细胞膜荧光探针DiIC12(3)-DS 货号22050-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

细胞膜荧光探针DiIC12(3)-DS

细胞膜荧光探针DiIC12(3)-DS

细胞膜荧光探针DiIC12(3)-DS    货号22050 货号 22050 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 5 mg 价格 1272
Ex (nm) 550 Em (nm) 564
分子量 825.21 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

细胞膜荧光探针DiIC12(3)-DS是美国AAT Bioquest生产的用于标记细胞膜的荧光探针,DiI,DiO,DiD和DiR染料是用于标记膜和其他疏水结构的亲脂荧光染料家族。当掺入膜中或与亲脂性生物分子如蛋白质结合时,这些对环境敏感的染料的荧光大大增强,尽管它们在水中是弱荧光的。它们具有高消光系数,极性依赖性荧光和短激发态寿命。一旦应用于细胞,这些染料在细胞质膜内横向扩散,导致整个细胞在其最佳浓度下均匀染色。 DiI(橙色荧光),DiO(绿色荧光),DiD(红色荧光)和DiR(深红色荧光)的独特荧光颜色为活细胞的多色成像和流式细胞分析提供了便利的工具。 DiO和DiI可分别与标准FITC和TRITC过滤器一起使用。其中DiD被633 nm He-Ne激光器激发,并且具有比DiI更长的激发和发射波长,为标记具有显着内在荧光的细胞和组织提供了有价值的替代方案。由于红外光通过细胞和组织的有效传输以及红外范围内的低水平自发荧光,DiR可用于体内成像或示踪。该特定的DiI衍生物是含有亲水和亲脂部分的两亲分子。它在水中具有比高亲脂性DiI类似物更强的荧光。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的细胞膜荧光探针DiIC12(3)-DS。

Di系列染料 特点 选择建议
DiO染料(绿色) 活细胞或固定细胞、组织的的长期示踪剂。荧光强度低于DiI。对某些固定组织的染色效果一般。 DiI, DiO, DiD 和 DiR均可染色活细胞或固定细胞及组织(请您根据您的需求选择相应的探针),DiI比DiO荧光更亮;DiD,DiR波长更长,更适合组织染色;
DiA染料(绿色) 一种细胞膜绿色荧光染料,它在细胞膜中的扩散速度比 DiO 快,并且经常和 DiI 一起使用于细胞膜双色标记。可以进行染色后的固定。DiA 对固定细胞的染色效果比 DiO 好。
DiI染料(橙色) 活细胞或固定细胞、组织的的长期示踪剂。除标记细胞膜外,还可以检测细胞的融合和粘附、细胞迁移等。
DiB染料(橘色) 一种检测细胞膜电位的亲脂性阴离子荧光染料,它本身无荧光,当进人细胞与胞浆内的蛋白质结合后才发出荧光。当它进入细胞后,指示细胞内荧光强度增加,即膜电位增加表示细胞去极化;反之,若细胞内荧光强度降低,即膜电位降低表示细胞超极化。
DiD染料(红色) 染色效率高,均一,不易猝灭,细胞毒性低,背景干扰小。
DiS染料(红色) 一种细胞膜红色荧光染料,它在细胞膜中的扩散速度比 DiD快,可以进行染色后的固定。DiS 对固定细胞的染色效果比 DiD好。
DiR染料(深红色) 常用于标记细胞膜,红外荧光可以穿透细胞和组织,在活体成像中用来示踪。DiR可以进行染色后的固定。

点击查看光谱 

产品说明书

操作方法

1.准备DiO,DiI,DiD,DiS或DiR膜染色溶液:

1.1制备DMSO或EtOH储备溶液:储备溶液应在DMSO或EtOH中以1-5mM制备。

注意:储备溶液的未使用部分应储存在-20 ℃。 避免反复冻/融循环。

1.2准备工作溶液:将储备溶液(步骤1.1)稀释到合适的缓冲液中,如无血清培养基,HBSS或PBS制备1至5μM的工作溶液。

注意:对于不同的细胞类型和/或实验条件,应根据经验确定工作溶液的最终浓度。 建议在至少超过十倍范围的浓度下进行测试。

 

2.将细胞染成悬浮液:

2.1在染料工作溶液中悬浮细胞密度为1×106 / mL(来自步骤1.2)。

2.2在37°C孵育2-20分钟。 最佳孵育时间取决于细胞类型。 首先孵育20分钟,然后根据需要进行优化以获得均匀的标记。

2.3将标记的悬浮管以1000至1500rpm离心5分钟。

2.4取出上清液,轻轻地将细胞重新悬浮在预热(37°C)的生长培养基中。

2.5按步骤2.3和2.4洗涤两次。

 

3.染色贴壁细胞:

3.1在无菌玻璃盖玻片上培养贴壁细胞。

3.2从生长培养基中取出盖玻片,轻轻地排出多余的培养基。 将盖玻片放在湿度箱中。

3.3将100μL染料工作溶液(来自步骤1.2)吸移到盖玻片的角落,轻轻搅拌直至所有细胞都被覆盖。

3.4将盖玻片在37°C孵育2-20分钟。 最佳孵育时间取决于细胞类型。 首先孵育20分钟,然后根据需要进行优化以获得均匀的标记。

3.5排出染料工作溶液,用生长培养基清洗盖玻片2-3次。每个洗涤循环用预热的生长培养基覆盖细胞,孵育5-10分钟后排出培养基。

 

4.显微镜检测:

4.1说明书中的表1总结了DiD,DiO,DiI,DiS和DiR滤波器组的选择。

4.2为了同时检测多种染料,可提供如下多波段滤波器组:

a)DiI和DiO = Omega XF52,Chroma 51004

b)DiI和DiD = Omega XF92,Chroma 51007

c)DiI,DiO和DiD = Omega XF93,Chroma 61005

 

5.流式细胞仪检测:

用DiO,DiI,DiD,DiS和DiR标记的细胞可分别使用常规FL1,FL2,FL3和FL4流式细胞仪检测通道进行分析。

 

参考文献

Exosomes from hyperglycemia-stimulated vascular endothelial cells contain versican that regulate calcification/senescence in vascular smooth muscle cells
Authors: Shuang Li, Jun-Kun Zhan, Yan-Jiao Wang, Xiao Lin, Jia-Yu Zhong, Yi Wang, Pan Tan, Jie-Yu He, Xing-Jun Cui, Yi-Yin Chen
Journal: Cell & Bioscience (2019): 1

The Influence of Cell Source and Donor Age on the Tenogenic Potential and Chemokine Secretion of Human Mesenchymal Stromal Cells
Authors: Weronika Zarychta-Wisniewska, Anna Burdzińska, Katarzyna Zielniok, Marta Koblowska, Kamila Gala, Piotr Pedzisz, Roksana Iwanicka-Nowicka, Anna Fogtman, Aleksandra Aksamit, Agnieszka Kulesza
Journal: Stem Cells International (2019)

Cyclic RGD peptide-modified liposomal drug delivery system for targeted oral apatinib administration: enhanced cellular uptake and improved therapeutic effects
Authors: Zhiwang Song, Yun Lin, Chan Feng Xia Zhang, Yonglin Lu, Yong Gao, Chunyan Dong
Journal: International Journal of Nanomedicine (2017): 1941

In vivo imaging system for explants analysis—A new approach for assessment of cell transplantation effects in large animal models
Authors: Weronika Zarychta-Wisniewska, Anna Burdzinska, Radoslaw Zagozdzon, Bartosz Dybowski, Marta Butrym, Zdzislaw Gajewski, Leszek Paczek
Journal: PloS one (2017): e0184588

Influence of Particle Geometry on Gastrointestinal Transit and Absorption following Oral Administration
Authors: Dong Li, Jie Zhuang, Haisheng He, Sifan Jiang, Amrita Banerjee, Yi Lu, Wei Wu, Samir Mitragotri, Li Gan, Jianping Qi
Journal: ACS Applied Materials & Interfaces (2017)

Mesenchymal stem cells increase skin graft survival time and up-regulate PD-L1 expression in splenocytes of mice
Authors: Ali Moravej, Bita Geramizadeh, Negar Azarpira, Amir-Hasan Zarnani, Ramin Yaghobi, Mehdi Kalani, Maryam Khosravi, Amin Kouhpayeh, Mohammad-Hossein Karimi
Journal: Immunology Letters (2017)

Novel approach for the detection of intraperitoneal micrometastasis using an ovarian cancer mouse model
Authors: Ayesha B Alvero, Dongin Kim, Eydis Lima, Natalia J Sumi, Jung Seok Lee, Carlos Cardenas, Mary Pitruzzello, Dan-Arin Silasi, Natalia Buza, Tarek Fahmy
Journal: Scientific Reports (2017)

On-Demand Drug Releasing from Dual Targeting Small Nanoparticles Triggered by High Intensity Focused Ultrasound Enhanced Glioblastoma Targeting Therapy
Authors: Zimiao Luo, Kai Jin, Qiang Pang, shun shen, Zhiqiang Yan, Ting Jiang, Xiaoyan Zhu, Lei Yu, Zhiqing Pang, Xinguo Jiang
Journal: ACS Applied Materials & Interfaces (2017)

Overexpression of c-Met in bone marrow mesenchymal stem cells improves their effectiveness in homing and repair of acute liver failure
Authors: Kun Wang, Yuwen Li, Tiantian Zhu, Yongting Zhang, Wenting Li, Wenyu Lin, Jun Li, Chuanlong Zhu
Journal: Stem Cell Research & Therapy (2017): 162

The accelerated blood clearance phenomenon of PEGylated nanoemulsion upon cross administration with nanoemulsions modified with polyglycerin
Authors: Yuqing Su, Lirong Wang, Kaifan Liang, Mengyang Liu, Xinrong Liu, Yanzhi Song, Yihui Deng
Journal: Asian Journal of Pharmaceutical Sciences (2017)

说明书
细胞膜荧光探针DiIC12(3)-DS.pdf

钙离子荧光探针Cal-770-Dextran Conjugate *MW 3,000* 货号20461-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

钙离子荧光探针Cal-770-Dextran Conjugate *MW 3,000*

钙离子荧光探针Cal-770-Dextran Conjugate *MW 3,000*

钙离子荧光探针Cal-770-Dextran Conjugate *MW 3,000*    货号20461 货号 20461 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 1 mg 价格 0
Ex (nm) 758 Em (nm) 783
分子量 ~5000 溶剂 Water
产品详细介绍

简要概述

钙测量对于许多生物学研究至关重要。显示结合钙后光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜,流式细胞仪,荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离钙浓度的变化。可以使用贴片移液器或显微注射将这些葡聚糖偶联的钙指示剂的细胞不渗透盐形式物理加载到细胞上。使用荧光显微镜测量来自这些细胞的荧光信号。与AM酯形式相比,我们的钙指示剂的右旋糖酐形式在泄漏和区室化方面均显着降低。在荧光红钙指示剂葡聚糖结合物中,Cal-770葡聚糖偶联物可能比其他红色荧光右旋糖酐偶联物更好,因为其更长的荧光波长已针对体内成像进行了优化。Cal-770 是近红外(NIR)钙指示剂,在〜775 nm处具有最大发射。它是唯一具有超过700 nm激发和发射波长的荧光钙指示剂。Cal-770 是极少数可用于体内成像的钙指示剂之一,因为它具有NIR荧光。

点击查看光谱

钙离子篇:时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

产品说明书

使用Cal-520 AM,Cal-570 AM或Cal-630 AM酯类

1.使用Cal-520 ,Cal-590 或Cal-630 AM酯:

        AM酯是非极性酯,其易于穿过活细胞膜,并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是,使用AM酯时必须小心,因为它们易于水解,特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜(DMSO)。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下,AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南,实际应根据您的具体需求进行修改。

a)在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。

b)在实验当天,将Cal-520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液(HHBS)或您选择的缓冲液(0.04%Pluronic®F-127)中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。

注意:非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM,Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。

c)如果您的细胞(如CHO细胞)含有有机阴离子转运蛋白,可将丙磺舒(1-2 mM)加入染料工作溶液中(最终浓度为0.5-1 mM)以减少渗漏去酯化指标。

d)将等体积的染料工作溶液(来自步骤b或c)加入细胞板中。

e)将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟,然后在室温下将板孵育另外30分钟。

注意:孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f)用HHBS或您选择的缓冲液(含有阴离子转运蛋白抑制剂,如1mM丙磺舒,如果适用)替换染料工作溶液,以去除多余的探针。

g)在Ex / Em = 490 / 525nm(对于Cal-520 AM),540 / 5000nm(对于Cal-590 AM)或600 / 640nm(对于Cal-630 AM)进行实验。

 

2.测量细胞内钙响应:

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd,使用以下等式:

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光,Fmin是不存在钙时的荧光,Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数(Kd)是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比,荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者,细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。

 

参考文献

Spatio-temporal modulation of light for stimulation and recording of neuronal activity
Authors: He Ma, Michael Lawrence Castanares, Vincent Daria
Journal: (2018): 1072306

A Critical Period for the Rapid Modification of Synaptic Properties at the VPm Relay Synapse
Authors: Libiao Pan, Junhua Yang, Qian Yang, Xiaomeng Wang, Liya Zhu, Yali Liu, Huifang Lou, Chou Xu, Ying Shen, Hao Wang
Journal: Frontiers in molecular neuroscience (2017)

Advances in Two-Photon Scanning and Scanless Microscopy Technologies for Functional Neural Circuit Imaging
Authors: Simon R Schultz, Caroline S Copeland, Amanda J Foust, Peter Quicke, Renaud Schuck
Journal: Proceedings of the IEEE (2017): 139–157

Bidirectional communication between sensory neurons and osteoblasts in an in vitro co-culture system
Authors: Daisuke Kodama, Takao Hirai, Hisataka Kondo, Kazunori Hamamura, Akifumi Togari
Journal: FEBS Letters (2017)

Ca 2+ signals initiate at immobile IP 3 receptors adjacent to ER-plasma membrane junctions
Authors: Nagendra Babu Thillaiappan, Alap P Chavda, Stephen C Tovey, David L Prole, Colin W Taylor
Journal: Nature Communications (2017): 1505

Calcium Imaging Across Large Areas of Intact Vascular Endothelium Reveals Stimulus-Specific Sensory Cells
Authors: Matthew D Lee, Calum Wilson, John G McCarron
Journal: The FASEB Journal (2017): 1005–8

Calcium transient assays for compound screening with human iPSC-derived cardiomyocytes: Evaluating new tools
Authors: Neil J Daily, Radleigh Santos, Joseph Vecchi, Pinar Kemanli, Tetsuro Wakatsuki
Journal: Journal of evolving stem cell research (2017): 1

Characterization of postsynaptic calcium signals in the pyramidal neurons of anterior cingulate cortex
Authors: Xu-Hui Li, Qian Song, Tao Chen, Min Zhuo
Journal: Molecular Pain (2017): 1744806917719847

Direct measurement of TRPV4 and PIEZO1 activity reveals multiple mechanotransduction pathways in chondrocytes
Authors: M Rocio Servin-Vences, Mirko Moroni, Gary R Lewin, Kate Poole
Journal: eLife (2017): e21074

Expression of the GluA2 subunit of glutamate receptors is required for the normal dendritic differentiation of cerebellar Purkinje cells
Authors: Masahiko Tanaka, Tomomi Senda, Naohide Hirashima
Journal: Neuroscience Letters (2017)

 

相关产品

产品名称 货号
钙离子荧光探针Cal-520 , AM Cat#21130
钙离子荧光探针Fluo-8, AM Cat#21080
新型钙离子荧光探针Calbryte 520, AM *细胞渗透性* Cat#20650

说明书
钙离子荧光探针Cal-770-Dextran Conjugate *MW 3,000*.pdf

CytoFix 溶酶体红色探针 货号23210-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

CytoFix 溶酶体红色探针

CytoFix 溶酶体红色探针

CytoFix 溶酶体红色探针    货号23210 货号 23210 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 500 Tests 价格 3924
Ex (nm) Em (nm)
分子量 863.75 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

溶酶体是含有酸性水解酶的细胞器,它通过自噬来分解废物和细胞碎片。 AAT Bioquest提供CytoFix 溶酶体红色探针,可选择性地对溶酶体染色。 即使固定后,CytoFix 溶酶体红色探针也可以很好地保留在溶酶体中。 该探针会渗透完整的活细胞,并保留在溶酶体内。 这种染料在溶酶体中产生的荧光至少可以保留1周,使其成为极好的溶酶体示踪染料。 该探针的主要特征是其高染色效率,固定后可长时间保留并减少了人工操作时间。 CytoFix 溶酶体红色探针可与GFP表达的细胞或其他细胞器染色剂一起使用,进行多色分析。 它既可用于悬浮细胞,也可用于贴壁细胞,并易于适应各种荧光平台。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的CytoFix 溶酶体红色探针。

 

适用仪器


荧光显微镜  
激发: Cy3/TRITC滤波片
发射: Cy3/TRITC滤波片
推荐孔板: 黑色透明
滤波片: Cy3/TRITC滤波片组

产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 在生长培养基中准备细胞
  2. 除去生长培养基
  3. 将细胞与CytoFix LysoRed工作溶液在37°C下孵育20-30分钟
  4. 去除CytoFix LysoRed工作溶液
  5. 使用Cy3 / TRITC滤光片组在荧光显微镜下分析

 

溶液配制 

工作溶液配制

CytoFix LysoRed工作溶液:将20 µL储备溶液添加到10 mLHanks缓冲液和20 mM Hepes缓冲液(HHBS)或自备缓冲液中,并充分混合。

注意:20 µL储备液足以进行一次96孔板分析。 可以根据特定的细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性来改变染色条件。

注意 未使用的CytoFix LysoRed储备溶液可以分装,并在≤-20°C下以较小的等分试样存储。 避光并避免重复的冻融循环。

 

实验步骤

 

1.在生长培养基中准备细胞。

2.去除细胞培养基并洗涤两次(可选)

3.在细胞培养板中加入100 µL /孔(96孔板)或50 µL /孔(384孔板)的CytoFix LysoRed工作溶液

(注意细胞膜探针的最佳浓度因具体应用而异。)

4.避光保存,在37°C下孵育细胞20-30分钟。

5.除去每个孔中的工作溶液。 用HHBS或您自备缓冲液洗涤细胞一次(可选)。

6.可选:在室温下用4%甲醛将细胞固定20分钟。 洗涤细胞两次以除去任何固定液。

7.使用带有Cy3 / TRITC滤光片组的荧光显微镜观察细胞中的荧光信号。

 

 图示

 

CytoFix 溶酶体红色探针    货号23210

图1.在黑色96孔板上用CytoFix LysoRed染色的HeLa细胞的荧光图像。 在室温下用4%甲醛溶液定影(左)和(右)定影20分钟后获取图像。 使用带有Cy3 / TRITC滤光片的荧光显微镜对细胞成像。

 

说明书
CytoFix 溶酶体红色探针.pdf

钙离子荧光探针Indo-1, AM CAS 112926-02-0 货号21036-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

钙离子荧光探针Indo-1, AM CAS 112926-02-0

钙离子荧光探针Indo-1, AM CAS 112926-02-0

钙离子荧光探针Indo-1, AM CAS 112926-02-0    货号21036 货号 21036 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 20×50 ug 价格 2328
Ex (nm) 330 Em (nm) 404
分子量 1009.91 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

钙离子荧光探针Indo-1, AM是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针,在许多生物学研究中钙离子的测定非常重要。在与钙离子结合的条件下,荧光探针显现出光谱响应,这使研究者可以通过利用荧光显微镜、流式细胞仪、荧光分光镜和荧光分光仪等来研究细胞内部游离的Ca2+浓度的变化。在众多易受UV(紫外光)激发的钙离子指示剂中,Fura-2和Indo-1是最常使用的。当Indo-1 按比率发射时,Fura-2能按比例激发。Fura-2在按比例成像显微检测法中使用,在这里改变激发波长与改变发射光波长更有实用性。在与Ca2+结合的条件下,通过扫描300~400nm 的激发光谱发现Fura-2光吸收发生改变,当时监测到发射光在510 nm处。相对地,Indo-1在流式细胞术中作为染料使用,在这里用单一的激光器激发更有实际意义(通常使用光谱线位移在351?64 nm的氩离子激光器)。Indo-1的发射光从无游离Ca2+环境下的480nm转移到400 nm处(当与Ca2+)。Indo-1 AM是Indo-1的一种具有细胞渗透性的形式。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商,为您提供最优质的钙离子荧光探针。

点击查看光谱

点击查看实验方案

钙离子篇:时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

适用仪器


荧光显微镜  
激发: Indo-1 滤波片
发射: Indo-1 滤波片
推荐孔板: 黑色透明
荧光酶标仪  
激发: 340nm
发射: 400,475nm
cutoff: Ex/Em = 340/400, no cut off. Ex/Em = 340/475, cut off 455
推荐孔板: 黑色透明
读取模式: 底读模式

产品说明书

操作说明

1.准备HHBS缓冲液,10%Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。

2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Indo-1,AM * UltraPure Grade * * CAS 112926-02-0 *储备液。
2.1Indo-1,AM * UltraPure Grade * * CAS 112926-02-0 *使用量:1 mg
2.2所需浓度:2 mM
2.3在合适的容器中,将1mg Indo-1,AM * UltraPure Grade * * CAS 112926-02-0 *与495.09μL无水DMSO混合。
 

3.使用10μMIndo-1,AM * UltraPure Grade * * CAS 112926-02-0 * 4在HHBS中制备2X工作溶液,0.08%Pluronic®F-127和2mM Probenecid。
3.1最终孔内浓度为Indo-1,AM * UltraPure Grade * * CAS 112926-02-0 *:5μM
3.2Pluronic®F-127的最终井内浓度:0.04%
3.3最终孔内浓度的丙磺舒:1mM
3.4在合适的容器中混合16μLIndo-1,AM * UltraPure Grade * * CAS 112926-02-0 *,25.6μL10%Pluronic®F-127,和256μL25mM丙磺舒。接下来,添加HHBS或您选择的缓冲液,直到体积为3.2 mL。
注意:对于大多数细胞系,我们建议最终浓度为Indo-1,AM * UltraPure Grade * * CAS 112926-02-0 *为4至5μM。
注意:推荐的Pluronic F-127井浓度最终为0.02%至0.04%。
注意:推荐的最终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。
 

4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X,并将每种组分的最终浓度调节至以下:5μMIndo-1,AM * UltraPure Grade * * CAS 112926-02-0 *,0.04%Pluronic®F-127,1mM丙磺舒。
 

5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-120分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
 

6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液(或您选择的缓冲液)
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。接下来,添加HHBS或您选择的缓冲液,直到体积为4 mL。
 

7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液,使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先,从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS(或您选择的缓冲液)。
 

8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 346/475 nm运行实验。

 

参考文献

Small-molecule–based generation of functional cardiomyocytes from human umbilical cord–derived induced pluripotent stem cells
Authors: Kai Hong Wu, Su Yun Wang, Qian Ru Xiao, Yu Yang, Ning Ping Huang, Xu Ming Mo, Jian Sun
Journal: Journal of cellular biochemistry (2018)

Nifedipine stimulates proliferation and migration of different breast cancer cells by distinct pathways
Authors: Tao Zhao, Dongqing Guo, Yuchun Gu, Yang Ling
Journal: Molecular Medicine Reports (2017): 2259–2263

Inhibition of pyruvate kinase M2 by reactive oxygen species contributes to the development of pulmonary arterial hypertension
Authors: Dongqing Guo, Junzhong Gu, Hui Jiang, Asif Ahmed, Zhiren Zhang, Yuchun Gu
Journal: Journal of molecular and cellular cardiology (2016): 179–187

Nifedipine promotes the proliferation and migration of breast cancer cells
Authors: Dong-Qing Guo, Hao Zhang, Sheng-Jiang Tan, Yu-Chun Gu
Journal: PloS one (2014): e113649

Bioanalytics/Illumination: Just-right light-Inherently adaptive for application-specific needs
Authors: IAIN JOHNSON
Journal: Unknown

 

相关产品

产品名称 货号
钙离子荧光探针Indo-1, AM Cat#21030

说明书
钙离子荧光探针Indo-1, AM CAS 112926-02-0.pdf

细胞膜荧光探针DiSC3(5) 货号22076-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

细胞膜荧光探针DiSC3(5)

细胞膜荧光探针DiSC3(5)

细胞膜荧光探针DiSC3(5)    货号22076 货号 22076 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 25 mg 价格 1272
Ex (nm) 660 Em (nm) 675
分子量 546.53 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

细胞膜荧光探针DiSC3(5)是美国AAT Bioquest生产的用于标记细胞膜的荧光探针,DiA,DiI,DiO,DiD和DiR染料是用于标记细胞膜和其他疏水结构的亲脂荧光染料家族。当掺入膜中或与亲脂性生物分子如蛋白质结合时,这些对环境敏感的染料的荧光大大增强,尽管它们在水中是弱荧光的。它们具有高消光系数,极性依赖性荧光和短激发态寿命。一旦应用于细胞,这些染料在细胞质膜内横向扩散,导致整个细胞在其最佳浓度下均匀染色。 DiI(橙色荧光),DiO(绿色荧光),DiD(红色荧光)和DiR(深红色荧光)的独特荧光颜色为活细胞的多色成像和流式细胞分析提供了便利的工具。 DiO和DiI可分别与标准FITC和TRITC过滤器一起使用。其中DiD被633 nm He-Ne激光器激发,并且具有比DiI更长的激发和发射波长,为标记具有显着内在荧光的细胞和组织提供了有价值的替代方案。由于红外光通过细胞和组织的有效传输以及红外范围内的低水平自发荧光,DiR可用于体内成像或示踪。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商,为您提供最优质的细胞膜荧光探针DiSC3(5)。

Di系列染料 特点 选择建议
DiO染料(绿色) 活细胞或固定细胞、组织的的长期示踪剂。荧光强度低于DiI。对某些固定组织的染色效果一般。 DiI, DiO, DiD 和 DiR均可染色活细胞或固定细胞及组织(请您根据您的需求选择相应的探针),DiI比DiO荧光更亮;DiD,DiR波长更长,更适合组织染色;
DiA染料(绿色) 一种细胞膜绿色荧光染料,它在细胞膜中的扩散速度比 DiO 快,并且经常和 DiI 一起使用于细胞膜双色标记。可以进行染色后的固定。DiA 对固定细胞的染色效果比 DiO 好。
DiI染料(橙色) 活细胞或固定细胞、组织的的长期示踪剂。除标记细胞膜外,还可以检测细胞的融合和粘附、细胞迁移等。
DiB染料(橘色) 一种检测细胞膜电位的亲脂性阴离子荧光染料,它本身无荧光,当进人细胞与胞浆内的蛋白质结合后才发出荧光。当它进入细胞后,指示细胞内荧光强度增加,即膜电位增加表示细胞去极化;反之,若细胞内荧光强度降低,即膜电位降低表示细胞超极化。
DiD染料(红色) 染色效率高,均一,不易猝灭,细胞毒性低,背景干扰小。
DiS染料(红色) 一种细胞膜红色荧光染料,它在细胞膜中的扩散速度比 DiD快,可以进行染色后的固定。DiS 对固定细胞的染色效果比 DiD好。
DiR染料(深红色) 常用于标记细胞膜,红外荧光可以穿透细胞和组织,在活体成像中用来示踪。DiR可以进行染色后的固定。

产品说明书

样本分析

1.制备DiO,DiI DiD,DiS或DiR膜染色溶液:
1.1制备DMSO或EtOH储备溶液:储备溶液应在DMSO或EtOH中以1-5mM制备。
注意:储备溶液的未使用部分应储存在-20℃。 避免反复冻/融循环。
1.2准备工作溶液:将储备溶液(步骤1.1)稀释到合适的缓冲液中,如无血清培养基,HBSS或PBS,制成1至5uM的工作溶液。
注意:对于不同的细胞类型和/或实验条件,应根据经验确定工作溶液的最终浓度。 建议在至少超过十倍范围的浓度下进行测试。

2.将细胞染成悬浮液:
2.1在染料工作溶液中悬浮细胞密度为1×106 / mL(来自步骤1.2)。
2.2在37°C孵育2-20分钟。 最佳培养时间取决于细胞类型。 首先孵育20分钟,然后根据需要进行优化以获得均匀的标记。
2.3将标记的悬浮管以1000至1500rpm离心5分钟。
2.4去除上清液,轻轻地将细胞重新悬浮在预热(37°C)的生长培养基中。
2.5按步骤2.3和2.4洗涤两次。

3.染色贴壁细胞:
3.1在无菌玻璃盖玻片上培养贴壁细胞。
3.2从生长培养基中取出盖玻片,轻轻地排出多余的培养基。 将盖玻片放在湿度箱中。
3.3将100μL染料工作溶液(来自步骤1.2)吸移到盖玻片的角落,轻轻搅拌直至所有细胞都被覆盖。
3.4将盖玻片在37°C孵育2-20分钟。 最佳培养时间根据细胞类型而变化。开始孵育20分钟,然后根据需要进行优化以获得均匀的标记。
3.5排出染料工作溶液,用生长培养基清洗盖玻片两到三次。 对于每个洗涤循环,用预热的生长培养基覆盖细胞,孵育5-10分钟,然后排出培养基。

4.显微镜检测:
4.1表1总结了DiD,DiO,DiI,DiS和DiR滤波器组的选择。
4.2对于同时检测多种染料,可提供如下多波段滤波器组:
a)DiI和DiO = Omega XF52,Chroma 51004
b)DiI和DiD = Omega XF92,Chroma 51007
c)DiI,DiO和DiD = Omega XF93,Chroma 61005

5.流式细胞仪检测:
用DiO,DiI,DiD,DiS和DiR标记的细胞可分别使用常规FL1,FL2,FL3和FL4流式细胞仪检测通道进行分析。

 

参考文献

Intraurethral co-transplantation of bone marrow mesenchymal stem cells and muscle-derived cells improves the urethral closure
Authors: Anna Burdzinska, Bartosz Dybowski, Weronika Zarychta-Wisniewska, Agnieszka Kulesza, Marta Butrym, Radoslaw Zagozdzon, Agnieszka Graczyk-Jarzynka, Piotr Radziszewski, Zdzislaw Gajewski, Leszek Paczek
Journal: Stem cell research & therapy (2018): 239

Loss of Integrity of Doxorubicin Liposomes during Transcellular Transportation Evidenced by Fluorescence Resonance Energy Transfer Effect
Authors: Dong Li, Jie Zhuang, Yinqian Yang, Dandan Wang, Jinlong Yang, Haisheng He, Wufa Fan, Amrita Banerjee, Yi Lu, Wei Wu
Journal: Colloids and Surfaces B: Biointerfaces (2018)

Cyclic RGD peptide-modified liposomal drug delivery system for targeted oral apatinib administration: enhanced cellular uptake and improved therapeutic effects
Authors: Zhiwang Song, Yun Lin, Chan Feng Xia Zhang, Yonglin Lu, Yong Gao, Chunyan Dong
Journal: International Journal of Nanomedicine (2017): 1941

In vivo imaging system for explants analysis—A new approach for assessment of cell transplantation effects in large animal models
Authors: Weronika Zarychta-Wisniewska, Anna Burdzinska, Radoslaw Zagozdzon, Bartosz Dybowski, Marta Butrym, Zdzislaw Gajewski, Leszek Paczek
Journal: PloS one (2017): e0184588

Influence of Particle Geometry on Gastrointestinal Transit and Absorption following Oral Administration
Authors: Dong Li, Jie Zhuang, Haisheng He, Sifan Jiang, Amrita Banerjee, Yi Lu, Wei Wu, Samir Mitragotri, Li Gan, Jianping Qi
Journal: ACS Applied Materials & Interfaces (2017)

Mesenchymal stem cells increase skin graft survival time and up-regulate PD-L1 expression in splenocytes of mice
Authors: Ali Moravej, Bita Geramizadeh, Negar Azarpira, Amir-Hasan Zarnani, Ramin Yaghobi, Mehdi Kalani, Maryam Khosravi, Amin Kouhpayeh, Mohammad-Hossein Karimi
Journal: Immunology Letters (2017)

Novel approach for the detection of intraperitoneal micrometastasis using an ovarian cancer mouse model
Authors: Ayesha B Alvero, Dongin Kim, Eydis Lima, Natalia J Sumi, Jung Seok Lee, Carlos Cardenas, Mary Pitruzzello, Dan-Arin Silasi, Natalia Buza, Tarek Fahmy
Journal: Scientific Reports (2017)

On-Demand Drug Releasing from Dual Targeting Small Nanoparticles Triggered by High Intensity Focused Ultrasound Enhanced Glioblastoma Targeting Therapy
Authors: Zimiao Luo, Kai Jin, Qiang Pang, shun shen, Zhiqiang Yan, Ting Jiang, Xiaoyan Zhu, Lei Yu, Zhiqing Pang, Xinguo Jiang
Journal: ACS Applied Materials & Interfaces (2017)

Overexpression of c-Met in bone marrow mesenchymal stem cells improves their effectiveness in homing and repair of acute liver failure
Authors: Kun Wang, Yuwen Li, Tiantian Zhu, Yongting Zhang, Wenting Li, Wenyu Lin, Jun Li, Chuanlong Zhu
Journal: Stem Cell Research & Therapy (2017): 162

The accelerated blood clearance phenomenon of PEGylated nanoemulsion upon cross administration with nanoemulsions modified with polyglycerin
Authors: Yuqing Su, Lirong Wang, Kaifan Liang, Mengyang Liu, Xinrong Liu, Yanzhi Song, Yihui Deng
Journal: Asian Journal of Pharmaceutical Sciences (2017)

说明书
细胞膜荧光探针DiSC3(5).pdf