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Buccutite PE-Cy7抗体标记试剂盒 标记100ug抗体 货号1317-AAT Bioquest荧光染料

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Buccutite PE-Cy7抗体标记试剂盒 标记100ug抗体

Buccutite PE-Cy7抗体标记试剂盒 标记100ug抗体

Buccutite PE-Cy7抗体标记试剂盒 标记100ug抗体 货号1317 货号 1317 存储条件 在2-8度冷藏保存, 避免光照
规格 2 Labelings 价格 6564
Ex (nm) 566 Em (nm) 778
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

Buccutite PE-Cy7 抗体标记试剂盒提供了一种以微观方式标记抗体的最便捷方法。PE-Cy7是流式细胞术中常用的颜色。其主要吸收峰位于565nm，发射峰位于~780nm。 AAT Bioquest提供这种Buccutite 快速标记试剂盒，以促进PE-Cy7串联结合抗体和其他蛋白质，如链霉抗生物素蛋白和其他二级试剂。 Buccutite PE-Cy7共轭试剂盒为您的抗体与PE结合提供了一种强大而方便的方法。该试剂盒包括活化的PE和反应缓冲液。缀合的抗体可用于WB，ELISA和IHC应用。该试剂盒足以进行2次标记反应，每次反应最多100μg抗体。考虑到PE的大尺寸（240kDa），标记反应中使用的抗体量必须始终小于RPE的量。任何新抗体试剂的最佳比例必须通过实验确定，但每100ug RPE 50-60ug IgG抗体通常可获得最佳结果。我们的试剂盒提供预活化的PE-Cy7，以促进PE-Cy7串联结合抗体和其他蛋白质，如链霉抗生物素蛋白和其他二级试剂。我们的预活化PE-Cy7串联已准备好结合，产生比常规繁琐的基于SMCC的缀合化学高得多的产率。此外，我们的预活化PE-Cy7串联通过其蛋白质中丰富的氨基与蛋白质缀合，而SMCC化学靶向必须通过抗体还原而再生的硫醇基团。Buccutite PE-Cy7抗体标记试剂盒是美国AAT Bioquest研发的产品。

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产品说明书

实验方案

操作步骤

1.运行Antibody-Buccutite MTA反应

1.1将抗体溶液直接加入到Buccutite MTA（组分B）的小瓶中，并通过反复移液几次将其充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。

1.2将抗体-Buccutite MTA反应混合物在室温下保持30-60分钟。 注意：如果需要，抗体-Buccutite MTA反应混合物可以旋转或摇动更长时间。

 

2.制备抗体-PE-Cy7缀合物

2.1通过向Buccutite FOL活化的PE-Cy7（组分A）的小瓶中加入50μLddH2O制备Buccutite FOL活化的PE溶液，通过反复移液几次充分混合或将小瓶涡旋几秒钟。

2.2将整瓶Buccutite FOL活化的PE-Cy7溶液混合到纯化的抗体-Buccutite MTA溶液（来自步骤纯化抗体-Buccutite MTA溶液）中，充分混合并在室温下旋转混合物1小时。

2.3抗体-PE-Cy7结合物现在可以使用了。 注意：立即使用时，抗体-PE-Cy7结合物需要用您选择的缓冲液稀释。 注意：对于长期储存，需要浓缩或冷冻干燥抗体-PE结合物溶液。

 

3.抗体-PE-Cy7共轭物的储存

抗体缀合物应在载体抗体（例如0.1％牛血清白蛋白）存在下以> 0.5mg / mL储存。 当在2mM叠氮化钠存在下储存并避光时，抗体-PE-Cy7缀合物溶液可以在4℃下储存两个月而没有显着变化。 对于更长时间的储存，可以将抗体-PE-Cy7缀合物冻干并在≤-20℃下储存。

 

参考文献

Chromophore attachment to phycobiliprotein beta-subunits: phycocyanobilin:cysteine-beta84 phycobiliprotein lyase activity of CpeS-like protein from Anabaena Sp. PCC7120
Authors: Zhao KH, Su P, Li J, Tu JM, Zhou M, Bubenzer C, Scheer H.
Journal: J Biol Chem (2006): 8573

Excitation energy transfer from phycobiliprotein to chlorophyll d in intact cells of Acaryochloris marina studied by time- and wavelength-resolved fluorescence spectroscopy
Authors: Petrasek Z, Schmitt FJ, Theiss C, Huyer J, Chen M, Larkum A, Eichler HJ, Kemnitz K, Eckert HJ.
Journal: Photochem Photobiol Sci (2005): 1016

Single-molecule spectroscopy selectively probes donor and acceptor chromophores in the phycobiliprotein allophycocyanin
Authors: Loos D, Cotlet M, De Schryver F, Habuchi S, Hofkens J.
Journal: Biophys J (2004): 2598

Evaluation of Tolypothrix germplasm for phycobiliprotein content
Authors: Prasanna R, Prasanna BM, Mohammadi SA, Singh PK.
Journal: Folia Microbiol (Praha) (2003): 59

Isolation and characterisation of phycobiliprotein rich mutant of cyanobacterium Synechocystis sp
Authors: Prasanna R, Dhar DW, Dominic TK, Tiwari ON, Singh PK.
Journal: Acta Biol Hung (2003): 113

Co-ordinated expression of phycobiliprotein operons in the chromatically adapting cyanobacterium Calothrix PCC 7601: a role for RcaD and RcaG
Authors: Noubir S, Luque I, Ochoa de Alda JA, Perewoska I, Tandeau de Marsac N, Cobley JG, Houmard J.
Journal: Mol Microbiol (2002): 749

Phycobiliprotein genes of the marine photosynthetic prokaryote Prochlorococcus: evidence for rapid evolution of genetic heterogeneity
Authors: Ting CS, Rocap G, King J, Chisholm SW.
Journal: Microbiology (2001): 3171

Novel activity of a phycobiliprotein lyase: both the attachment of phycocyanobilin and the isomerization to phycoviolobilin are catalyzed by the proteins PecE and PecF encoded by the phycoerythrocyanin operon
Authors: Zhao KH, Deng MG, Zheng M, Zhou M, Parbel A, Storf M, Meyer M, Strohmann B, Scheer H.
Journal: FEBS Lett (2000): 9

Phycobiliprotein-Fab conjugates as probes for single particle fluorescence imaging
Authors: Triantafilou K, Triantafilou M, Wilson KM.
Journal: Cytometry (2000): 226

[Phycobiliprotein and fluorescence immunological assay]
Authors: Wu P.
Journal: Sheng Li Ke Xue Jin Zhan (2000): 82

 

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ReadiLink™xtra Rapid AF647抗体标记试剂盒（标记50ug抗体） 货号1985-AAT Bioquest荧光染料

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ReadiLink™xtra Rapid AF647抗体标记试剂盒（标记50ug抗体）

ReadiLink™xtra Rapid AF647抗体标记试剂盒（标记50ug抗体）

货号 1985 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 2 Labelings 价格 2472
Ex (nm) 650 Em (nm) 671
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

ReadiLink™xtra快速抗体标记试剂是AAT 研发，由金畔代理销售的AF647标记的抗体标记试剂盒。ReadiLink™xtra快速抗体标记试剂盒基本上只需要2个简单的混合步骤，而无需纯化。ReadiLink™试剂盒中使用的预活化AF647非常稳定，对抗体表现出良好的反应性和选择性。该试剂盒具有用于标记〜2×50 ug抗体的所有基本成分。试剂盒中提供的两个预活化AF647染料小瓶中的每一个均经过优化，可标记约50 µg抗体。ReadiLink™xtra AF647快速抗体标记试剂盒提供了一种方便而强大的方法，可以使用红色的AF647荧光团标记单克隆和多克隆抗体。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的抗体标记试剂盒。 

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产品说明书

实验方案

工作溶液配制

蛋白质工作溶液（A）

为了标记50 µg蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1 mg / mL），请将5 µL（反应总体积的10％）反应缓冲液（组分B）与50 µL目标蛋白质溶液混合。
注意：如果蛋白质浓度不同，请相应地调整蛋白质体积，以使〜50 µg蛋白质可用于标记反应。
注意：要标记100 µg蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1 mg / mL），请将10 µL（反应总体积的10％）反应缓冲液（组分B）与100 µL目标蛋白质溶液混合。
注意：蛋白质应溶于1X磷酸盐缓冲盐水（PBS），pH 7.2-7.4；如果蛋白质溶解在甘氨酸缓冲液中，则必须针对1X PBS（pH 7.2-7.4）进行透析，或使用10 kDa的Amicon Ultra-0.5，Ultracel-10膜去除游离的胺或铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）被广泛用于蛋白质沉淀。
注意：为获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为1-2 mg / mL，结合效率明显降低，低于1 mg / mL。 

 

操作步骤

运行缀合反应
  1. 将蛋白质工作溶液（溶液A）添加到一个小瓶的标记染料（组分A）中，并通过将小瓶涡旋几秒钟将它们充分混合。
    注意：如果要标记100 µg的蛋白质，请使用两个小瓶（组分A），将100 µg的蛋白质分成2 x 50 µg的蛋白质，并使每个50 µg的蛋白质与一小瓶的标记染料反应。然后合并两个小瓶，用于下一步。
  2. 将缀合反应混合物在室温下放置30-60分钟。
    注意：如果需要，可以旋转或摇动缀合反应混合物更长的时间。 

 

停止缀合反应
  1. 将5 µL（对于50 µg蛋白质）或10 µL（对于100 µg蛋白质）添加到缀合反应混合物中，占TQ™染色猝灭缓冲液（组分C）总反应体积的10％；混合均匀。
  2. 在室温下孵育10分钟。标记的蛋白（抗体）可以使用了。 

 

蛋白质缀合物的储存

蛋白质缀合物应在载体蛋白（例如0.1％牛血清白蛋白）存在下以> 0.5 mg / mL的浓度存储。为了更长的存储时间，可以将蛋白质缀合物冻干或分成单份使用，并存储在≤–20°C下。

 

图示

ReadiLink™xtra Rapid AF647抗体标记试剂盒（标记50ug抗体） 货号1985

图1. HeLa细胞中微管蛋白的免疫荧光染色。HeLa细胞用4％PFA固定，用0.1％Triton X-100透化并封闭。然后将细胞与小鼠抗微管蛋白抗体一起孵育，并用ReadiLink™xtra Rapid AF647抗体标记试剂盒（#1985）标记的山羊抗小鼠IgG染色。

  

参考文献

Identification of a Small Probe That Can Be Conjugated to Proteins by Proximity Labeling.
Authors: Sun, Weiping and Huo, Yinbo and Mei, Yuxuan and Zhou, Qingtong and Zhao, Suwen and Zhuang, Min
Journal: ACS chemical biology (2020): 39-43

Paper-based nuclease protection assay with on-chip sample pretreatment for point-of-need nucleic acid detection.
Authors: Noviana, Eka and Jain, Sidhartha and Hofstetter, Josephine and Geiss, Brian J and Dandy, David S and Henry, Charles S
Journal: Analytical and bioanalytical chemistry (2020): 3051-3061

A neuraminidase potency assay for quantitative assessment of neuraminidase in influenza vaccines.
Authors: Byrne-Nash, Rose T and Gillis, Jacob H and Miller, David F and Bueter, Katie M and Kuck, Laura R and Rowlen, Kathy L
Journal: NPJ vaccines (2019): 3

Author Correction: A dynamic three-step mechanism drives the HIV-1 pre-fusion reaction.
Authors: Iliopoulou, Maro and Nolan, Rory and Alvarez, Luis and Watanabe, Yasunori and Coomer, Charles A and Jakobsdottir, G Maria and Bowden, Thomas A and Padilla-Parra, Sergi
Journal: Nature structural & molecular biology (2019): 526

Site-Specific Fluorescent Labeling of Antibodies and Diabodies Using SpyTag/SpyCatcher System for In Vivo Optical Imaging.
Authors: Alam, Md Kausar and El-Sayed, Ayman and Barreto, Kris and Bernhard, Wendy and Fonge, Humphrey and Geyer, C Ronald
Journal: Molecular imaging and biology (2019): 54-66

Highly efficient electrochemical sensing platform for sensitive detection DNA methylation, and methyltransferase activity based on Ag NPs decorated carbon nanocubes.
Authors: Gao, Fenglei and Fan, Taotao and Ou, Shanshan and Wu, Jing and Zhang, Xing and Luo, Jianjun and Li, Na and Yao, Yao and Mou, Yingfeng and Liao, Xianjiu and Geng, Deqin
Journal: Biosensors & bioelectronics (2018): 201-208

Improved performance of lateral flow immunoassays for alpha-fetoprotein and vanillin by using silica shell-stabilized gold nanoparticles.
Authors: Lu, Xuewen and Mei, Ting and Guo, Qi and Zhou, Wenjing and Li, Xiaomei and Chen, Jitao and Zhou, Xinke and Sun, Ning and Fang, Zhiyuan
Journal: Mikrochimica acta (2018): 2

Intracellular in situ labeling of TiO2 nanoparticles for fluorescence microscopy detection.
Authors: Brown, Koshonna and Thurn, Ted and Xin, Lun and Liu, William and Bazak, Remon and Chen, Si and Lai, Barry and Vogt, Stefan and Jacobsen, Chris and Paunesku, Tatjana and Woloschak, Gayle E
Journal: Nano research (2018): 464-476

Multiplex Immunoassay Profiling of Serum in Psychiatric Disorders.
Authors: Stephen, Laurie and Schwarz, Emanuel and Guest, Paul C
Journal: Advances in experimental medicine and biology (2017): 149-156

Multiplex Immunoassay Profiling.
Authors: Stephen, Laurie
Journal: Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) (2017): 169-176

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ReadiLink Cy3 缺口平移 dsDNA 标记试剂盒 货号17406-AAT Bioquest荧光染料

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ReadiLink Cy3 缺口平移 dsDNA 标记试剂盒

ReadiLink Cy3 缺口平移 dsDNA 标记试剂盒

ReadiLink Cy3 缺口平移 dsDNA 标记试剂盒 货号17406 货号 17406 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 10 Reactions 价格 2388
Ex (nm) 555 Em (nm) 569
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

ReadiLink Cy3 缺口平移 dsDNA 标记试剂盒提供了一种简单有效的方法，可以使用明亮且光稳定的 Cy3染料标记双链 DNA 样本。标记试剂盒为 DNA 标记所需的完整工作流程提供了所有必要的试剂。该方法使用 DNAse 和 DNA 聚合酶的组合来切割 DNA 螺旋的一条链，Cy3染料与之结合。此外，该试剂盒允许用户通过调整 Cy3-dUTP 偶联物与 dTTP 的比例来优化掺入和产品大小。它与多种样品材料兼容，包括细菌人工染色体 (BAC) DNA、人类基因组 DNA、纯化的 PCR 产物、超螺旋和线性化质粒 DNA。得到的 Cy3标记 DNA 可用于多种分子生物学技术，例如荧光原位杂交 (FISH)。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的ReadiLink Cy3缺口平移 dsDNA 标记试剂盒。

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适用仪器

热循环仪  
仪器规格： N/A

产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 准备 DNA 样本
  2. 向试管中加入试剂
  3. 短暂混合并离心
  4. 在 15°C 下孵育 60 分钟
  5. 将反应置于冰上，然后加入停止溶液并在 65°C 下加热
  6. 使用前在冰上放置 5 分钟或在 4°C 下储存
  7. 纯化标记的 DNA

 注：在开始实验之前，解冻所有成分。在开始标记过程之前，将所有试剂短暂涡旋至底部。

 

实验步骤

表 1. 各反应每管试剂组成

成分 规格
DNA样本 1 µg DNA 在无核酸酶水中稀释至终体积 34 µL
Nick Translation 缓冲液 5 µL
dNTP 混合物 5 µL
dTTP 2 µL
Cy3-dUTP 工作溶液 2 µL
DNA聚合酶I 1 µL
DNA酶I 1 µL
总容积 50 µL

可以优化Cy3-dUTP（组分 A）：dTTP（组分 E）的比例以获得最佳标记条件。
可以优化孵育时间以获得更好的标记。 更长的孵育时间将有助于更多的标记，但可能会缩短最终产品的尺寸。
1.向干净的（无核酸酶）0.5 mL 微型离心管或 0.2 mL PCR 管中，按表 1 中所示的顺序添加试剂。
2.通过短暂的涡旋和短暂的离心小心混合试剂。
3.将反应在 15°C 下孵育 60 分钟。
4.孵育后，将反应置于冰上。
5.要终止反应，请添加 5 µL 停止溶液并将样品加热至 65 °C。
6.使用前在冰上放置 5 分钟或在 4°C 下储存。
7.纯化标记的 DNA。

 
参考文献

Identification of bacterial cells by chromosomal painting.
Authors: Lanoil, B D and Giovannoni, S J
Journal: Applied and environmental microbiology (1997): 1118-23

Cyanine dye dUTP analogs for enzymatic labeling of DNA probes.
Authors: Yu, H and Chao, J and Patek, D and Mujumdar, R and Mujumdar, S and Waggoner, A S
Journal: Nucleic acids research (1994): 3226-32

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ReadiLink iFluor 594抗体标记试剂盒（标记50ug抗体） 货号1230-AAT Bioquest荧光染料

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ReadiLink iFluor 594抗体标记试剂盒（标记50ug抗体）

ReadiLink iFluor 594抗体标记试剂盒（标记50ug抗体）

ReadiLink iFluor 594抗体标记试剂盒（标记50ug抗体） 货号1230 货号 1230 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 2 Labelings 价格 1944
Ex (nm) 588 Em (nm) 604
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

ReadiLink iFluor 594蛋白标记试剂盒提供了一种以微观方式标记抗体的最便捷方法。该试剂盒仅需要两个简单的混合步骤而无需纯化步骤。 试剂盒中使用的iFluor 和mFluor 染料的琥珀酰亚胺酯（SE）显示出与蛋白质的脂族胺的良好反应性和选择性，并形成羧酰胺键，其与天然肽键相同且稳定。iFluor 和mFluor-抗体缀合物可用于免疫荧光染色，荧光原位杂交，流式细胞术和其他生物学应用。 每个ReadiLink 抗体标记试剂盒都提供了进行两次偶联反应（2×50μg蛋白质）的所有必需成分。 每个试剂盒可用于标记50-100μg单克隆，多克隆抗体或其他蛋白质（> 10 kDa），只需两个简单的混合步骤。ReadiLink iFluor 594蛋白标记试剂盒是美国AAT Bioquest研发的产品。

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产品说明书

标准操作规程（标记50μg蛋白质）

将所有组分加热并在打开前将样品瓶短暂离心，并在开始结合前立即准备所需的溶液。 以下SOP是标记抗HDAC IgG抗体的实例。

 

1.准备蛋白质溶液（溶液A）：

为了标记50g蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1mg / mL），将5L（总反应体积的10％）的反应缓冲液（组分B）与50L目标蛋白质溶液混合。

注1.如果您的蛋白质浓度不同，请相应调整蛋白质体积，使~50μg蛋白质可用于标记反应。

注2：为了标记100g蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1mg / mL），将10μL（总反应体积的10％）反应缓冲液（组分B）与100μL目标蛋白质溶液混合。

注3：蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中;如果蛋白质溶解在甘氨酸缓冲液中，必须用1X PBS（pH 7.2-7.4）透析，或使用Amicon Ultra-0.5，Ultracel-10膜，10 kDa（来自Millipore的cat＃UFC501008）去除广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（如硫酸铵和乙酸铵）。

注4：不纯的抗体、稳定的牛血清蛋白（BSA）抗体或明胶不会被很好的标记。叠氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。可以通过透析或旋转柱除去叠氮化钠或硫柳汞，以获得极佳标记结果。

注5：如果蛋白质浓度小于1 mg / mL，则结合效率显着降低。为获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为1-2 mg / mL。

 

2.运行结合反应：

2.1将蛋白质溶液（溶液A）加入一瓶标记染料（组分A）中，通过反复移液几次将其混合均匀，或将小瓶涡旋几秒钟。

注意：使用标记染料的两个小瓶（组分A）通过将100μg蛋白质分成2×50μg蛋白质并使每个50μg蛋白质与一小瓶标记染料反应来标记100μg蛋白质。 将两个小瓶合并用于下一步。

2.2将缀合反应混合物在室温下保持30-60分钟。

注意：如果需要，可以旋转或摇动缀合反应混合物更长的时间。

 

3.停止共轭反应：

3.1添加5 L（对于50μg蛋白质）或10L（对于100μg蛋白质），其为TQ染色猝灭缓冲液（组分C）的总反应体积的10％到缀合反应混合物中（来自步骤2.2），将它们混合 好。

3.2在室温下孵育10分钟。

3.3标记的蛋白质（抗体）现在可以使用了。

 

参考文献

Deep Sequencing Analysis of the Eha-Regulated Transcriptome of Edwardsiella tarda Following Acidification
Authors: D Gao, N Liu, Y Li, Y Zhang, G Liu
Journal: Metabolomics (Los Angel) (2017): 2153–0769

Suramin inhibits cullin-RING E3 ubiquitin ligases
Authors: Kenneth Wu, Robert A Chong, Qing Yu, Jin Bai, Donald E Spratt, Kevin Ching, Chan Lee, Haibin Miao, Inger Tappin, Jerard Hurwitz
Journal: Proceedings of the National Academy of Sciences (2016): E2011–E2018

Glycosaminoglycan mimicry by COAM reduces melanoma growth through chemokine induction and function
Authors: Helene Piccard, Nele Berghmans, Eva Korpos, Chris Dillen, Ilse Van Aelst, Sandra Li, Erik Martens, Sandra Liekens, Sam Noppen, Jo Van Damme
Journal: International Journal of Cancer (2012): E425–E436

 

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说明书
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抗体标记试剂盒 ReadiLink Rapid mFluor 700（标记50ug抗体） 货号1130-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

抗体标记试剂盒 ReadiLink Rapid mFluor 700（标记50ug抗体）

抗体标记试剂盒 ReadiLink Rapid mFluor 700（标记50ug抗体）

抗体标记试剂盒 ReadiLink Rapid mFluor 700（标记50ug抗体） 货号1130 货号 1130 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 2 Labelings 价格 1944
Ex (nm) 680 Em (nm) 695
分子量 溶剂
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简要概述

ReadiLink Rapid mFluor 700 蛋白标记试剂盒提供了一种以微观方式标记抗体的最便捷方法。该试剂盒仅需要两个简单的混合步骤而无需纯化步骤。 试剂盒中使用的iFluor 和mFluor 染料的琥珀酰亚胺酯（SE）显示出与蛋白质的脂族胺的良好反应性和选择性，并形成羧酰胺键，其与天然肽键相同且稳定。 iFluor 和mFluor-抗体缀合物可用于免疫荧光染色，荧光原位杂交，流式细胞术和其他生物学应用。 每个ReadiLink 抗体标记试剂盒都提供了进行两次偶联反应（2×50μg蛋白质）的所有必需成分。 每个试剂盒可用于标记50-100μg单克隆，多克隆抗体或其他蛋白质（> 10 kDa），只需两个简单的混合步骤。抗体标记试剂盒ReadiLink Rapid mFluor 700是美国AAT Bioquest研发的产品。

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标准操作规程（标记50μg蛋白质）

      将所有组分加热并在打开前将样品瓶短暂离心，并在开始结合前准备所需的溶液。 以下SOP是标记抗HDAC IgG抗体的实例。

 

1.准备蛋白质溶液（溶液A）：

为了标记50g蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1mg / mL），将5L（总反应体积的10％）的反应缓冲液（组分B）与50L目标蛋白质溶液混合。

注1.如果您的蛋白质浓度不同，请相应调整蛋白质体积，使~50μg蛋白质可用于标记反应。

注2：为了标记100g蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1mg / mL），将10μL（总反应体积的10％）反应缓冲液（组分B）与100μL目标蛋白质溶液混合。

注3：蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中;如果蛋白质溶解在甘氨酸缓冲液中，必须用1X PBS（pH 7.2-7.4）透析，或使用Amicon Ultra-0.5超滤管，Ultracel-10超滤膜，10 kDa（来自Millipore的cat＃UFC501008）去除用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（如硫酸铵和乙酸铵）。

注4：不纯的抗体、稳定的牛血清蛋白（BSA）抗体或明胶不会被很好的标记。

注5：如果蛋白质浓度小于1 mg / mL，则结合效率会降低。为获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为1-2 mg / mL。

 

2.运行结合反应：

2.1将蛋白质溶液（溶液A）加入到一瓶标记染料（组分A）中，通过反复移液几次将其混合均匀，或将小瓶涡旋几秒钟。

注意：如果要标记100 µg蛋白质，请使用两个小瓶（组分A），将100 µg蛋白质分成2 x 50 µg蛋白质，并使每个50 µg蛋白质与一小瓶标记染料反应，然后合并两个小瓶，用于下一步。

2.2将缀合反应混合物在室温下保持30-60分钟。

注意：如果需要，可以旋转或摇动缀合反应混合物更长的时间。

 

3.停止共轭反应：

3.1加入5 µL TQ染色淬灭缓冲液（组分C）（对于50 µg蛋白质）或加入10 µL TQ染色淬灭缓冲液（组分C）（对于100 µg蛋白质）。加入的缓冲液是总反应体积的10％。

3.2在室温下孵育10分钟。

3.3标记的蛋白质（抗体）完成。

 

参考文献

Deep Sequencing Analysis of the Eha-Regulated Transcriptome of Edwardsiella tarda Following Acidification
Authors: D Gao, N Liu, Y Li, Y Zhang, G Liu
Journal: Metabolomics (Los Angel) (2017): 2153–0769

Suramin inhibits cullin-RING E3 ubiquitin ligases
Authors: Kenneth Wu, Robert A Chong, Qing Yu, Jin Bai, Donald E Spratt, Kevin Ching, Chan Lee, Haibin Miao, Inger Tappin, Jerard Hurwitz
Journal: Proceedings of the National Academy of Sciences (2016): E2011–E2018

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说明书
抗体标记试剂盒 ReadiLink Rapid mFluor 700（标记50ug抗体）.pdf