Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒 橙色荧光 适合流式细胞检测

	货号	22804	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 Tests	价格	2604
	Ex (nm)	546	Em (nm)	575
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于线粒体膜电位检测的试剂盒，Cell Meter检测试剂盒是一类用于检测细胞功能的系列工具，包括细胞活性、细胞毒性、细胞凋亡、细胞膜电位以及细胞周期等方面的指标。每种检测方案均能提供不同荧光颜色的检测方案。这些高效的检测方案为从多角度研究细胞功能活动提供了一种十分有效的方法。Cell Meter线粒体膜电位检测试剂盒 *橙色荧光 适合流式细胞检测* 专门通过检测线粒体跨膜电势的减少来检测细胞凋亡。线粒体跨膜电势瓦解与线粒体渗透转运孔的开放相一致，导致细胞色素C释放到胞浆中，它是下游凋亡级联反应的触发器。该荧光实验方案利用我们独有的MitoLite Orange来检测凋亡细胞中线粒体跨膜电势的减少。在正常细胞中，当MitoLite Orange积聚于线粒体时，红色荧光增加。然而在凋亡细胞中，MitoLite Orange随着线粒体跨膜电位的塌陷而减少。被MitoLite Orange染色的细胞可以通过488n的激发光（FL2 通道）来观察。该试剂盒可以与其它Cell Meter检测试剂盒同时检测细胞的活性和凋亡，该试剂盒已被优化，可用于流式细胞法筛选凋亡激活剂或抑制剂。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.用密度为5×10⁵到1×10⁶个细胞/ mL的测试化合物制备细胞
2.将2μL500XMitoTell Orange加入1 mL细胞溶液中
3.将细胞在37℃，5％CO₂培养箱中孵育15-30分钟
4.将细胞沉淀，并将细胞重悬于1mL生长培养基中
5.使用具有FL2通道的流式细胞仪分析细胞

操作步骤

1.对于每个样品，将细胞制备在1 mL温热培养基或您选择的缓冲液中，密度为5×10⁵至1×10⁶个细胞/ mL。注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。

2.用测试化合物处理细胞一段所需的时间以诱导细胞凋亡，并建立平行对照实验。

3.对于阴性对照：仅用载体处理细胞。

4.对于阳性对照：使用FCCP或CCCP以5-50μM在37℃，5％CO₂培养箱中处理细胞15至30分钟。注意：CCCP或FCCP可与MitoTell Orange同时添加。为了获得最佳结果，可能需要对每个单独的细胞系滴定CCCP或FCCP。

5.将2μL500XMitoTell 橙（组分A）加入处理过的细胞中。

6.将细胞在37℃，5％CO₂培养箱中孵育15至30分钟。注意：对于粘附细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在用MitoTell Orange染料加载溶液孵育之前用含有血清的培养基洗涤细胞一次。

7.将细胞以1000rpm离心4分钟，然后将细胞重悬于1mL的分析缓冲液（组分B）或您选择的缓冲液中。

8.使用具有FL2通道（Ex / Em = 540 / 590nm）的流式细胞仪监测荧光强度。

数据分析

参考文献

Safranine O as a fluorescent probe for mitochondrial membrane potential studied on the single particle level and in suspension
Authors: Perevoshchikova IV, Sorochkina AI, Zorov DB, Antonenko YN.
Journal: Biochemistry (Mosc) (2009): 663

Computer-assisted live cell analysis of mitochondrial membrane potential, morphology and calcium handling
Authors: Koopman WJ, Distelmaier F, Esseling JJ, Smeitink JA, Willems PH.
Journal: Methods (2008): 304

Determination of high mitochondrial membrane potential in spermatozoa loaded with the mitochondrial probe 5,5′,6,6′-tetrachloro-1,1′,3,3′-tetraethylbenzimidazolyl-carbocyanine iodide (JC-1) by using fluorescence-activated flow cytometry
Authors: Guthrie HD, Welch GR.
Journal: Methods Mol Biol (2008): 89

Effects of eprosartan on mitochondrial membrane potential and H2O2 levels in leucocytes in hypertension
Authors: Labios M, Martinez M, Gabriel F, Guiral V, Ruiz-Aja S, Beltran B, Munoz A.
Journal: J Hum Hypertens (2008): 493

How DASPMI reveals mitochondrial membrane potential: fluorescence decay kinetics and steady-state anisotropy in living cells
Authors: Ramadass R, Bereiter-Hahn J.
Journal: Biophys J (2008): 4068

Life cell quantification of mitochondrial membrane potential at the single organelle level
Authors: Distelmaier F, Koopman WJ, Testa ER, de Jong AS, Swarts HG, Mayatepek E, Smeitink JA, Willems PH.
Journal: Cytometry A (2008): 129

Mitochondrial membrane potential in axons increases with local nerve growth factor or semaphorin signaling
Authors: Verburg J, Hollenbeck PJ.
Journal: J Neurosci (2008): 8306

The mitochondrial membrane potential and Ca2+ oscillations in smooth muscle
Authors: Chalmers S, McCarron JG.
Journal: J Cell Sci (2008): 75

[Evaluation of sperm mitochondrial membrane potential by JC-1 fluorescent staining and flow cytometry]
Authors: Xia XY, Wu YM, Hou BS, Yang B, Pan LJ, Shi YC, Jin BF, Shao Y, Cui YX, Huang YF.
Journal: Zhonghua Nan Ke Xue (2008): 135

Cyclosporin A-induced oxidative stress is not the consequence of an increase in mitochondrial membrane potential
Authors: van der Toorn M, Kauffman HF, van der Deen M, Slebos DJ, Koeter GH, Gans RO, Bakker SJ.
Journal: Febs J (2007): 3003

相关产品

Cell Meter JC-10线粒体膜电位检测试剂盒 适合微孔板检测

	货号	22800	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	500 Tests	价格	3924
	Ex (nm)	508	Em (nm)	524
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Cell Meter JC-10线粒体膜电位检测试剂盒 适合微孔板检测 是美国AAT Bioquest研发的用于检测线粒体膜电位的试剂盒，JC-1在许多实验室中被广泛使用，但其水溶性差导致极大的不便。即使在1μM浓度下，JC-1也倾向于在水性缓冲液中沉淀。当需要高染料浓度时，JC-10被开发成为JC的优异替代品。与JC-1相比，JC-10具有更好的水溶性。 JC-10能够选择性地进入线粒体，并随着膜电位的增加可逆地将其颜色从绿色变为橙色。该性质是由于膜极化时JC-10聚集体的可逆形成导致发射光从520nm（即JC-10单体形式的发射）向570nm（即J-聚集体形式的发射）的移动。当在490nm处激发时，随着线粒体膜变得更加极化，JC-10的颜色从绿色橙色可逆地变为绿色橙色。使用通常安装在所有流式细胞仪中的过滤器可以检测两种颜色。可以在荧光通道1（FL1）中分析绿色发射，在通道2（FL2）中分析绿色橙色发射。除了用于流式细胞仪外，它还可用于荧光成像和荧光微孔板平台。这种Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒使研究人员能够以酶标仪的形式运行JC-10检测，并为监测线粒体膜电位变化提供了最强大的检测方法。

这种Cell Meter JC-10线粒体膜电位检测试剂盒使研究人员能够以酶标仪的形式运行JC-10检测，并为监测线粒体膜电位变化提供了最可靠的检测方法。该试剂盒基于阳离子亲脂性JC-10染料检测细胞中线粒体膜电位的变化。在正常细胞中，JC-10浓缩在线粒体基质中，在那里形成红色荧光聚集体。然而，在凋亡和坏死细胞中，JC-10扩散出线粒体。它变成单体形式并以绿色荧光染色细胞。该试剂盒可用于筛选凋亡激活剂和抑制剂。可以以方便的96孔和384孔荧光微量滴定板形式进行测定。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的线粒体膜电位荧光探针。

点击查看光谱

产品说明书

96孔板样品分析

概述

准备细胞

添加测试化合物

添加JC-10染料加载溶液（50μL/孔/ 96孔板或12.5μL/孔/ 384孔板）

在37℃，5％CO2培养箱中孵育30至60分钟

添加测定 缓冲液B（50μL/孔/ 96孔板或12.5μL/孔/ 384孔板）

在Ex / Em = 490/525和540/590 nm处监测荧光强度

操作步骤

1.准备细胞：
1.1对于贴壁细胞：在生长培养基中将细胞以20,000至80,000个细胞/孔/90μL过夜，96孔板或5,000至20,000个细胞/孔/20μL，用于384孔板。
1.2对于非粘附细胞：从培养基中离心细胞，然后将细胞沉淀悬浮于100,000-200,000细胞/孔/90μL的培养基中，用于96孔poly-D赖氨酸平板或25,000-50,000细胞/孔 /20μL，用于384孔聚-D赖氨酸板。 在实验之前，在制动器关闭的情况下以800rpm离心板2分钟。
注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。

2.准备JC-10染料加载溶液：
2.1使用前在室温下清洗所有套件组件。
2.2将50μL100XJC-10（组分A）加入5mL测定缓冲液A（组分B）中，充分混合。
注意：将未使用的100X JC-10（组分A）等分并保存在-20 oC。 避免反复冻/融循环。

3.运行JC-10测定：
3.1通过向所需缓冲液（例如PBS或HHBS）中加入10μL10X测试化合物（96孔板）或5μL5X测试化合物（384-板）来处理细胞。
注意：在添加化合物之前不必洗涤细胞。然而，如果测试的化合物对血清敏感，则可在添加化合物之前吸出生长培养基和血清因子。在抽吸后将相同体积的HHBS添加到孔中（例如对于96孔板为90μL或对于384孔板为20μL）。或者，细胞可以在无血清培养基中生长。
3.2在室温或37℃，5％CO2培养箱中培养细胞板至少15分钟或所需的时间（对于Jurkat细胞，用喜树碱4-6小时或用星形孢菌素处理3-5小时）到诱导细胞凋亡
3.3将50μL/孔（96孔板）或12.5μL/孔（384孔板）的JC-10染料加载溶液（来自步骤2.2）加入细胞板（来自步骤3.2）。
3.4将染料加载板在37℃，5％CO2培养箱中孵育30-60分钟，避光。
注意：适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。
3.5在读取荧光强度之前，将50μL/孔（96孔板）或12.5μL/孔（384孔板）的测定缓冲液B（组分C）加入染料加载板（来自步骤3.4）。
注1：装载后请勿清洗电池。
注2：对于非粘附细胞，建议在加入分析缓冲液B（组分C）后，以800rpm离心细胞板2分钟，同时停止制动。
3.6使用底部读取模式监测Ex / Em = 490 / 525nm（在515nm处截止）和540 / 590nm（在570nm处截止）的荧光强度以进行比率分析。

数据分析

Em在525/590处的荧光强度比率用于数据分析。

图1.在Jurkat细胞中用JC-10和JC-1测量了喜树碱诱导的线粒体膜电位变化。 用喜树碱（10mM）处理Jurkat细胞4小时后，向孔中加入JC-1和JC-10染料上样溶液并孵育30分钟。 使用NOVOstar酶标仪（BMG Labtech）在Ex / Em = 490 / 525nm和490 / 590nm下测量J-聚集体和单体形式的JC-1和JC-10的荧光强度。

参考文献

Determination of Hepatotoxicity in iPSC-Derived Hepatocytes by Multiplexed High Content Assays
Authors: Oksana Sirenko, Evan F Cromwell
Journal: (2018): 339–354

Inhibitors of Aβ42-induced endoplasmic reticular unfolded protein response (UPRER), in yeast, also rescue yeast cells from Aβ42-mediated apoptosis
Authors: Asma Derf, Ramesh Mudududdla, Sandip B Bharate, Bhabatosh Chaudhuri
Journal: European Journal of Pharmaceutical Sciences (2018)

Knockout of Mpv17-Like Protein (M-LPH) Gene in Human Hepatoma Cells Results in Impairment of mtDNA Integrity through Reduction of TFAM, OGG1, and LIG3 at the Protein Levels
Authors: Reiko Iida, Misuzu Ueki, Toshihiro Yasuda
Journal: Oxidative Medicine and Cellular Longevity (2018)

Role of Mcl-1 in regulation of cell death in human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes in vitro
Authors: Liang Guo, Sandy Eldridge, Michael Furniss, Jodie Mussio, Myrtle Davis
Journal: Toxicology and Applied Pharmacology (2018)

Boosted Membrane Potential as Bioenergetic Response to Anoxia in Dinoroseobacter shibae
Authors: Christian Kirchhoff, Heribert Cypionka
Journal: Frontiers in Microbiology (2017): 695

Evaluation of anticancer properties of a new α-methylene-δ-lactone DL-249 on two cancer cell lines
Authors: Dorota K Pomorska, Katarzyna Gach-Janczak, Rafal Jakubowski, Tomasz Janecki, Jacek Szymański, Anna Janecka
Journal: Open Life Sciences (2017): 178–189

In vitro cardiotoxicity assessment of environmental chemicals using an organotypic human induced pluripotent stem cell-derived model
Authors: Oksana Sirenko, Fabian A Grimm, Kristen R Ryan, Yasuhiro Iwata, Weihsueh A Chiu, Frederick Parham, Jessica A Wignall, Blake Anson, Evan F Cromwell, Mamta Behl
Journal: Toxicology and Applied Pharmacology (2017)

Study of the relationship between AGEs and oxidative stress damage to trophoblast cell mitochondria
Authors: Lingling Jiang, Jianying Yan, Lixiang Wu
Journal: Ginekologia Polska (2017): 372–378

13-Methyl-palmatrubine induces apoptosis and cell cycle arrest in A549 cells in vitro and in vivo
Authors: Jingxian Chen, Xingang Lu, Chenghua Lu, Chunying Wang, Haizhu Xu, Xiaoli Xu, Haixin Gou, Bing Zhu, Wangchun Du
Journal: Oncology Reports (2016): 2526–2534

Anti-proliferation effects, efficacy of cyasterone in vitro and in vivo and its mechanism
Authors: XinGang Lu, HongFu Qiu, Liu Yang, JieYing Zhang, ShuJie Ma, Lan Zhen
Journal: Biomedicine & Pharmacotherapy (2016): 330–339

相关产品