
2.将细胞板在5％CO2培养箱中于37°C孵育一段时间（通常为4小时至过夜）。

3.每孔海肾荧光素酶工作溶液中加入100 µL（96孔板）或25 µL（384孔板）。

4.在室温下避光将平板孵育5-10分钟。 

5.用酶标仪检测荧光强度。

 

参考文献

Reassembly of a bioluminescent protein Renilla luciferase directed through DNA hybridization
Authors: Cissell KA, Rahimi Y, Shrestha S, Deo SK.
Journal: Bioconjug Chem (2009): 15

RNA detection using peptide-inserted Renilla luciferase
Authors: Andou T, Endoh T, Mie M, Kobatake E.
Journal: Anal Bioanal Chem (2009): 661

The cAMP-dependent protein kinase inhibitor H-89 attenuates the bioluminescence signal produced by Renilla Luciferase
Authors: Herbst KJ, Allen MD, Zhang J.
Journal: PLoS One (2009): e5642

Bioluminescent indicators for Ca2+ based on split Renilla luciferase complementation in living cells
Authors: Kaihara A, Umezawa Y, Furukawa T.
Journal: Anal Sci (2008): 1405

Coelenterazine-binding protein of Renilla muelleri: cDNA cloning, overexpression, and characterization as a substrate of luciferase
Authors: Titushin MS, Markova SV, Frank LA, Malikova NP, Stepanyuk GA, Lee J, Vysotski ES.
Journal: Photochem Photobiol Sci (2008): 189

Mutational optimization of the coelenterazine-dependent luciferase from Renilla
Authors: Woo J, von Arnim AG.
Journal: Plant Methods (2008): 23

Structure-function studies on the active site of the coelenterazine-dependent luciferase from Renilla
Authors: Woo J, Howell MH, von Arnim AG.
Journal: Protein Sci (2008): 725

Crystal structures of the luciferase and green fluorescent protein from Renilla reniformis
Authors: Loening AM, Fenn TD, Gambhir SS.
Journal: J Mol Biol (2007): 1017

Hormone treatment enhances WT1 activation of Renilla luciferase constructs in LNCaP cells
Authors: Hanson J, Reese J, Gorman J, Cash J, Fraizer G.
Journal: Front Biosci (2007): 1387

Quantification of dynamic protein complexes using Renilla luciferase fragment complementation applied to protein kinase A activities in vivo
Authors: Stefan E, Aquin S, Berger N, Landry CR, Nyfeler B, Bouvier M, Michnick SW.
Journal: Proc Natl Acad Sci U S A (2007): 16916

 

相关产品

产品名称 货号
Amplite 高斯荧光素酶报告基因检测试剂盒 Cat#12530

说明书
Amplite 海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒.pdf

D-荧光素 游离酸 CAS 2591-17-5 货号12502-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

D-荧光素 游离酸 CAS 2591-17-5

D-荧光素 游离酸 CAS 2591-17-5

D-荧光素 游离酸 CAS 2591-17-5 货号12502 货号 12502 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 mg 价格 1272
Ex (nm) 328 Em (nm) 533
分子量 280.32 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

D-荧光素是最流行的多功能生物发光底物。萤火虫荧光素酶/荧光素生物发光系统存在于萤火虫（Photinus pyralis）和其他几种甲虫中。荧光素酶通过二氧杂环丁酮中间体氧化ATP进行活化荧光素。萤火虫荧光素酶通过荧光素的ATP依赖性氧化产生光。来自该反应的560nm化学发光在数秒内达到峰值，当荧光素和ATP过量存在时，光输出与荧光素酶活性成比例。萤火虫荧光素酶长期以来与抗体结合，并在荧光素作为检测底物的免疫测定中用作标记物。与HRP和碱性磷酸酶相比，荧光素酶对化学修饰的耐受性较差。该酶的一个特别优点是除了其高灵敏度之外，在哺乳动物组织中存在低内源荧光素酶活性。荧光素酶的另一个重要用途是卫生监测领域，荧光素酶/荧光素系统可用于检测污染，因为存在于所有生物体中的ATP需要发光，这种ATP生物发光的主要应用是通过测试食品加工厂中的表面来确定质量，以确定是否存在设备或产品的污染。D-荧光素 游离酸 D-Luciferin 是美国AAT Bioquest 的产品。

D-荧光素钾盐及D-荧光素使用中的常见问题

金畔问号：荧光素酶到底该如何检测？

产品说明书

操作方法 

以下方案是钾盐和钠盐制备的一个例子，它可以适用于大多数细胞类型和体内动物用途。

1.用于体外生物发光图像测定的实施方案

1.1在无菌水中制备100mM（100-200X）荧光素原液，混合均匀。随配随用，或使用等分试样，其他等分储存在-20°C，避免冻融循环，避免暴露在光线下。

1.2在预热的组织培养基中制备0.5-1mM D-荧光素的工作溶液。

1.3从培养的细胞中分离培养基。

1.4将荧光素工作溶液加入细胞中，并在成像前将细胞在37°C孵育5-10分钟。

 

2.用于体内生物发光图像测定的实施方案

2.1在DPBS中制备15mg / mL荧光素储备溶液，不含Mg2+和Ca2+。 混合均匀。

2.2通过0.2μm过滤器过滤灭菌溶液。随配随用或单独使用等分试样，其余等分储存在-20°C，避免冻融循环，避免暴露在光线下。

2.3在动物体重150mg / kg（或10μL/ g荧光素储备溶液）成像前10-15分钟在腹膜内（i.p.）注射荧光素。

注意：应对每种动物模型进行荧光素的动力学研究，以确定峰值信号时间。

 

3.荧光素报告分析分子测定的实施方案

3.1在无菌水中制备100mM荧光素储备溶液。 随配随用或单独使用等分试样，其余等分储存在-20°C，避免冻融循环，避免暴露在光线下。

3.2制备1mM D-荧光素的工作溶液，其中含有3mM ATP，1mM DTT和15mM MgSO4的25mM tricine缓冲液，pH7.8。

3.3将5-10μl细胞裂解液移入微孔板中。使用不含裂解液的裂解试剂或缓冲液作为空白对照。

3.4根据制造商的说明，使用荧光素工作溶液的普利光度计。

3.5注入200μl荧光素工作溶液。

 

注意1：D-荧光素钾盐溶于无菌水和缓冲液，溶解度可高达25mg/mL。一般使用浓度为3-15 mg/mL。溶液的pH值、溶液中的氧气和保存时间对其保存过程中的稳定性非常重要。当溶液的pH<6.5（发生水解作用）或>7.5（发生消旋化作用，D型转化为L型）的情况下，D-荧光素钾盐相对不稳定。如果溶液中存在少量的氧气，将加速D-荧光素钾的降解速度。储备溶液可以在不含ATP的水中制备，并在-20°C下避光储存。必须用适当的碱中和游离酸溶解。

注意2：D-荧光素可与任何现有的文献或ATP分析系统一起使用。

注意3：如果检测ATP，请戴上手套并使用无ATP容器，尽量减少所有可能的ATP污染源。仅使用无菌无ATP水和试剂。使用高压灭菌水进行所有试剂制备。

 

参考文献

C3-Luc Cells Are an Excellent Model for Evaluation of Cellular Immunity following HPV16L1 Vaccination
Authors: Li-Li Li, He-Rong Wang, Zhi-Yi Zhou, Jing Luo, Xiao-Li Wang, Xiang-Qian Xiao, Yu-Bai Zhou, Yi Zeng
Journal: PloS one (2016): e0149748

Genome-wide microRNA analysis identifies miR-188-3p as novel prognostic marker and molecular factor involved in colorectal carcinogenesis
Authors: Martin Pichler, Verena Stiegelbauer, Petra Vychytilova-Faltejskova, Cristina Ivan, Hui Ling, Elke Winter, Xinna Zhang, Matthew Goblirsch, Annika Wulf-Goldenberg, Masahisa Ohtsuka
Journal: American Association for Cancer Research (2016): clincanres–0497

Identification of a Novel Protein Kinase A Inhibitor by Bioluminescence-Based Screening
Authors: Tetsuya Ishimoto, Kenji Azechi, Hisashi Mori
Journal: Biological and Pharmaceutical Bulletin (2015): 1969–1974

Discovery of novel adenylyl cyclase inhibitor by cell-based screening
Authors: Hiroki Mano, Tetsuya Ishimoto, Takuya Okada, Naoki Toyooka, Hisashi Mori
Journal: Biological and Pharmaceutical Bulletin (2014): 1689–1693

说明书
D-荧光素 游离酸 CAS 2591-17-5.pdf

Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒 货号12520-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒

Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒

Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒 货号12520 货号 12520 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 plates 价格 39060
Ex (nm) Em (nm)
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于荧光素酶报告基因检测的试剂盒。β-半乳糖苷酶，β-葡萄糖醛酸酶和荧光素酶是常见的报告基因。最好的多功能常见报告基因是来自于北美的萤火虫Photinus pyralis的荧光素酶。此酶蛋白的活性不需要进行蛋白质翻译后修饰获得。它在活细胞中高浓度积累不会造成细胞毒性，可以在原核和真核细胞中使用。在ATP、镁离子和氧存在的条件下，萤火虫荧光素酶催化荧光素氧化形成生物荧光。Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒利用与荧光强度相关的公式来定量检测活细胞和细胞抽提物中的荧光素酶。在荧光素酶的催化下，我们的试剂/试剂盒会产生具有强烈荧光的荧光产物。本试剂盒提供所有的必需组分，并且经过优化处理，我们还提供可以用于HTS（高通量筛选）实验方案。本试剂盒具有非常好的灵敏度，可以用于对灵敏度有要求的分析。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光素酶报告基因检测试剂盒。 

金畔问号：荧光素酶到底该如何检测？

 

适用仪器

发光酶标仪  
推荐孔板： 白色孔板

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备细胞（样品）（96孔板是100 µL /孔，384孔板是25 µL /孔）
2.添加等量的萤光素酶工作溶液
3.在室温下孵育10-20分钟
4.检测560 nm处的荧光强度

 

溶液制备 

1.工作溶液配制

将全部反应缓冲液（组分B）转移到荧光素酶（组分A）的瓶中，并充分混合以制成荧光素酶工作溶液。

点击查看细胞制备指南

 

样品操作及分析

1.进行荧光素酶检测：

1.1通过在所需化合物缓冲液中加入10 µL 10X测试化合物（96孔板）或5 µL 5X测试化合物（384孔板）来用检测化合物处理细胞（或样品）。 对于空白孔（没有细胞的培养基），添加相应量的化合物缓冲液。

1.2将细胞板在5％CO2培养箱中于37°C孵育一段时间（通常为4小时至过夜）。

1.3每孔荧光素酶工作溶液添加100 µL（96孔板）或25 µL（384孔板）。

1.4避光在室温下孵育平板10-20分钟。

1.5用酶标仪检测荧光强度。

 

2.建立标准的萤光素酶校准曲线：注意：如果需要计算样品中萤光素酶的绝对量，则应与上述测定法一起生成萤光素酶标准曲线。

2.1使用不含萤光素酶的样品（作为对照）来检测背景发光，在含0.1％BSA的PBS缓冲液中进行一系列萤光素酶稀释液。 注意：通常萤光素酶的浓度从1 pg / mL到1 ng / mL是合适的。

2.2将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的稀释的荧光素酶溶液添加到一个空板中。

2.3加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的荧光素酶工作溶液。

2.4在避光的条件下，将反应混合物在室温下孵育10-20分钟。

2.5用标准酶标仪记录荧光强度。

2.6生成荧光素酶标准曲线。

 

参考文献

LncRNA TUBA4B functions as a competitive endogenous RNA to inhibit gastric cancer progression by elevating PTEN via sponging miR-214 and miR-216a/b
Authors: Jianbo Guo, Yan Li, He Duan, Lu Yuan
Journal: Cancer Cell International (2019): 156

Identification of compounds that modulate retinol signaling using a cell-based qHTS assay
Authors: Yanling Chen, Srilatha Sakamuru, Ruili Huang, David H Reese, Menghang Xia
Journal: Toxicology in Vitro (2016): 287–296

Microwave ablation-assisted liver gene transfection in rats
Authors: Ruoyu Jiang, Lingkai Meng, Longhao Sun, Xianghui He, Xiaoyu Liang, Jie Zhang, Zhixiang Zhang
Journal: International Journal of Hyperthermia (2016): 666–672

Activation of relaxin family receptor 1 from different mammalian species by relaxin peptide and small-molecule agonist ML290
Authors: Zaohua Huang, Courtney Myhr, Ross AD Bathgate, Brian A Ho, Amaya Bueno, Xin Hu, Jingbo Xiao, Noel Southall, Elena Barnaeva, Irina U Agoulnik
Journal: Frontiers in endocrinology (2015)

Neuroprotective effect of schizandrin A on oxygen and glucose deprivation/reperfusion-induced cell injury in primary culture of rat cortical neurons
Authors: Cai-Ping Wang, Gui-Cai Li, Yun-Wei Shi, Xiao-Chuan Zhang, Jian-Long Li, Zhi-Wei Wang, Fei Ding, Xin-Miao Liang
Journal: Journal of physiology and biochemistry (2014): 735–747

Discovery of ML367, inhibitor of ATAD5 stabilization
Authors: Jason M Rohde, Ganesha Rai, Yong Jun Choi, Srilatha Sakamuru, Jennifer T Fox, Ruili Huang, Menghang Xia, Kyungjae Myung, Matthew B Boxer, David J Maloney
Journal: (2013)

说明书
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Amplite 海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒 货号12536-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

Amplite 海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒

Amplite 海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒

货号 12536 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 10 plates 价格 12588
Ex (nm) 429 Em (nm) 466
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于荧光素酶报告基因检测的试剂盒，β-半乳糖苷酶，β-葡萄糖醛酸酶和荧光素酶是常见的报告基因，而这其中，萤火虫荧光素酶是功能最多的报告基因。最近，其它荧光素酶的使用在逐渐稳固的上升，例如海肾荧光素酶。由于海肾荧光素酶受体分子非常小，因此不需要ATP的辅助。Amplite 海肾荧光素酶报告基团检测试剂盒提供了一个快速灵敏的检测海肾荧光素酶活性的方案。该方案使用了独特的荧光基质形成以实现基于细胞的胞内海肾荧光素酶活性检测。独特的荧光基质与海肾荧光素酶反应时，产生强烈的荧光。本试剂盒提供所有必需组分，并且适用于HTS（高通量筛选）研究。本试剂盒灵敏度高，可以便捷地用于96或384微孔板分析。本检测法适合标准的细胞生长培养基，也可用于原始或合成的hRluc基因表达检测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒。 

金畔问号：荧光素酶到底该如何检测？

 

适用仪器

发光酶标仪  
推荐孔板： 白色孔板

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备细胞板
2.根据需要处理细胞
3.从细胞板中去除培养基
4.加入海肾荧光素酶工作溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）
5.在室温下孵育5-10分钟
6.检测荧光强度

 

溶液制备  

1.工作溶液

将1体积100X荧光素酶底物（组分A）添加到100体积的测定缓冲液（组分B）中，制成海肾荧光素酶工作溶液。 注意：海肾荧光素酶工作溶液对光非常敏感，应避免光照。 另外，它不稳定，应放在冰上并在2小时内使用。

点击查看细胞制备指南

 

样品操作及分析

1.用测试化合物处理细胞（或样品），在所需化合物缓冲液中加入10 µL 10X测试化合物（96孔板）或5 µL 5X测试化合物（384孔板）。
 
2.将细胞板在5％CO2培养箱中于37°C孵育一段时间（通常为4小时至过夜）。

3.每孔海肾荧光素酶工作溶液中加入100 µL（96孔板）或25 µL（384孔板）。

4.在室温下避光将平板孵育5-10分钟。 

5.用酶标仪检测荧光强度。

 

参考文献

Reassembly of a bioluminescent protein Renilla luciferase directed through DNA hybridization
Authors: Cissell KA, Rahimi Y, Shrestha S, Deo SK.
Journal: Bioconjug Chem (2009): 15

RNA detection using peptide-inserted Renilla luciferase
Authors: Andou T, Endoh T, Mie M, Kobatake E.
Journal: Anal Bioanal Chem (2009): 661

The cAMP-dependent protein kinase inhibitor H-89 attenuates the bioluminescence signal produced by Renilla Luciferase
Authors: Herbst KJ, Allen MD, Zhang J.
Journal: PLoS One (2009): e5642

Bioluminescent indicators for Ca2+ based on split Renilla luciferase complementation in living cells
Authors: Kaihara A, Umezawa Y, Furukawa T.
Journal: Anal Sci (2008): 1405

Coelenterazine-binding protein of Renilla muelleri: cDNA cloning, overexpression, and characterization as a substrate of luciferase
Authors: Titushin MS, Markova SV, Frank LA, Malikova NP, Stepanyuk GA, Lee J, Vysotski ES.
Journal: Photochem Photobiol Sci (2008): 189

Mutational optimization of the coelenterazine-dependent luciferase from Renilla
Authors: Woo J, von Arnim AG.
Journal: Plant Methods (2008): 23

Structure-function studies on the active site of the coelenterazine-dependent luciferase from Renilla
Authors: Woo J, Howell MH, von Arnim AG.
Journal: Protein Sci (2008): 725

Crystal structures of the luciferase and green fluorescent protein from Renilla reniformis
Authors: Loening AM, Fenn TD, Gambhir SS.
Journal: J Mol Biol (2007): 1017

Hormone treatment enhances WT1 activation of Renilla luciferase constructs in LNCaP cells
Authors: Hanson J, Reese J, Gorman J, Cash J, Fraizer G.
Journal: Front Biosci (2007): 1387

Quantification of dynamic protein complexes using Renilla luciferase fragment complementation applied to protein kinase A activities in vivo
Authors: Stefan E, Aquin S, Berger N, Landry CR, Nyfeler B, Bouvier M, Michnick SW.
Journal: Proc Natl Acad Sci U S A (2007): 16916

 

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