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荧光底物Ala-R110 货号13204-AAT Bioquest荧光染料

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荧光底物Ala-R110

荧光底物Ala-R110

荧光底物Ala-R110 货号13204 货号 13204 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 5 mg 价格 2472
Ex (nm) 500 Em (nm) 522
分子量 545.42 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：13204

产品名称：荧光底物Ala-R110

规格：5 mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量：545.42

溶剂：DMSO

激发波长(nm)：500

发射波长(nm)：522

消光系数（cm-1 M-1）:80000

 

产品介绍

Ala-R110是一种荧光底物，可用于检测氨肽酶M底物，丙氨酰氨肽酶和胰蛋白酶的活性。 Ala-R110可通过检测其丙氨酰氨肽酶活性来检测食品和其他样品中的某些细菌。与Ala-AMC（＃13458）相比，Ala-R110更敏感。可以使用常见的FITC通道或FITC滤波片组轻松检测其酶促产物。

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参考文献

Inhibitory effects of glycopyrronium, formoterol, and budesonide on coronavirus HCoV-229E replication and cytokine production by primary cultures of human nasal and tracheal epithelial cells.
Authors: Yamaya, Mutsuo and Nishimura, Hidekazu and Deng, Xue and Sugawara, Mitsuru and Watanabe, Oshi and Nomura, Kazuhiro and Shimotai, Yoshitaka and Momma, Haruki and Ichinose, Masakazu and Kawase, Tetsuaki
Journal: Respiratory investigation (2020): 155-168

A Selective, Dual Emission β-Alanine Aminopeptidase Activated Fluorescent Probe for the Detection of Pseudomonas aeruginosa, Burkholderia cepacia, and Serratia marcescens.
Authors: Váradi, Linda and Najib, Elias Y and Hibbs, David E and Perry, John D and Groundwater, Paul W
Journal: Molecules (Basel, Switzerland) (2019)

Fluorogenic l-alanylaminopeptidase substrates derived from 6-amino-2-hetarylquinolines and 7-amino-3-hetarylcoumarins and their potential applications in diagnostic microbiology.
Authors: Cellier-Rastit, Marie and James, Arthur L and Orenga, Sylvain and Perry, John D and Robinson, Shaun N and Turnbull, Graeme and Stanforth, Stephen P
Journal: Bioorganic & medicinal chemistry letters (2019): 1227-1231

In situ imaging of aminopeptidase N activity in hepatocellular carcinoma: a migration model for tumour using an activatable two-photon NIR fluorescent probe.
Authors: Li, Haidong and Li, Yueqing and Yao, Qichao and Fan, Jiangli and Sun, Wen and Long, Saran and Shao, Kun and Du, Jianjun and Wang, Jingyun and Peng, Xiaojun
Journal: Chemical science (2019): 1619-1625

A latent green fluorescent styrylcoumarin probe for the selective growth and detection of Gram negative bacteria.
Authors: Váradi, Linda and Wang, Miaoyi and Mamidi, Ramesh R and Luo, Jia Lin and Perry, John D and Hibbs, David E and Groundwater, Paul W
Journal: Bioorganic & medicinal chemistry (2018): 4745-4750

Aminopeptidase N (CD13) targeted MR and NIRF dual-modal imaging of ovarian tumor xenograft.
Authors: Meng, Ying and Zhang, Zixin and Liu, Kang and Ye, Ling and Liang, Yuting and Gu, Wei
Journal: Materials science & engineering. C, Materials for biological applications (2018): 968-974

CD7 is expressed on a subset of normal CD34-positive myeloid precursors.
Authors: Kriegsmann, Katharina and Löffler, Harald and Eckstein, Volker and Schulz, Renate and Kräker, Sandra and Braun, Ute and Luft, Thomas and Hegenbart, Ute and Schönland, Stefan and Dreger, Peter and Krämer, Alwin and Ho, Anthony D and Müller-Tidow, Carsten and Hundemer, Michael
Journal: European journal of haematology (2018): 318-325

FACS isolation of endothelial cells and pericytes from mouse brain microregions.
Authors: Crouch, Elizabeth E and Doetsch, Fiona
Journal: Nature protocols (2018): 738-751

Ubenimex, an APN inhibitor, could serve as an anti‑tumor drug in RT112 and 5637 cells by operating in an Akt‑associated manner.
Authors: Wang, Xiaoqing and Liu, Yang and Liu, Wei and Zhang, Yongfei and Guo, Feng and Zhang, Lijuan and Cui, Mingyu and Liu, Shuai and Wu, Rongde
Journal: Molecular medicine reports (2018): 4531-4539

CD13 Autoantibodies Are Elevated in Sera From Mothers of Infants With Neonatal Cholestasis of Different Causes.
Authors: Xu, Xinling and Rahbar, Afsar and Omarsdottir, Soley and Teng, Jonas and Németh, Antal and Fischler, Björn and Söderberg-Nauclér, Cecilia
Journal: Journal of pediatric gastroenterology and nutrition (2017): 76-82

说明书
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锌离子荧光探针TSQ CAS 109628-27-5 货号21254-AAT Bioquest荧光染料

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锌离子荧光探针TSQ CAS 109628-27-5

锌离子荧光探针TSQ CAS 109628-27-5

锌离子荧光探针TSQ CAS 109628-27-5 货号21254 货号 21254 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 5 mg 价格 1008
Ex (nm) 344 Em (nm) 385
分子量 328.38 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：21254

产品名称：锌离子荧光探针TSQ

CAS：109628-27-5

规格：5mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量：328.38

溶剂：DMSO

激发波长（nm）：344

发射波长（nm）：385

 

产品介绍

锌离子荧光探针TSQ是美国AAT Bioquest生产的用于检测锌离子的荧光探针。TSQ与Zn离子结合后，吸收波长和发射波长分别位于334nm和495nm。在495nm处可以发出很强的荧光。作为一个中性pH值的荧光探针，它已经被证明是一个具有很好的选择性、无毒的荧光探针。TSQ的水溶性不是很好，这使它不适合在活组织中对锌进行测定和成像。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的锌离子荧光探针TSQ。 

 

参考文献

The role of nitric oxide synthase in an early phase Cd-induced acute cytotoxicity in MCF-7 cells
Authors: Lingying Zhong, Lumei Wang, Lurong Xu, Qunlu Liu, Linlei Jiang, Yuee Zhi, Wei Lu, Pei Zhou
Journal: Biological trace element research (2015): 130–138

The role of NOS-mediated ROS accumulation in an early phase Cu-induced acute cytotoxicity in MCF-7 cells
Authors: Lingying Zhong, Lumei Wang, Lurong Xu, Qunlu Liu, Linlei Jiang, Yuee Zhi, Wei Lu, Pei Zhou
Journal: Biometals (2015): 113–122

说明书
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荧光淬灭剂Tide Quencher 1胺 货号2192-AAT Bioquest荧光染料

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荧光淬灭剂Tide Quencher 1胺

荧光淬灭剂Tide Quencher 1胺

荧光淬灭剂Tide Quencher 1胺 货号2192 货号 2192 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 5 mg 价格 2604
Ex (nm) Em (nm)
分子量 560.47 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

荧光淬灭剂Tide Quencher 1胺是美国AAT Bioquest生产的淬灭剂，TQ7WS旨在成为Cy7，TF7和Alexa Fluor 750的优异猝灭剂。TQ7WS具有1.吸收更强; 2.淬火效率更高; 3.具有所需溶解度的多功能反应形式，用于标记寡核苷酸和肽。该TQ7WS产品主要用于标记肽。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的荧光淬灭剂Tide Quencher 1胺。 

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产品说明书

操作步骤

用Tide Quencher 染料标记氨基修饰的寡核苷酸

以下方案已经过优化，可用于标记200μg（~6 A260 nm单位）的专有寡核苷酸。您需要修改协议，以通过多次实验为您的特定应用程序获得最佳结果。您的氨基改性OLIGO必须进行处理以去除快速反应并消耗染料SUCCINIMIDYL酯的氨。

1.制备Oligo溶液（溶液A）将氨基修饰的oligo（~200μg）溶解在四硼酸盐缓冲液（100μL，pH 8.5±0.5）中。

注1：寡核苷酸必须在5’末端用胺基合成。参见Appenxidx 1纯化氨基修饰的寡核苷酸。

注2：避免使用含有伯胺的缓冲液，如Tris，因为它们与胺反应性化合物竞争结合。

2.准备染料溶液（溶液B）

2.1通过上下吸移将1mg染料SE溶解在100μLDMSO中（如果可能，> 10mg / mL）。将小瓶侧面的溶液原液离心至小瓶底部。

注意：在开始缀合之前准备DMSO染料溶液。染料溶液的长期储存可降低染料活性。任何含有染料的溶液都应避光。我们不建议您存储DMSO染料溶液以备将来使用。

3.运行共轭反应

3.1在搅拌或摇动（保持反应混合物避光）的同时向染料溶液（B，20-50μL）中加入寡聚物溶液（A，100μL）。

3.2在室温下在旋转器或振荡器上旋转或摇动反应混合物4-6小时。

注意：在第一个小时内每10分钟轻轻涡旋一下小瓶，以确保反应溶液保持充分混合。不要剧烈混合，因为材料可能留在小瓶的两侧。六小时后，应标记50-90％的胺修饰的寡核苷酸分子。如果更方便的话，反应可以孵育过夜。然而，在大多数情况下，过夜孵育不会导致更高的标记效率。

4.纯化染料 – 寡糖结合物

4.1通过乙醇沉淀标记的寡核苷酸进行初步纯化

a.将20μL（一般十分之一反应溶液体积）的3M NaCl和300μL冷无水乙醇（通常为两个半反应溶液体积）加入反应小瓶中。

b.充分混合溶液并将其置于-20℃下30分钟。

c.将该溶液在微量离心机中以10,000至15,000×g离心30分钟。

d.注意：如果离心时间不够长，可能会导致样品丢失。

f.小心取出上清液，用冷的70％乙醇冲洗沉淀1-3次并短暂干燥。

g.注意：一些未反应的标记试剂可能在反应过程中沉淀或可能粘在反应瓶的壁上。在离心之前，通过大量涡旋混合将该材料完全再溶解。重新溶解标记试剂可确保沉淀的寡核苷酸最少被未反应的标记物污染。

4.2通过HPLC或凝胶电泳进行最终纯化

 

使用Tide Quencher 染料标记肽

以下方案已经过优化，用于标记10 mg仅含有一个游离氨基的专利肽（MW~2000）。您需要修改方案，以便通过多个实验为您的特定应用程序提供最佳结果。

1.制备肽溶液（溶液A）

1.1将肽（~10 mg）溶解在DMF（~1 ml）中。

注1：肽必须用碱如三乙胺或碳酸钾中和。

注2：避免使用含有伯胺的缓冲液，如Tris，因为它们与胺反应性化合物竞争结合。

2.准备染料溶液（溶液B）

2.1通过上下吸移将5mg染料SE溶解在500μLDMF中（如果可能，> 10mg / mL）。

2.2注意：在开始缀合之前准备DMF染料溶液。染料溶液的长期储存可降低染料活性。任何含有染料的溶液都应避光。我们不建议您存储DMF染料溶液以备将来使用。

3.运行共轭反应

3.1向染料溶液（B，500μL）中加入肽溶液（A，1mL），搅拌或摇动（保持反应混合物不发光）。

3.2在室温下搅拌反应混合物4-6小时。

4.纯化染料 – 肽缀合物

4.1浓缩反应溶液并在C18柱上纯化，得到所需的缀合物。通过HPLC分析级分，合并> 97％纯度的级分并冻干。

4.2注1：HPLC纯化条件：TEAB缓冲液（三乙基碳酸氢铵，0.25mmol，pH = 7.0-8.0）用作缓冲液A，乙腈用作缓冲液B. HPLC在60分钟内从0％B至30％B进行（流速：100毫升/分钟）。

4.3注2：操作过程中避免强光。

 

参考文献

A mechanistic model to predict effects of cathepsin B and cystatin C on β-amyloid aggregation and degradation
Authors: Tyler J Perlenfein, Regina M Murphy
Journal: Journal of Biological Chemistry (2017): jbc–M117

Real-Time Detection of a Self-Replicating RNA Enzyme
Authors: Charles Olea, Gerald F Joyce
Journal: Molecules (2016): 1310

Development of Multi-Parametric/Multimodal Spectroscopy Apparatus for Characterization of Functional Interfaces
Authors: Lang Zhou, Mary Arugula, Christopher J Easley, Curtis Shannon, Aleksandr Simonian
Journal: ECS Transactions (2015): 9–16

Maternal serum glycosylated fibronectin as a point-of-care biomarker for assessment of preeclampsia
Authors: Juha Rasanen, Matthew J Quinn, Amber Laurie, Eric Bean, Charles T Roberts, Srinivasa R Nagalla, Michael G Gravett
Journal: American journal of obstetrics and gynecology (2015): 82–e1

Array of biodegradable microrafts for isolation and implantation of living, adherent cells
Authors: Yuli Wang, Colleen N Phillips, Gabriela S Herrera, Christopher E Sims, Jen Jen Yeh, Nancy L Allbritton
Journal: RSC advances (2013): 9264–9272

Development of SNAP-Tag Fluorogenic Probes for Wash-Free Fluorescence Imaging
Authors: Xiaoli Sun, Aihua Zhang, Brenda Baker, Luo Sun, Angela Howard, John Buswell, Damien Maurel, Anastasiya Masharina, Kai Johnsson, Christopher J Noren
Journal: ChemBioChem (2011): 2217–2226

FERRAMENTAS PARA ESTUDO DA BIOLOGIA DE GPCRS (G-PROTEIN COUPLED RECEPTORS)
Authors: Frederico Marianetti Soriani, Remo Castro Russo
Journal: Unknown

 

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产品名称 货号
荧光淬灭剂Tide Quencher 1酸 Cat#2190
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说明书
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iFluor 800 琥珀酰亚胺酯 货号1379-AAT Bioquest荧光染料

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iFluor 800 琥珀酰亚胺酯

iFluor 800 琥珀酰亚胺酯

iFluor 800 琥珀酰亚胺酯 货号1379 货号 1379 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 3924
Ex (nm) 801 Em (nm) 820
分子量 1541.91 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

iFluor 800 琥珀酰亚胺酯是美国AAT Bioquest生产的荧光染料，iFluor 染料是一系列优秀的荧光标记染料，可以覆盖整个可见光谱。所有iFluor 染料都具有优异的水溶性。它们的亲水性使有机溶剂的使用极小化。iFluor 染料也具有比经典荧光标记染料更好的标记性能，如FITC，TRITC，Texas Red ，Cy3 ，Cy5和Cy7。一些iFluor 染料在某些抗体上明显优于Alexa Fluor 标记染料。它们是用于标记蛋白质和核酸而不包含性能的极便宜的荧光染料（替代Alexa Fluor 染料）。每种iFluor染料的开发都与特定的Alexa Fluor 或其他标记染料（如DyLight 染料）的光谱特性相匹配。

琥珀酰亚胺基（NHS）酯被证明是用于胺修饰的极佳试剂，因为形成的酰胺键基本上与天然肽键相同并且稳定。这些试剂通常是稳定的并且与脂族胺显示出良好的反应性和选择性。当琥珀酰亚胺酯化合物用于缀合反应时，需要考虑的因素很少：1）溶剂：在大多数情况下，活性染料应溶于无水二甲基甲酰胺（DMF）或二甲基亚砜（DMSO）中。 2）反应pH：胺与琥珀酰亚胺酯的标记反应强烈依赖于pH。胺反应性试剂与非质子化脂族胺基团反应，包括蛋白质的末端胺和赖氨酸的β-氨基。因此，胺酰化反应通常在pH 7.5以上进行。通过琥珀酰亚胺酯进行的蛋白质修饰通常可以在pH 8.5-9.5下进行。 3）反应缓冲液：使用胺反应试剂时，必须避免使用含有游离胺（如Tris和甘氨酸）和硫醇化合物的缓冲液。广泛用于蛋白质沉淀的铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）也必须在进行染料缀合之前除去（例如通过透析）。 4）反应温度：大多数缀合在室温下进行。然而，特定标记反应可能需要升高或降低的温度。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的iFluor 800 琥珀酰亚胺酯。 

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  • AAT Bioquest iFluor 染料干货锦集 你想了解的都在这里
  • 锦囊：iFluor 系列染料大集合

产品说明书

染色样本分析

操作步骤

1.准备蛋白质储备溶液（溶液A）：

将100μL反应缓冲液（如1 M碳酸钠溶液或1 M磷酸盐缓冲液，pH~9.0）与900μL目标蛋白溶液（如抗体，蛋白质浓度> 2 mg / ml，如果可能）混合至100μL给予1 mL蛋白质标记原液。

注1：蛋白质溶液（溶液A）的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH低于8.0，则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。

注2：蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中，则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析，以除去广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）。

注3：不纯抗体、牛血清白蛋白（BSA）或明胶稳定的抗体不会被很好地标记。叠氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。可以通过透析或旋转柱除去叠氮化钠或硫柳汞，以获得极佳标记结果。

注4：如果蛋白质浓度低于2 mg / mL，则结合效率会显着降低。为获得极佳标记效率，建议极终蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。

 

2.准备染料储备溶液（溶液B）：

将无水DMSO加入到iFluor 染料SE小瓶中以制备10-20mM储备溶液。 通过移液或涡旋混合均匀。

注意：在开始缀合前准备染料储备溶液（溶液B）。 及时使用。 染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。 溶液B可在冰箱中保存两周，避光保存。 避免冻融循环。

 

3.确定极佳染料/蛋白质比例（可选）：

注意：每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能不利地影响其结合亲和力，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。我们建议您通过使用连续不同量的标记染料溶液重复步骤4和5来实验确定极佳染料/蛋白质比率。通常，对于大多数染料 – 蛋白质缀合物，推荐使用4-6种染料/蛋白质。

3.1使用10：1摩尔比的溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）作为起始点：将5μl染料储备溶液（溶液B，假设染料储备溶液为10 mM）加入到样品瓶中。蛋白质溶液（95μl溶液A）有效摇动。假设蛋白质浓度为10mg / mL并且蛋白质的分子量为~200KD，蛋白质的浓度为~0.05mM。

注意：蛋白质溶液中DMSO的浓度应<10％。

3.2运行缀合反应（参见下面的步骤4）。

3.3重复＃3.2，溶液B /溶液A的摩尔比为5：1;分别为15：1和20：1。

3.4使用预制的旋转柱纯化所需的缀合物。

3.5计算上述4种结合物的染料/蛋白质比（DOS）（见说明书）。

3.6运行上述4种结合物的功能测试，确定极佳的染料/蛋白质比例，以扩大标记反应。

 

4.运行结合反应：

4.1有效加入适量的染料储备溶液（溶液B）到蛋白质溶液（溶液A）的小瓶中晃动。

注意：溶液B /溶液的极佳摩尔比由步骤3.6确定。如果跳过步骤3，我们建议使用10：1溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）的摩尔比。

4.2继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。

 

5.纯化缀合物

以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料 – 蛋白质缀合物的实例。

5.1按照制造说明准备Sephadex G-25色谱柱。

5.2将反应混合物（直接从步骤4）加载到Sephadex G-25柱的顶部。

5.3样品在顶部树脂表面下方运行时立即加入PBS（pH 7.2-7.4）。

5.4向所需样品中加入更多PBS（pH 7.2-7.4）以完成色谱柱纯化。 合并含有所需染料 – 蛋白质缀合物的级分。

注1：立即使用时，染料 – 蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释，并等分多次使用。

注2：对于长期储存，染料 – 蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥

 

参考文献

Nanovesicle delivery to the liver via retinol binding protein and platelet-derived growth factor receptors: how targeting ligands affect biodistribution
Authors: Ching-Yun Hsu, Chun-Han Chen, Ibrahim A Aljuffali, You-Shan Dai, Jia-You Fang
Journal: Nanomedicine (2017)

 

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iFluor 800 酸 Cat#1375
iFluor 800 马来酰亚胺 Cat#1378
iFluor 488琥珀酰亚胺酯 Cat#1023

说明书
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细胞膜荧光探针DiIC12(3)-DS 货号22050-AAT Bioquest荧光染料

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细胞膜荧光探针DiIC12(3)-DS

细胞膜荧光探针DiIC12(3)-DS

细胞膜荧光探针DiIC12(3)-DS 货号22050 货号 22050 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 5 mg 价格 1272
Ex (nm) 550 Em (nm) 564
分子量 825.21 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

细胞膜荧光探针DiIC12(3)-DS是美国AAT Bioquest生产的用于标记细胞膜的荧光探针，DiI，DiO，DiD和DiR染料是用于标记膜和其他疏水结构的亲脂荧光染料家族。当掺入膜中或与亲脂性生物分子如蛋白质结合时，这些对环境敏感的染料的荧光大大增强，尽管它们在水中是弱荧光的。它们具有高消光系数，极性依赖性荧光和短激发态寿命。一旦应用于细胞，这些染料在细胞质膜内横向扩散，导致整个细胞在其最佳浓度下均匀染色。 DiI（橙色荧光），DiO（绿色荧光），DiD（红色荧光）和DiR（深红色荧光）的独特荧光颜色为活细胞的多色成像和流式细胞分析提供了便利的工具。 DiO和DiI可分别与标准FITC和TRITC过滤器一起使用。其中DiD被633 nm He-Ne激光器激发，并且具有比DiI更长的激发和发射波长，为标记具有显着内在荧光的细胞和组织提供了有价值的替代方案。由于红外光通过细胞和组织的有效传输以及红外范围内的低水平自发荧光，DiR可用于体内成像或示踪。该特定的DiI衍生物是含有亲水和亲脂部分的两亲分子。它在水中具有比高亲脂性DiI类似物更强的荧光。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的细胞膜荧光探针DiIC12(3)-DS。

Di系列染料 特点 选择建议
DiO染料（绿色） 活细胞或固定细胞、组织的的长期示踪剂。荧光强度低于DiI。对某些固定组织的染色效果一般。 DiI, DiO, DiD 和 DiR均可染色活细胞或固定细胞及组织（请您根据您的需求选择相应的探针），DiI比DiO荧光更亮；DiD，DiR波长更长，更适合组织染色；
DiA染料（绿色） 一种细胞膜绿色荧光染料，它在细胞膜中的扩散速度比 DiO 快，并且经常和 DiI 一起使用于细胞膜双色标记。可以进行染色后的固定。DiA 对固定细胞的染色效果比 DiO 好。
DiI染料（橙色） 活细胞或固定细胞、组织的的长期示踪剂。除标记细胞膜外，还可以检测细胞的融合和粘附、细胞迁移等。
DiB染料（橘色） 一种检测细胞膜电位的亲脂性阴离子荧光染料，它本身无荧光，当进人细胞与胞浆内的蛋白质结合后才发出荧光。当它进入细胞后，指示细胞内荧光强度增加，即膜电位增加表示细胞去极化；反之，若细胞内荧光强度降低，即膜电位降低表示细胞超极化。
DiD染料（红色） 染色效率高，均一，不易猝灭，细胞毒性低，背景干扰小。
DiS染料（红色） 一种细胞膜红色荧光染料，它在细胞膜中的扩散速度比 DiD快，可以进行染色后的固定。DiS 对固定细胞的染色效果比 DiD好。
DiR染料（深红色） 常用于标记细胞膜，红外荧光可以穿透细胞和组织，在活体成像中用来示踪。DiR可以进行染色后的固定。

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产品说明书

操作方法

1.准备DiO，DiI，DiD，DiS或DiR膜染色溶液：

1.1制备DMSO或EtOH储备溶液：储备溶液应在DMSO或EtOH中以1-5mM制备。

注意：储备溶液的未使用部分应储存在-20 ℃。 避免反复冻/融循环。

1.2准备工作溶液：将储备溶液（步骤1.1）稀释到合适的缓冲液中，如无血清培养基，HBSS或PBS制备1至5μM的工作溶液。

注意：对于不同的细胞类型和/或实验条件，应根据经验确定工作溶液的最终浓度。 建议在至少超过十倍范围的浓度下进行测试。

 

2.将细胞染成悬浮液：

2.1在染料工作溶液中悬浮细胞密度为1×106 / mL（来自步骤1.2）。

2.2在37°C孵育2-20分钟。 最佳孵育时间取决于细胞类型。 首先孵育20分钟，然后根据需要进行优化以获得均匀的标记。

2.3将标记的悬浮管以1000至1500rpm离心5分钟。

2.4取出上清液，轻轻地将细胞重新悬浮在预热（37°C）的生长培养基中。

2.5按步骤2.3和2.4洗涤两次。

 

3.染色贴壁细胞：

3.1在无菌玻璃盖玻片上培养贴壁细胞。

3.2从生长培养基中取出盖玻片，轻轻地排出多余的培养基。 将盖玻片放在湿度箱中。

3.3将100μL染料工作溶液（来自步骤1.2）吸移到盖玻片的角落，轻轻搅拌直至所有细胞都被覆盖。

3.4将盖玻片在37°C孵育2-20分钟。 最佳孵育时间取决于细胞类型。 首先孵育20分钟，然后根据需要进行优化以获得均匀的标记。

3.5排出染料工作溶液，用生长培养基清洗盖玻片2-3次。每个洗涤循环用预热的生长培养基覆盖细胞，孵育5-10分钟后排出培养基。

 

4.显微镜检测：

4.1说明书中的表1总结了DiD，DiO，DiI，DiS和DiR滤波器组的选择。

4.2为了同时检测多种染料，可提供如下多波段滤波器组：

a）DiI和DiO = Omega XF52，Chroma 51004

b）DiI和DiD = Omega XF92，Chroma 51007

c）DiI，DiO和DiD = Omega XF93，Chroma 61005

 

5.流式细胞仪检测：

用DiO，DiI，DiD，DiS和DiR标记的细胞可分别使用常规FL1，FL2，FL3和FL4流式细胞仪检测通道进行分析。

 

参考文献

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说明书
细胞膜荧光探针DiIC12(3)-DS.pdf