Amplite 比色法过氧化酶检测试剂盒 蓝色

	货号	11551	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	500 Tests	价格	2604
	Ex (nm)	664	Em (nm)
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Amplite 比色法过氧化酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于过氧化物酶的试剂盒，过氧化酶是常用于与抗体按4:1比例结合的小分子(MW ~40 KD)。由于分子量小，因此在与抗体、抗原结合形成复合物时不会带来空间阻碍。与其它酶标签相比，过氧化酶也更便宜；其主要缺点是在保护剂（例如叠氮化钠）存在的条件下溶解性低；而在低浓度下，过氧化酶的活性低。HRP偶联物是广泛用作ELISA（酶联免疫吸附实验）、免疫组化技术、Northern、 Southern和Western blot分析的第二个检测试剂。Amplite比色法过氧化酶检测试剂盒 *蓝色* 提供了一种快速(10分钟)HRP一步法均质的、无需洗脱的分析方案。本试剂盒使用Amplite Blue，我们的超灵敏HRP显色底物，即Amplite Blue作为过氧化酶的显色底物，它比双氧水和过氧化酶及其它的过氧化酶的显色底物（例如TMB, ABTS, OPD 和K-Blue）具有更高的灵敏度。Amplite Blue产生高吸收物质，在664nm处有最大吸收峰。这种近红外吸收使自动化检测生物样品时本底吸收很小。本试剂盒可以用于ELISA，酶促反应动力学分析，氧化酶抑制剂高通量筛选等。试剂盒经过最优化处理，并且可用于高通量液体处理设备。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 比色法过氧化酶检测试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备HRP工作溶液（50μL）
2.添加HRP标准品和/或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育10-30分钟
4.监测664±5 nm的吸光度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 Amplite 蓝色过氧化物酶底物储备液（100X）：
将250μLDMSO（组分E）加入到Amplite 蓝色底物（组分A）的小瓶中以制备100X Amplite 蓝色过氧化物酶底物储备溶液。

1.2 HRP标准溶液（20 U / mL）：
将1mL测定缓冲液（组分C）加入到HRP小瓶（组分D）中以制备20U / mL HRP储备溶液。

1.3 H₂O₂溶液（20 mM）：
将22.7μL的3％H₂O₂（0.88M，组分B）加入977μL的测定缓冲液（组分C）中以制备20mM H₂O₂溶液。 注意：稀释的H₂O₂溶液不稳定。 应丢弃未使用的部分。

2.标准溶液

HRP标准
将15μL的20U / mL HRP溶液加入985μL的测定缓冲液（组分C）中，得到300mU / mL的HRP标准溶液（SD7）。 取300 mU / mL HRP标准溶液（SD7），进行1：3连续稀释，得到连续稀释的HRP标准品（SD6 – SD1）和分析缓冲液（组分C）。

3.工作溶液

将50μL的Amplite Blue Peroxidase Substrate储备液（100X）和50μL的H₂O₂储备溶液（20 mM）加入到4.9 mL的分析缓冲液（组分C）中，使总体积为5 mL的HRP工作溶液，避光。

样品分析

表1.白壁/透明底96孔微孔板中HRP标准品和测试样品的布局。 SD = HRP标准品（SD1-SD7,0.3至300 mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备HRP标准品（SD），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向HRP标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLHRP工作溶液，使总HRP测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLHRP工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应30至60分钟，避光。

4.用吸光度读板仪在664±5nm下监测吸光度。

参考文献

Enzymatic oxidation of dipyridamole in homogeneous and micellar solutions in the horseradish peroxidase-hydrogen peroxide system
Authors: Almeida LE, Imasato H, Tabak M.
Journal: Biochim Biophys Acta (2006): 216

Horseradish peroxidase-driven fluorescent labeling of nanotubes with quantum dots
Authors: Didenko VV, Baskin DS.
Journal: Biotechniques (2006): 295

Recent advances in catalytic peroxidase histochemistry
Authors: Krieg R, Halbhuber KJ.
Journal: Cell Mol Biol (Noisy-le-grand) (2003): 547

Vesicular transport route of horseradish C1a peroxidase is regulated by N- and C-terminal propeptides in tobacco cells
Authors: Matsui T, Nakayama H, Yoshida K, Shinmyo A.
Journal: Appl Microbiol Biotechnol (2003): 517

Development of a novel enzyme/prodrug combination for gene therapy of cancer: horseradish peroxidase/indole-3-acetic acid
Authors: Greco O, Folkes LK, Wardman P, Tozer GM, Dachs GU.
Journal: Cancer Gene Ther (2000): 1414

Preparation, morphological characterization, and activity of thin films of horseradish peroxidase
Authors: Vianello F, Zennaro L, Di Paolo ML, Rigo A, Malacarne C, Scarpa M.
Journal: Biotechnol Bioeng (2000): 488

Synthesis and purification of horseradish peroxidase-labeled oligonucleotides for tyramide-based fluorescence in situ hybridization
Authors: van Gijlswijk RP, van de Corput MP, Bezrookove V, Wiegant J, Tanke HJ, Raap AK.
Journal: Histochem Cell Biol (2000): 175

Evidence for free radical formation during the oxidation of 2′-7′-dichlorofluorescin to the fluorescent dye 2′-7′-dichlorofluorescein by horseradish peroxidase: possible implications for oxidative stress measurements
Authors: Rota C, Chignell CF, Mason RP.
Journal: Free Radic Biol Med (1999): 873

In situ identification of cyanobacteria with horseradish peroxidase-labeled, rRNA-targeted oligonucleotide probes
Authors: Schonhuber W, Zarda B, Eix S, Rippka R, Herdman M, Ludwig W, Amann R.
Journal: Appl Environ Microbiol (1999): 1259

Relative number of cells projecting from contralateral and ipsilateral nucleus isthmi to loci in the optic tectum is dependent on visuotopic location: horseradish peroxidase study in the leopard frog
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	产品详细介绍

简要概述

Amplite 过氧化物和过氧化酶近红外荧光底物是美国AAT Bioquest生产的用于检测过氧化氢的荧光探针，我们的Amplite IR是一种荧光性过氧化酶底物，与过氧化酶和H₂O₂反应时，产生近红外荧光。它可以用来检测H₂O₂和过氧化酶。Amplite IR产生的物质在647nm处具有最大吸收峰，同时在647nm处有最大发射峰。这种近红外吸收和荧光将检测的本底降至最小，这些本底经常由自我吸收和/或生物样品自身的荧光，但是在600nm附近自身光吸收基本没有。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 过氧化物和过氧化酶近红外荧光底物。 

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产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.制备100μMAmplite IR 0.8 U / ml的过氧化物酶在磷酸盐缓冲液，并在孔中加入50微升

2.添加H ₂ O ₂标准品或测试样品（50μL）

3.在室温下孵育0-30分钟

4.监测Ex / Em = 640 / 680nm处的荧光强度

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1Amplite IR原液：
加入适量无水DMSO，制成10至25 mM Amplite IR原液。

2.工作溶液

Amplite IR工作溶液（2X）：
为了在50 mM磷酸盐缓冲液或您选择的缓冲液中达到每孔50至100μM的最终浓度，在管中制备100至200μM浓度的溶液。每孔需要50μL。 注意：在硫醇如DTT和b-巯基乙醇存在下，Amplite IR不稳定。高于10μM（最终浓度）的硫醇可显着降低测定动态范围。NADH和谷胱甘肽（从GSH中还原）可能会干扰测定。注意：我们建议您每次进行实验时都使用新鲜原液。

操作步骤

1.在上清液中进行H₂O₂测定

1.1将50μL的2X Amplite IR工作溶液（来自步骤1.2）添加到H ₂ O ₂标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，以使总H₂O₂测定体积为100μL/孔。注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL2XAmplite IR工作溶液。

1.2在室温下孵育反应0至30分钟，避光。

1.3使用荧光板读数器监测Ex / Em = 640 / 680nm处的荧光增加。 注意：Amplite IR过氧化物酶底物易于自氧化，因此一旦加入H₂O₂反应混合物就读取荧光，以提高信噪比。

1.4空白孔中的荧光（仅使用测定缓冲液）用作对照，并从具有H₂O_2的那些孔的值中减去。

2.运行H₂O₂测定法的细胞：

2.1Amplite IR可用于测量细胞中H₂O₂的释放。以下是建议的方案，可根据您的具体研究需要进行修改.Dipite IR工作溶液应按步骤1.2制备，但磷酸盐缓冲液应替换为细胞培养系统中使用的培养基。建议的培养基包括（a）Krebs Ringers磷酸盐缓冲液（KRPB）; （b）中。汉克斯平衡盐溶液（HBSS）; 或（c）无血清培养基。

2.2在96孔板（50-100μL/孔）中制备细胞，并根据需要激活细胞。 注意：包括阴性对照（单独培养基和非活化细胞）用于测量背景荧光。

2.3加入50微升H₂O₂反应混合物至细胞的每个孔中，注意：对于384孔板中，添加25μL细胞和25微升H₂O₂反应混合物倒入每个孔。

2.4在室温下孵育反应0至30分钟，避光。

2.5使用荧光板读数器监测Ex / Em = 640 / 680nm处的荧光增加。 注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在670nm波长下读数。与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。 注意：荧光背景随时间增加，因此减去每个数据点的空白孔的荧光强度值是很重要的。

参考文献

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Journal: (2017)

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Amplite 过氧化物和过氧化酶蓝色荧光底物

	货号	11005	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	25 mg	价格	1944
	Ex (nm)	324	Em (nm)	409
	分子量	~300	溶剂	DMSO
	产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号：11005

产品名称：Amplite 过氧化物和过氧化酶蓝色荧光底物

规格：25mg

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

分子量：~300

溶剂：DMSO

激发波长（nm）：324

发射波长（nm）：409

产品介绍

Amplite 过氧化物和过氧化酶蓝色荧光底物,金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 过氧化物和过氧化酶蓝色荧光底物。

参考文献

Assessment of Tofacitinib and Ruxolitinib and their Anti Inflammatory Effects on Myeloperoxidase
Authors: Amber Milton
Journal: (2017)

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Authors: Junjie Chi, Bingbing Gao, Mi Sun, Fengling Zhang, Enben Su, Hong Liu, Zhongze Gu
Journal: Analytical Chemistry (2017)

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