活性氧 Cell Meter 线粒体羟基自由基检测试剂盒

	货号	16055	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	200 Tests	价格	3924
	Ex (nm)	576	Em (nm)	598
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 线粒体羟基自由基检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于线粒体检测的试剂盒，细胞内羟基自由基的检测对于理解适当的细胞氧化还原调节及其失调对各种病理的影响至关重要。羟基（HO·）是与其他分子高度反应的活性氧（ROS）之一，以实现稳定性。通常，羟基被认为是氧化代谢的有害副产物，其可以在生命系统中引起分子损伤。它显示平均寿命为10-9秒，可以与几乎所有生物分子如核DNA，线粒体DNA，蛋白质和膜脂质发生反应。 AAT Bioquest的Cell Meter 线粒体羟基自由基检测试剂盒经过优化，可用于检测线粒体中的ROS。 MitoROS OH580是活细胞渗透探针，可以快速和选择性地靶向活细胞中的羟基自由基。当它与OH·反应时产生红色荧光，并且可以在Ex / Em = 540 / 590nm处容易地读取。 Cell Meter 线粒体羟基自由基检测试剂盒提供灵敏的荧光探针，可在孵育1小时后检测活细胞中的OH·。该试剂盒可用于荧光酶标仪和荧光显微镜应用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 线粒体羟基自由基检测试剂盒。 

活性氧（ROS）篇：包含总ROS和多种活性氧离子检测试剂大全

产品说明书

96孔板分析示例

概述

准备细胞用MitoROS OH580工作溶液

在37ºC孵育细胞60分钟

用测试化合物孵育细胞（诱导OH·）

在Ex / Em = 540/590 nm处检测荧光增加

注意：使用前在室温下解冻所有组件。

操作步骤

1.准备细胞：

1.1对于贴壁细胞：在生长培养基中将细胞过夜，10,000至40,000个细胞/孔/90μL用于96孔板或2,500至10,000个细胞/孔/20μL用于384孔板。

1.2对于非贴壁细胞：从培养基中离心细胞，将细胞沉淀悬浮于培养基中，100,000-200,000细胞/孔/90μL，96孔poly-D赖氨酸平板或25,000-50,000细胞/孔/ 对于384孔聚-D赖氨酸板，20μL。 在实验之前，在制动器关闭的情况下以800rpm离心板2分钟。

注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定最佳细胞密度。

2.准备MitoROS OH580方案：

2.1Prepare MitoROS OH580储备液（500X）：将50μLDMSO（组分C）加入MitoROS OH580（组分A）的小瓶中，并充分混合。

注意：25μL重组的MitoROS OH580原液足以容纳1个平板。 如果管子密封并且避光，可以将未使用的部分等分并在≤-20℃下储存超过一个月。避免反复冻融循环。

2.2准备MitoROS OH580工作溶液：将25μL500XDMSO重构的MitoROS OH580储备溶液（来自步骤2.1）加入10 mL分析缓冲液（组分B）中，并充分混合。 该工作溶液在室温下稳定至少2小时。

3.进行羟基自由基测定：

3.1取出培养基，加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的MitoROS OH580工作溶液（步骤2.2）到细胞板中。将细胞在37ºC孵育1小时。

3.2为了诱导羟基自由基，用37℃的所需缓冲液（如PBS或HHBS）中的文本化合物处理细胞一段所需的时间，避光。

注意1：我们用芬顿反应（10μMCuCl2和100μMH2O2）在37℃处理HeLa细胞1小时，以诱导外源性羟基自由基。详细信息请参见图1。

注意2：我们用生长培养基中的PMA（佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯）在37℃下处理RAW 264.7细胞4小时，以刺激内源性羟基自由基。详细信息请参见图2。

3.3用HHBS或DPBS将细胞洗涤2-3次，并向每个孔中加入100μL测定缓冲液（组分B）。

3.4使用具有TRITC滤光片组的荧光显微镜观察细胞中的荧光信号，或使用荧光酶标仪在Ex / Em = 540 / 590nm（截止= 570nm）下以底部读取模式测量荧光增加。

数据分析

图1.使用MitoROS OH580（Cat＃16055）在HeLa细胞中测量羟基自由基的荧光图像。 将HeLa细胞与MitoROS OH580工作溶液在37℃下孵育1小时，然后用HHBS洗涤一次。 芬顿反应：然后将细胞用10μMCuCl2和100μMH2O2在1X HBSS缓冲液中于37℃处理1小时。 对照：将HeLa细胞保持在1X HBSS缓冲液中而不进行处理。 用HHBS洗涤3次后，使用具有TRITC过滤器组（红色）的荧光显微镜测量HeLa细胞。 细胞核用Hoechst 33342（Cat＃17530，Blue）染色。

图2.使用MitoROS OH580（Cat＃16055）检测RAW 264.7细胞中的细胞内羟基自由基。 将细胞与MitoROS OH580工作溶液在37℃下孵育1小时，然后用HHBS洗涤一次。 然后将细胞在没有或与PMA（佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯，10-500ng / mL）在生长培养基中于37℃温育4小时。 用HHBS洗涤3次后，使用具有TRITC过滤器组的荧光显微镜测量HeLa细胞。

参考文献

Oxyl and hydroxyl radical transfer in mitochondrial amidoxime reducing component-catalyzed nitrite reduction
Authors: Yang J, Giles LJ, Ruppelt C, Mendel RR, Bittner F, Kirk ML.
Journal: J Am Chem Soc (2015): 5276

Arbutin, an intracellular hydroxyl radical scavenger, protects radiation-induced apoptosis in human lymphoma U937 cells
Authors: Wu LH, Li P, Zhao QL, Piao JL, Jiao YF, Kadowaki M, Kondo T.
Journal: Apoptosis (2014): 1654

Chloroplast-located BjFer1 together with anti-oxidative genes alleviate hydrogen peroxide and hydroxyl radical injury in cytoplasmic male-sterile Brassica juncea
Authors: Yang J, Liu S, Yang X, Zhang M.
Journal: Mol Biol Rep (2012): 4169

Hydroxyl radical (.OH) played a pivotal role in oridonin-induced apoptosis and autophagy in human epidermoid carcinoma A431 cells
Authors: Yu Y, Fan SM, Song JK, Tashiro S, Onodera S, Ikejima T.
Journal: Biol Pharm Bull (2012): 2148

Excess no predisposes mitochondrial succinate-cytochrome c reductase to produce hydroxyl radical
Authors: Chen J, Chen CL, Alevriadou BR, Zweier JL, Chen YR.
Journal: Biochim Biophys Acta (2011): 491

Postresuscitation syndrome: potential role of hydroxyl radical-induced endothelial cell damage
Authors: Huet O, Dupic L, Batteux F, Matar C, Conti M, Chereau C, Lemiale V, Harrois A, Mira JP, Vicaut E, Cariou A, Duranteau J.
Journal: Crit Care Med (2011): 1712

Endogenous 3,4-dihydroxyphenylalanine and dopaquinone modifications on protein tyrosine: links to mitochondrially derived oxidative stress via hydroxyl radical
Authors: Zhang X, Monroe ME, Chen B, Chin MH, Heibeck TH, Schepmoes AA, Yang F, Petritis BO, Camp DG, 2nd, Pounds JG, Jacobs JM, Smith DJ, Bigelow DJ, Smith RD, Qian WJ.
Journal: Mol Cell Proteomics (2010): 1199

Hyperglycemia induces apoptosis in rat liver through the increase of hydroxyl radical: new insights into the insulin effect
Authors: Frances DE, Ronco MT, Monti JA, Ingaramo PI, Pisani GB, Parody JP, Pellegrino JM, Sanz PM, Carrillo MC, Carnovale CE.
Journal: J Endocrinol (2010): 187

Acarbose reduces myocardial infarct size by preventing postprandial hyperglycemia and hydroxyl radical production and opening mitochondrial KATP channels in rabbits
Authors: Minatoguchi S, Zhang Z, Bao N, Kobayashi H, Yasuda S, Iwasa M, Sumi S, Kawamura I, Yamada Y, Nishigaki K, Takemura G, Fujiwara T, Fujiwara H.
Journal: J Cardiovasc Pharmacol (2009): 25

Endogenous activation of mitochondrial KATP channels protects human failing myocardium from hydroxyl radical-induced stunning
Authors: Maack C, Dabew ER, Hohl M, Schafers HJ, Bohm M.
Journal: Circ Res (2009): 811

活性氧 Cell Meter 荧光法线粒体过氧化物检测试剂盒 适合于流式细胞仪

	货号	22970	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 Tests	价格	3924
	Ex (nm)	540	Em (nm)	590
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

线粒体是细胞超氧化物的主要生产者。低中等水平的超氧化物的产生对于许多重要细胞过程的适当调节至关重要，这些过程包括基因表达，信号转导和肌肉对耐力运动训练的适应性。不受控制的线粒体超氧化物的产生会触发细胞氧化损伤，从而导致多种疾病的发病机理，包括癌症，心血管疾病，神经退行性疾病和衰老。Cell Meter 荧光法线粒体过氧化物检测试剂盒使用我们独特的超氧化物指示剂来定量活细胞中的超氧化物水平。MitoROS 580具有活细胞渗透性，可以快速，选择性地靶向线粒体中的超氧化物。与超氧化物反应时会生成红色荧光。Cell Meter 荧光法线粒体过氧化物检测试剂盒提供了一种灵敏的一步荧光测定法，可在培养一小时后检测活细胞中的线粒体超氧化物。该试剂盒针对流式细胞仪应用进行了优化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 荧光法线粒体过氧化物检测试剂盒。

活性氧（ROS）篇：包含总ROS和多种活性氧离子检测试剂大全

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 准备细胞密度为0.5-1×10 ⁶细胞/ mL
2. 用测试化合物处理细胞以诱导超氧化物
3. 将1 µL 500X MitoROS 580加到0.5 mL细胞悬液中
4. 将细胞在37°C染色1小时
5. 使用带有FL2通道的流式细胞仪检测荧光强度

 

溶液配制

储备溶液配制

1. MitoROS 580储备溶液（500X）：将100 µL DMSO（组分C）添加到MitoROS 580（组分A）小瓶中，并充分混合以制成500X MitoROS 580储备溶液。避光。注意：请密闭存放。

 

实验步骤

1. 对于每个样品，在自备的0.5 mL生长培养基或缓冲液中制备细胞，密度为5×10 ⁵至1×10 ⁶个细胞/ mL。注意：应单独评估每种细胞系，以确定超氧化物诱导的最佳细胞密度。
2. 在分析缓冲液（组分B）或自备的缓冲液（例如PBS）中用25 µL 20X测试化合物处理细胞以诱导超氧化物。对于对照细胞（未处理的细胞），添加相应量的化合物缓冲液。
3. 将细胞在37°C孵育至少30分钟。注意：将 Jurkat细胞在37°C下用50 µM抗霉素A（AMA）处理30分钟以诱导超氧化物。有关详细信息，请参见图1。
4. 将0.5 µL细胞悬浮液中加入1 µL 500X MitoROS 580储备液。
5. 在37°C下孵育1小时。注意：对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在MitoROS 580孵育之前用含血清的培养基洗涤一次。适当的孵育时间取决于单个细胞的类型和测试使用的化合物。
6. 使用带有FL2通道的流式细胞仪（Ex / Em = 488/590 nm）检测荧光强度。

 图示

 

 

图1.使用Cell Meter 荧光细胞内超氧化物检测试剂盒检测Jurkat细胞中的超氧化物。AMA处理（红色）：将细胞在37°C下用50 µM抗霉素A（AMA）处理30分钟，然后与MitoROS 580孵育1小时。对照（蓝色）：在未经AMA处理的情况下，将细胞与MitoROS 580在37°C孵育1小时。使用流式细胞仪（BD FACSCalibur）在FL2通道检测上荧光信号。

 

 

参考文献

Concentration-dependent effect of sodium hypochlorite on stem cells of apical papilla survival and differentiation
Authors: Martin DE, De Almeida JF, Henry MA, Khaing ZZ, Schmidt CE, Teixeira FB, Diogenes A.
Journal: J Endod (2014): 51

Effect of hypochlorite oxidation on cholinesterase-inhibition assay of acetonitrile extracts from fruits and vegetables for monitoring traces of organophosphate pesticides
Authors: Kitamura K, Maruyama K, Hamano S, Kishi T, Kawakami T, Takahashi Y, Onodera S.
Journal: J Toxicol Sci (2014): 71

A simple yet effective chromogenic reagent for the rapid estimation of bromate and hypochlorite in drinking water
Authors: Zhang J, Yang X.
Journal: Analyst (2013): 434

Analysis of the germination kinetics of individual Bacillus subtilis spores treated with hydrogen peroxide or sodium hypochlorite
Authors: Setlow B, Yu J, Li YQ, Setlow P.
Journal: Lett Appl Microbiol (2013): 259

Comparative antimicrobial activities of aerosolized sodium hypochlorite, chlorine dioxide, and electrochemically activated solutions evaluated using a novel standardized assay
Authors: Thorn RM, Robinson GM, Reynolds DM.
Journal: Antimicrob Agents Chemother (2013): 2216

Effect of hypochlorite-based disinfectants on inactivation of murine norovirus and attempt to eliminate or prevent infection in mice by addition to drinking water
Authors: Takimoto K, Taharaguchi M, Sakai K, Takagi H, Tohya Y, Yamada YK.
Journal: Exp Anim (2013): 237

Green synthesis of carbon dots with down- and up-conversion fluorescent properties for sensitive detection of hypochlorite with a dual-readout assay
Authors: Yin B, Deng J, Peng X, Long Q, Zhao J, Lu Q, Chen Q, Li H, Tang H, Zhang Y, Yao S.
Journal: Analyst (2013): 6551

Use of pyrogallol red and pyranine as probes to evaluate antioxidant capacities towards hypochlorite
Authors: Perez-Cruz F, Cortes C, Atala E, Bohle P, Valenzuela F, Olea-Azar C, Speisky H, Aspee A, Lissi E, Lopez-Alarcon C, Bridi R.
Journal: Molecules (2013): 1638

A novel flow-injection analysis system for evaluation of antioxidants by using sodium dichloroisocyanurate as a source of hypochlorite anion
Authors: Ichiba H, Hanami K, Yagasaki K, Tanaka M, Ito H, Fukushima T.
Journal: Drug Discov Ther (2012): 44

Colorimetric determination of hypochlorite with unmodified gold nanoparticles through the oxidation of a stabilizer thiol compound
Authors: Zhang J, Wang X, Yang X.
Journal: Analyst (2012): 2806

MitoLite 线粒体近红外荧光探针

	货号	22690	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	500 Tests	价格	1272
	Ex (nm)	658	Em (nm)	691
	分子量	N/A	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

MitoLite 线粒体近红外荧光探针是美国AAT Bioquest生产的用于染色线粒体的荧光探针，线粒体是在大多数真核细胞中发现的膜封闭细胞器。线粒体产生大多数细胞中的ATP供应。线粒体除了提供细胞能量外，还参与一系列其他过程，例如信号传导，细胞分化，细胞死亡以及细胞周期和细胞生长的控制。线粒体与多种人类疾病有关，包括线粒体疾病和心脏功能障碍，并可能在衰老过程中起作用。Mitolite NIR FX690设计用于通过近红外荧光标记活细胞中的线粒体。它可能通过线粒体膜电位梯度选择性地积累在线粒体中。对于低背景和高信噪比至关重要的活细胞和组织成像，它是理想的选择。这种荧光的线粒体指示剂带有细胞保留基团，因此可以在线粒体中保留很长时间。此关键功能大大提高了染色效率。它可用于多种研究，包括细胞粘附，趋化性，多药耐药性，细胞生存力，细胞凋亡和细胞毒性。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的MitoLite 线粒体近红外荧光探针。

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产品说明书

样品实验方案

1.准备线粒体染色溶液：

1.1将MitoLite 染料加热至室温。

1.2通过将20 µL的500 X Mitolite 染料稀释到10 mL的Hanks和20 mm Hepes缓冲液或您选择的缓冲液（HBSS）中来制备染料工作液。

注1：20 µL Mitolite 染料足以用于一块96孔板。 分装并在<-15℃下存储未使用的MitoLite 染料原液。 避免光照，并避免重复的冻融循环。

注2：荧光线粒体指示剂的最佳浓度因具体应用而异。 可以根据特定的细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性来改变染色条件。

2.准备和染色细胞：

2.1对于贴壁细胞：a）在96孔黑色壁/透明底板（100 µL /孔/ 96孔板）中或在装有适当培养基的培养皿内的盖玻片上生长细胞。 当细胞达到所需的汇合度时，添加等体积的染料工作溶液（来自步骤1.2）。 b）将细胞在37°C，5％CO2培养箱中孵育30分钟至2小时。 C）更换染料加载溶液，或用预热的（37°C）汉克斯和20 mM Hepes缓冲液（HBSS）或您选择的缓冲液（例如，含有1：1浓度的生长培养基的缓冲液）洗涤细胞（尤其对于cat＃22679） ）。用HBSS或生长培养基填充细胞孔。 d）。使用装有所需滤光片组的荧光显微镜观察细胞。

注意：建议增加标记浓度或孵育时间，以使染料在细胞未充分染色的情况下积累。

2.2对于悬浮细胞：以1000 rpm离心细胞5分钟，以获得细胞沉淀并吸出上清液。在预热的（37°C）生长培养基中轻轻重悬细胞沉淀，并加入等体积的染料工作溶液（来自步骤1.2）。将细胞在37°C，5％CO2培养箱中孵育30分钟至2小时。更换染料加载溶液或用Hanks和20 mM Hepes缓冲液（HH缓冲液）或您选择的缓冲液（例如具有1：1浓度的生长培养基的缓冲液）洗涤细胞（特别是对于cat＃22679）。用HBSS或生长培养基填充细胞孔。使用装有所需滤光片组的荧光显微镜观察细胞。

注1：建议增加标记浓度或孵育时间，以使染料在细胞似乎未充分染色的情况下积累。

注2：悬浮细胞可以附着在已经用BDCell-Tak®（BD Biosciences）处理过并被染色为贴壁细胞的盖玻片上（参见步骤2.1）。

参考文献

Co-delivery of VP-16 and Bcl-2-targeted antisense on PEG-grafted oMWCNTs for synergistic in vitro anti-cancer effects in non-small and small cell lung cancer
Authors: Zbynek Heger, Hana Polanska, Sona Krizkova, Jan Balvan, Martina Raudenska, Simona Dostalova, Amitava Moulick, Michal Masarik, Vojtech Adam
Journal: Colloids and Surfaces B: Biointerfaces (2017): 131–140

Inhibition of heme oxygenase-1 enhances the chemosensitivity of laryngeal squamous cell cancer Hep-2 cells to cisplatin
Authors: Xin Lv, Dong-mei Song, Ying-hao Niu, Bao-shan Wang
Journal: Apoptosis (2016): 489–501

Effective two-photon excited photodynamic therapy of xenograft tumors sensitized by water-soluble bis (arylidene) cycloalkanone photosensitizers
Authors: Qianli Zou, Hongyou Zhao, Yuxia Zhao, Yanyan Fang, Defu Chen, Jie Ren, Xiaopu Wang, Ying Wang, Ying Gu, Feipeng Wu
Journal: Journal of medicinal chemistry (2015): 7949–7958

Melatonin promotes adipogenesis and mitochondrial biogenesis in 3T3-L1 preadipocytes
Authors: Hisashi Kato, Goki Tanaka, Shinya Masuda, Junetsu Ogasawara, Takuya Sakurai, Takako Kizaki, Hideki Ohno, Tetsuya Izawa
Journal: Journal of Pineal Research (2015): 267–275

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