Cell Meter 活细胞Caspase 1结合检测试剂盒 绿色荧光 货号20108-AAT Bioquest荧光染料

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Cell Meter 活细胞Caspase 1结合检测试剂盒 绿色荧光

Cell Meter 活细胞Caspase 1结合检测试剂盒 绿色荧光

Cell Meter 活细胞Caspase 1结合检测试剂盒 绿色荧光     货号20108 货号 20108 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 25 Tests 价格 3924
Ex (nm) 493 Em (nm) 517
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

我们的Cell Meter 活细胞半胱天冬酶活性检测试剂盒基于半胱天冬酶的荧光抑制剂。这些抑制剂具有细胞渗透性和非细胞毒性。一旦进入细胞,半胱天冬酶抑制剂与活性半胱天冬酶共价结合。 Caspase-1主要参与促炎细胞因子的激活和细胞凋亡过程。已经证明胱天蛋白酶1对肽序列Tyr-Val-Ala-Asp(YVAD)具有底物选择性。该试剂盒使用FAM-YVAD-FMK作为半胱天冬酶1活性的荧光指示剂。 FAM-YVAD-FMK在凋亡细胞中不可逆地结合活化的半胱天冬酶1。一旦与半胱天冬酶1结合,荧光试剂保留在细胞内。结合抑制胱天蛋白酶1但不会阻止细胞凋亡的进行。

有多种参数可用于监测细胞凋亡。这种Cell Meter 活细胞半胱天冬酶1活性检测试剂盒旨在通过测量活细胞中的caspase 1活化来检测细胞凋亡。它用于定量凋亡细胞中活化的半胱天冬酶1活性,或用于筛选半胱天冬酶1抑制剂。绿色标记试剂FAM-YVAD-FMK允许通过荧光显微镜,流式细胞仪或荧光酶标仪直接检测凋亡细胞中活化的半胱天冬酶1。该试剂盒为所有必需组分提供优化的分析方案。

点击查看光谱

 

适用仪器


流式细胞仪  
激发: FL1通道
发射: FL1通道
仪器规格: 用于碘化丙啶的FL2通道
荧光显微镜  
激发: FITC通道
发射: FITC通道
通道: 黑色透明
荧光酶标仪  
激发: 490nm
发射: 525nm
cutoff: 515nm
通道: 黑色透明

产品说明书

分离细胞的检测方案

概述

用密度为5×105到2×106个细胞/ mL的测试化合物制备细胞

将FAM-YVAD-FMK以1:150的比例加入到细胞溶液中

在室温下孵育1小时

将细胞沉淀,用缓冲液或生长培养基洗涤并重悬细胞

在Ex / Em = 490 / 525nm处分析细胞

注:使用前将所有部件在室温下解冻。

 

操作方法

1.根据您的特异性诱导方案,将细胞培养至最适于细胞凋亡诱导的密度,但不超过2 x 106个细胞/ mL。同时,对于每种标记条件,以与诱导群体相同的密度培养非诱导的阴性对照细胞群。以下是一些诱导悬浮培养细胞凋亡的例子:

1)用2μg/ ml喜树碱处理Jurkat细胞3小时。

2)用1μM星形孢菌素处理Jurkat细胞3小时。

3)用4μg/ ml喜树碱处理HL-60细胞4小时。

4)用1μM星形孢菌素处理HL-60细胞4小时。

注意:应对每个细胞系进行单独评估,以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。

2.通过向FAM-YVAD-FMK(组分A)的小瓶中加入50μLDMSO制备150X FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液。

3.将150×FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液(来自步骤1)以1:150的比例添加到细胞溶液中,并将细胞在37℃,5%CO 2培养箱中孵育1小时。

注1:对于FAM-YVAD-FMK标记,细胞可以浓缩至~5×10 6个细胞/ mL。 未使用的150X FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20°C。

注2:对于粘附细胞,用0.5mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整,并在用FAM-YVAD-FMK孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

注3:适当的孵育时间取决于所用的细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。

4.将细胞以约200g旋转5分钟,并用1mL洗涤缓冲液(组分B)洗涤细胞两次。 将细胞重悬于所需量的洗涤缓冲液中。

注1:FAM-YVAD-FMK是荧光的,因此清除任何未结合的试剂以消除背景非常重要。

注2:对于分离的细胞,应将细胞浓度调节至每个微量滴定板孔中2-5×10 5个细胞/100μL等分试样,用于步骤6。

5.如果需要,用DNA染色标记细胞(如用于死细胞的碘化丙锭,或用于细胞核染色的整个群体的Hoechst)。

6.通过荧光显微镜,流式细胞仪或荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm处检测荧光强度(对于碘化丙锭,Ex / Em = 535/635 nm;对于Hoechst染料,Ex / Em = 350 / 461纳米)。

6.1对于流式细胞仪,使用FL1通道监测荧光强度(FL2通道用于碘化丙锭染色)。

6.2用于荧光显微镜和荧光酶标仪。将100μL细胞悬浮液置于96孔黑壁/微量滴定板透明底部的每个孔中。

注意:如果需要平衡细胞浓度,调整诱导细胞的悬浮体积以接近非诱导细胞群的细胞密度。如果您的细胞治疗不会导致受刺激细胞群数量的显着损失,则此调整步骤是可选的。

6.3使用FITC通道在荧光显微镜下观察细胞(用于碘化丙啶染色的TRITC通道,用于Hoechst染色的DAPI通道)。

6.4使用荧光酶标仪,使用Ex / Em = 490 / 525nm(在515nm处截止)底部读取模式监测荧光强度。

 

参考文献

Helicobacter pylori Secreted Protein HP1286 Triggers Apoptosis in Macrophages via TNF-Independent and ERK MAPK-Dependent Pathways
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: Frontiers in Cellular and Infection Microbiology (2017): 58

Death receptor 3 mediates necroptotic cell death
Authors: Sebastian Bittner, Gertrud Knoll, Martin Ehrenschwender
Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2016): 1–12

Helicobacter pylori protein JHP0290 exhibits proliferative and anti-apoptotic effects in gastric epithelial cells
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: PloS one (2015): e0124407

 

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产品名称 货号
Cell Meter 活细胞Caspase 8结合检测试剂盒 绿色荧光 Cat#20115
Cell Meter 活细胞Caspase 9结合检测试剂盒 绿色荧光 Cat#20117
Cell Meter 活细胞Caspase 6结合检测试剂盒 绿色荧光 Cat#20113

说明书
Cell Meter 活细胞Caspase 1结合检测试剂盒 绿色荧光 .pdf

Cell Meter 活细胞Caspase 3/7结合检测试剂盒 绿色荧光 货号20100-AAT Bioquest荧光染料

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Cell Meter 活细胞Caspase 3/7结合检测试剂盒 绿色荧光

Cell Meter 活细胞Caspase 3/7结合检测试剂盒 绿色荧光

Cell Meter 活细胞Caspase 3/7结合检测试剂盒 绿色荧光     货号20100 货号 20100 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 25 Tests 价格 3924
Ex (nm) 493 Em (nm) 517
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

我们的Cell Meter 活细胞半胱天冬酶活性检测试剂盒基于半胱天冬酶的荧光抑制剂。这些抑制剂具有细胞渗透性和非细胞毒性。一旦进入细胞,半胱天冬酶抑制剂与活性半胱天冬酶共价结合。胱天蛋白酶3/7的激活对于细胞凋亡的起始是重要的。已经证明胱天蛋白酶3/7对肽序列Asp-Glu-Val-Asp(DEVD)具有底物选择性。该试剂盒使用TF3-DEVD-FMK作为半胱天冬酶3/7活性的荧光指示剂。TF3-DEVD-FMK在凋亡细胞中不可逆地结合活化的胱天蛋白酶3/7。一旦与胱天蛋白酶3/7结合,荧光试剂保留在细胞内。结合抑制caspase 3/7,但不会阻止细胞凋亡的进行。

有多种参数可用于检测细胞凋亡。这种Cell Meter 活细胞半胱天冬酶3/7活性测定试剂盒旨在通过测量活细胞中胱天蛋白酶3/7的活化来检测细胞凋亡。它用于定量凋亡细胞中活化的caspase 3/7活性,或用于筛选caspase 3/7抑制剂。TF3-DEVD-FMK,红色标记试剂,允许通过荧光显微镜,流式细胞仪或荧光酶标仪直接检测凋亡细胞中活化的半胱天冬酶3/7。该试剂盒为所有必需组分提供优化的分析方案。

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适用仪器


流式细胞仪  
参数 见表1
荧光显微镜  
推荐孔板: 黑色透明
通道: 见表1
荧光酶标仪  
推荐孔板: 黑色孔板
通道: 见表2

表1:用于流式细胞仪和荧光显微镜的荧光强度检测

  流式细胞仪 荧光显微镜
FAM-DEVD-FMK FL1 通道 FITC 通道
Propidium Iodide FL2 通道 TRITC 通道
Hoechst Dye 紫色激光 DAPI 通道

表2:荧光酶标仪的荧光强度检测

  激发 发射 cutoff
FAM-DEVD-FMK FL1 通道 FITC 通道 515nm
Propidium Iodide FL2 通道 TRITC 通道  
Hoechst Dye 紫色激光 DAPI 通道  

产品说明书

分离细胞的检测方案

概述

用测试化合物制备细胞,密度为5×105至2×106个细胞/ mL

将TF3-DEVD-FMK以1:150的比例加入细胞溶液中

在室温下孵育1小时

沉淀细胞,用缓冲液或生长培养基洗涤并重悬细胞

在Ex / Em = 550 / 595nm处分析细胞

注:使用前将所有部件在室温下解冻。

 

操作方法

1.根据您的特异性诱导方案,将细胞培养至最适于细胞凋亡诱导的密度,但不超过2 x 106个细胞/ mL。同时,对于每种标记条件,以与诱导群体相同的密度培养非诱导的阴性对照细胞群。以下是一些诱导悬浮培养细胞凋亡的例子:

1)用2μg/ ml喜树碱处理Jurkat细胞3小时。

2)用1μM星形孢菌素处理Jurkat细胞3小时。

3)用4μg/ ml喜树碱处理HL-60细胞4小时。

4)用1μM星形孢菌素处理HL-60细胞4小时。

注意:应对每个细胞系进行单独评估,以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。

2.通过向TF3-DEVD-FMK(组分A)的小瓶中加入50μLDMSO制备150X TF3-DEVD-FMK DMSO储备溶液。 将150×TF3-DEVD-FMK以1:150的比例加入细胞溶液中,并将细胞在37℃,5%CO2培养箱中孵育1小时。

注1:对于TF3-DEVD-FMK标记,细胞可以浓缩至~5×10 6个细胞/ mL。 未使用的150X TF3-DEVD-FMK DMSO储备溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20°C。

注2:对于粘附细胞,用0.5mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整,并在用TF3-DEVD-FMK孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

注3:适当的孵育时间取决于所用的细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。

3.将细胞以约200g旋转5分钟,并用1mL洗涤缓冲液(组分B)洗涤细胞两次。 将细胞重悬于所需量的洗涤缓冲液中。

注1:TF3-DEVD-FMK是荧光的,因此清除任何未结合的试剂以消除背景非常重要。

注2:对于分离的细胞,应将细胞浓度调节至每个微量滴定板孔中2-5×10 5个细胞/100μL等分试样,用于步骤5。

4.如果需要,用DNA染色标记细胞(例如用于死细胞的Nuclear Green DCS1,或用于细胞核染色的整个群体的Hoechst)。

5.通过荧光显微镜,流式细胞仪或荧光酶标仪在Ex / Em = 550/595 nm处检测荧光强度(对于Nuclear Green DCS1,Ex / Em = 490/525 nm,对于Hoechst染料,Ex / Em = 350/461 nm)

5.1对于流式细胞仪,使用Ex / Em = 550/595 nm(用于Nuclear Green DCS1染色的FL1通道)的通道监测荧光强度。

5.2用于荧光显微镜和荧光酶标仪。 将100μL细胞悬浮液置于96孔黑色微量滴定板的每个孔中。

注意:如果需要平衡细胞浓度,调整诱导细胞的悬浮体积以接近非诱导细胞群的细胞密度。 如果您的细胞治疗不会导致受刺激细胞群数量的显着损失,则此调整步骤是可选的。

5.3使用TRITC通道(用于Nuclear Green DCS1染色的FITC通道,用于Hoechst染色的DAPI通道)在荧光显微镜下观察细胞。

5.4使用荧光酶标仪,使用Ex / Em = 550/595 nm(在570 nm处截止)底部读取模式监测荧光强度。

 

参考文献

An inner activation gate controls TMEM16F phospholipid scrambling
Authors: Trieu Le, Zhiguang Jia, Son C Le, Yang Zhang, Jianhan Chen, Huanghe Yang
Journal: Nature communications (2019): 1846

Drosophila Subdued is a moonlighting transmembrane protein 16 (TMEM16) that transports ions and phospholipids
Authors: Trieu Le, Son C Le, Huanghe Yang
Journal: Journal of Biological Chemistry (2019): jbc–AC118

Helicobacter pylori Secreted Protein HP1286 Triggers Apoptosis in Macrophages via TNF-Independent and ERK MAPK-Dependent Pathways
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: Frontiers in Cellular and Infection Microbiology (2017): 58

Death receptor 3 mediates necroptotic cell death
Authors: Sebastian Bittner, Gertrud Knoll, Martin Ehrenschwender
Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2016): 1–12

Helicobacter pylori protein JHP0290 exhibits proliferative and anti-apoptotic effects in gastric epithelial cells
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: PloS one (2015): e0124407

 

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Cell Meter 活细胞Caspase 3/7结合检测试剂盒 红色荧光 Cat#20101

说明书
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Cell Meter 活细胞Caspase 1结合检测试剂盒 绿色荧光 货号20108-AAT Bioquest荧光染料

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Cell Meter 活细胞Caspase 1结合检测试剂盒 绿色荧光

Cell Meter 活细胞Caspase 1结合检测试剂盒 绿色荧光

Cell Meter 活细胞Caspase 1结合检测试剂盒 绿色荧光     货号20108 货号 20108 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 25 Tests 价格 3924
Ex (nm) 493 Em (nm) 517
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

我们的Cell Meter 活细胞半胱天冬酶活性检测试剂盒基于半胱天冬酶的荧光抑制剂。这些抑制剂具有细胞渗透性和非细胞毒性。一旦进入细胞,半胱天冬酶抑制剂与活性半胱天冬酶共价结合。 Caspase-1主要参与促炎细胞因子的激活和细胞凋亡过程。已经证明胱天蛋白酶1对肽序列Tyr-Val-Ala-Asp(YVAD)具有底物选择性。该试剂盒使用FAM-YVAD-FMK作为半胱天冬酶1活性的荧光指示剂。 FAM-YVAD-FMK在凋亡细胞中不可逆地结合活化的半胱天冬酶1。一旦与半胱天冬酶1结合,荧光试剂保留在细胞内。结合抑制胱天蛋白酶1但不会阻止细胞凋亡的进行。

有多种参数可用于监测细胞凋亡。这种Cell Meter 活细胞半胱天冬酶1活性检测试剂盒旨在通过测量活细胞中的caspase 1活化来检测细胞凋亡。它用于定量凋亡细胞中活化的半胱天冬酶1活性,或用于筛选半胱天冬酶1抑制剂。绿色标记试剂FAM-YVAD-FMK允许通过荧光显微镜,流式细胞仪或荧光酶标仪直接检测凋亡细胞中活化的半胱天冬酶1。该试剂盒为所有必需组分提供优化的分析方案。

点击查看光谱

 

适用仪器


流式细胞仪  
激发: FL1通道
发射: FL1通道
仪器规格: 用于碘化丙啶的FL2通道
荧光显微镜  
激发: FITC通道
发射: FITC通道
通道: 黑色透明
荧光酶标仪  
激发: 490nm
发射: 525nm
cutoff: 515nm
通道: 黑色透明

产品说明书

分离细胞的检测方案

概述

用密度为5×105到2×106个细胞/ mL的测试化合物制备细胞

将FAM-YVAD-FMK以1:150的比例加入到细胞溶液中

在室温下孵育1小时

将细胞沉淀,用缓冲液或生长培养基洗涤并重悬细胞

在Ex / Em = 490 / 525nm处分析细胞

注:使用前将所有部件在室温下解冻。

 

操作方法

1.根据您的特异性诱导方案,将细胞培养至最适于细胞凋亡诱导的密度,但不超过2 x 106个细胞/ mL。同时,对于每种标记条件,以与诱导群体相同的密度培养非诱导的阴性对照细胞群。以下是一些诱导悬浮培养细胞凋亡的例子:

1)用2μg/ ml喜树碱处理Jurkat细胞3小时。

2)用1μM星形孢菌素处理Jurkat细胞3小时。

3)用4μg/ ml喜树碱处理HL-60细胞4小时。

4)用1μM星形孢菌素处理HL-60细胞4小时。

注意:应对每个细胞系进行单独评估,以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。

2.通过向FAM-YVAD-FMK(组分A)的小瓶中加入50μLDMSO制备150X FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液。

3.将150×FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液(来自步骤1)以1:150的比例添加到细胞溶液中,并将细胞在37℃,5%CO 2培养箱中孵育1小时。

注1:对于FAM-YVAD-FMK标记,细胞可以浓缩至~5×10 6个细胞/ mL。 未使用的150X FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20°C。

注2:对于粘附细胞,用0.5mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整,并在用FAM-YVAD-FMK孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

注3:适当的孵育时间取决于所用的细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。

4.将细胞以约200g旋转5分钟,并用1mL洗涤缓冲液(组分B)洗涤细胞两次。 将细胞重悬于所需量的洗涤缓冲液中。

注1:FAM-YVAD-FMK是荧光的,因此清除任何未结合的试剂以消除背景非常重要。

注2:对于分离的细胞,应将细胞浓度调节至每个微量滴定板孔中2-5×10 5个细胞/100μL等分试样,用于步骤6。

5.如果需要,用DNA染色标记细胞(如用于死细胞的碘化丙锭,或用于细胞核染色的整个群体的Hoechst)。

6.通过荧光显微镜,流式细胞仪或荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm处检测荧光强度(对于碘化丙锭,Ex / Em = 535/635 nm;对于Hoechst染料,Ex / Em = 350 / 461纳米)。

6.1对于流式细胞仪,使用FL1通道监测荧光强度(FL2通道用于碘化丙锭染色)。

6.2用于荧光显微镜和荧光酶标仪。将100μL细胞悬浮液置于96孔黑壁/微量滴定板透明底部的每个孔中。

注意:如果需要平衡细胞浓度,调整诱导细胞的悬浮体积以接近非诱导细胞群的细胞密度。如果您的细胞治疗不会导致受刺激细胞群数量的显着损失,则此调整步骤是可选的。

6.3使用FITC通道在荧光显微镜下观察细胞(用于碘化丙啶染色的TRITC通道,用于Hoechst染色的DAPI通道)。

6.4使用荧光酶标仪,使用Ex / Em = 490 / 525nm(在515nm处截止)底部读取模式监测荧光强度。

 

参考文献

Helicobacter pylori Secreted Protein HP1286 Triggers Apoptosis in Macrophages via TNF-Independent and ERK MAPK-Dependent Pathways
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: Frontiers in Cellular and Infection Microbiology (2017): 58

Death receptor 3 mediates necroptotic cell death
Authors: Sebastian Bittner, Gertrud Knoll, Martin Ehrenschwender
Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2016): 1–12

Helicobacter pylori protein JHP0290 exhibits proliferative and anti-apoptotic effects in gastric epithelial cells
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: PloS one (2015): e0124407

 

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Cell Meter 活细胞Caspase 8结合检测试剂盒 绿色荧光 Cat#20115
Cell Meter 活细胞Caspase 9结合检测试剂盒 绿色荧光 Cat#20117
Cell Meter 活细胞Caspase 6结合检测试剂盒 绿色荧光 Cat#20113

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Cell Meter 活细胞Caspase 3/7结合检测试剂盒 红色荧光

Cell Meter 活细胞Caspase 3/7结合检测试剂盒 红色荧光

Cell Meter 活细胞Caspase 3/7结合检测试剂盒 红色荧光     货号20101 货号 20101 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 25 Tests 价格 3924
Ex (nm) 554 Em (nm) 578
分子量 溶剂
产品详细介绍

简要概述

我们的Cell Meter 活细胞半胱天冬酶活性检测试剂盒基于半胱天冬酶的荧光抑制剂。这些抑制剂具有细胞渗透性和非细胞毒性。一旦进入细胞,半胱天冬酶抑制剂与活性半胱天冬酶共价结合。胱天蛋白酶3/7的激活对于细胞凋亡的起始是重要的。已经证明胱天蛋白酶3/7对肽序列Asp-Glu-Val-Asp(DEVD)具有底物选择性。该试剂盒使用TF3-DEVD-FMK作为半胱天冬酶3/7活性的荧光指示剂。TF3-DEVD-FMK在凋亡细胞中不可逆地结合活化的胱天蛋白酶3/7。一旦与胱天蛋白酶3/7结合,荧光试剂保留在细胞内。结合抑制caspase 3/7,但不会阻止细胞凋亡的进行。

有多种参数可用于监测细胞凋亡。这种Cell Meter 活细胞半胱天冬酶3/7活性测定试剂盒旨在通过测量活细胞中胱天蛋白酶3/7的活化来检测细胞凋亡。它用于定量凋亡细胞中活化的caspase 3/7活性,或用于筛选caspase 3/7抑制剂。TF3-DEVD-FMK,红色标记试剂,允许通过荧光显微镜,流式细胞仪或荧光酶标仪直接检测凋亡细胞中活化的半胱天冬酶3/7。该试剂盒为所有必需组分提供优化的分析方案。

点击查看光谱

 

适用仪器


流式细胞仪  
激发: 550nm
发射: 595nm
通道: FL1通道
荧光显微镜  
激发: TRITC通道
发射: TRITC通道
通道: 黑色透明
荧光酶标仪  
激发: 550nm
发射: 595nm
cutoff: 570nm
通道: 黑色透明

产品说明书

分离细胞的检测方案

概述

用测试化合物制备细胞,密度为5×105至2×106个细胞/ mL

将TF3-DEVD-FMK以1:150的比例加入细胞溶液中

在室温下孵育1小时

沉淀细胞,用缓冲液或生长培养基洗涤并重悬细胞

在Ex / Em = 550 / 595nm处分析细胞

注:使用前将所有部件在室温下解冻。

 

操作方法

1.根据您的特异性诱导方案,将细胞培养至最适于细胞凋亡诱导的密度,但不超过2 x 106个细胞/ mL。同时,对于每种标记条件,以与诱导群体相同的密度培养非诱导的阴性对照细胞群。以下是一些诱导悬浮培养细胞凋亡的例子:

1)用2μg/ ml喜树碱处理Jurkat细胞3小时。

2)用1μM星形孢菌素处理Jurkat细胞3小时。

3)用4μg/ ml喜树碱处理HL-60细胞4小时。

4)用1μM星形孢菌素处理HL-60细胞4小时。

注意:应对每个细胞系进行单独评估,以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。

2.通过向TF3-DEVD-FMK(组分A)的小瓶中加入50μLDMSO制备150X TF3-DEVD-FMK DMSO储备溶液。 将150×TF3-DEVD-FMK以1:150的比例加入细胞溶液中,并将细胞在37℃,5%CO2培养箱中孵育1小时。

注1:对于TF3-DEVD-FMK标记,细胞可以浓缩至~5×10 6个细胞/ mL。 未使用的150X TF3-DEVD-FMK DMSO储备溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20°C。

注2:对于粘附细胞,用0.5mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整,并在用TF3-DEVD-FMK孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

注3:适当的孵育时间取决于所用的细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。

3.将细胞以约200g旋转5分钟,并用1mL洗涤缓冲液(组分B)洗涤细胞两次。 将细胞重悬于所需量的洗涤缓冲液中。

注1:TF3-DEVD-FMK是荧光的,因此清除任何未结合的试剂以消除背景非常重要。

注2:对于分离的细胞,应将细胞浓度调节至每个微量滴定板孔中2-5×10 5个细胞/100μL等分试样,用于步骤5。

4.如果需要,用DNA染色标记细胞(例如用于死细胞的Nuclear Green DCS1,或用于细胞核染色的整个群体的Hoechst)。

5.通过荧光显微镜,流式细胞仪或荧光酶标仪在Ex / Em = 550/595 nm处检测荧光强度(对于Nuclear Green DCS1,Ex / Em = 490/525 nm,对于Hoechst染料,Ex / Em = 350/461 nm)

5.1对于流式细胞仪,使用Ex / Em = 550/595 nm(用于Nuclear Green DCS1染色的FL1通道)的通道监测荧光强度。

5.2用于荧光显微镜和荧光酶标仪。 将100μL细胞悬浮液置于96孔黑色微量滴定板的每个孔中。

注意:如果需要平衡细胞浓度,调整诱导细胞的悬浮体积以接近非诱导细胞群的细胞密度。 如果您的细胞治疗不会导致受刺激细胞群数量的显着损失,则此调整步骤是可选的。

5.3使用TRITC通道(用于Nuclear Green DCS1染色的FITC通道,用于Hoechst染色的DAPI通道)在荧光显微镜下观察细胞。

5.4使用荧光酶标仪,使用Ex / Em = 550/595 nm(在570 nm处截止)底部读取模式监测荧光强度。

 

参考文献

An inner activation gate controls TMEM16F phospholipid scrambling
Authors: Trieu Le, Zhiguang Jia, Son C Le, Yang Zhang, Jianhan Chen, Huanghe Yang
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Drosophila Subdued is a moonlighting transmembrane protein 16 (TMEM16) that transports ions and phospholipids
Authors: Trieu Le, Son C Le, Huanghe Yang
Journal: Journal of Biological Chemistry (2019): jbc–AC118

Helicobacter pylori Secreted Protein HP1286 Triggers Apoptosis in Macrophages via TNF-Independent and ERK MAPK-Dependent Pathways
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: Frontiers in Cellular and Infection Microbiology (2017): 58

Death receptor 3 mediates necroptotic cell death
Authors: Sebastian Bittner, Gertrud Knoll, Martin Ehrenschwender
Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2016): 1–12

Helicobacter pylori protein JHP0290 exhibits proliferative and anti-apoptotic effects in gastric epithelial cells
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: PloS one (2015): e0124407

 

相关产品

产品名称 货号
Cell Meter 活细胞Caspase 3/7结合检测试剂盒 绿色荧光 Cat#20100

说明书
Cell Meter 活细胞Caspase 3/7结合检测试剂盒 红色荧光 .pdf

ApoSight 绿色胱天蛋白酶3/7底物 货号13290-AAT Bioquest荧光染料

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ApoSight 绿色胱天蛋白酶3/7底物

ApoSight 绿色胱天蛋白酶3/7底物

ApoSight 绿色胱天蛋白酶3/7底物    货号13290 货号 13290 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 100 Tests 价格 2472
Ex (nm) 500 Em (nm) 522
分子量 1290.61 溶剂 DMSO
产品详细介绍

简要概述

ApoSight 绿色半胱天冬酶3/7底物是第一个直接检测活细胞中半胱天冬酶活性的荧光探针。它由三个部分组成,包括a)荧光团,b)半胱天冬酶选择性肽片段(DEVD),以及c)细胞穿透部分。细胞穿透部分将探针带入活细胞。进入活细胞后,半胱天冬酶选择性肽片段被半胱天冬酶裂解以释放荧光团。恢复的荧光强度直接与要检测的胱天蛋白酶3/7的活性有关。与活细胞中现有的半胱天冬酶测定相比,ApoSight Green Caspase 3/7底物更加稳定,方便和准确。 ApoSight 绿色胱天蛋白酶3/7底物释放出Ex / Em〜490/520 nm的荧光团。如NucView试剂所报道的,它不需要DNA相互作用就能发荧光。如FMK肽探针所报道的,它不抑制胱天蛋白酶活性。尽管胱天蛋白酶的荧光FMK肽抑制剂被广泛用于检测活细胞中的胱天蛋白酶活性,但该技术有一些严重的局限性:a)FMK半胱天冬酶抑制剂具有很高的细胞毒性,因为FMK肽与活性胱天蛋白酶共价结合。 b)FMK肽与caspase的不可逆共价结合会抑制caspase活性,导致假阳性凋亡。 C) FMK分析具有极高的背景,并且需要大量洗涤,从而导致极低的通量。 d)FMK肽在水溶液中不稳定,必须立即使用。 ApoSight Green Caspase 3/7底物可以用96孔或384孔板进行实验,并易于适应自动化。

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适用仪器


流式细胞仪  
激发: 488nm激光
发射: 530/30nm滤波片
通道: FITC通道
荧光显微镜  
激发: FITC滤波片组
发射: FITC滤波片组
推荐孔板: 黑色透明

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.使用96孔板的密度为5×104至2×105细胞/ 100 µL /孔的待测化合物制备细胞
2.加入等体积的ApoSight Caspase 3/7底物工作溶液
3.在5%CO2培养箱中于37°C孵育60分钟
4.用HHBS洗涤细胞1-2次
5.使用带有530/30 nm滤波片(FITC通道)的流式细胞仪或带有FITC滤波片组的荧光显微镜分析细胞

 

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。

ApoSight Green Caspase 3/7底物储备液(200X)
在ApoSight 绿色胱天蛋白酶3/7底物瓶中加入50 µL DMSO,制成200X ApoSight 绿色胱天蛋白酶3/7底物原液。
注意,一次性使用等分试样,以避免重复的冻融循环。
 
2.工作溶液配置
ApoSight Green Caspase 3/7底物工作溶液
在ApoSight 绿色胱天蛋白酶3/7底物瓶中加入50 µL DMSO,制成200X ApoSight 绿色胱天蛋白酶3/7底物原液。
注意,一次性使用等分试样,以避免重复的冻融循环。

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样品示例及操作

悬浮培养中诱导细胞凋亡的实例

1.用2μg/ mL喜树碱处理Jurkat细胞3小时
2.用1μM星形孢菌素处理Jurkat细胞3-4小时
3.用4μg/ mL喜树碱处理HL-60细胞4小时
4.用1μM星形孢菌素处理HL-60细胞4小时。
注意,应对每个细胞系进行单独评估,以确定诱导凋亡的最佳细胞密度。

 

荧光显微镜的样品方案

1.用5×104至2×105个细胞/ 100 µL /孔/ 96孔板的密度制备含待测化合物的细胞。
2.向细胞中加入等体积的Caspase 3/7底物工作溶液(100 µL /孔/ 96孔板)。
3.在5%CO2培养箱中于37°C孵育60分钟。
4.用HHBS或您选择的缓冲液洗涤细胞1-2次。
5.使用FITC滤波片组的荧光显微镜成像。

 

流式细胞术的样品方案

1.以1:200的比例将200 X ApoSight Green Caspase 3/7底物原液添加到细胞溶液中,并在5%CO2培养箱中于37°C孵育细胞60分钟。
注意,用于ApoSight Green Caspase 3/7底物标记的细胞可浓缩至约5 X 106细胞/ mL。适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。
2.使用530/30 nm滤波片(FITC通道),通过流式细胞仪检测荧光强度。
注意,要增加信号/背景比,请以约200 g的速度旋转细胞5分钟,用1 mL洗涤缓冲液(例如HHBS或所选缓冲液)洗涤细胞,然后将细胞重悬至所需的洗涤量。

 

图示

ApoSight 绿色胱天蛋白酶3/7底物    货号13290

图1.使用ApoSight 绿色胱天蛋白酶3/7底物检测Jurkat细胞中胱天蛋白酶3/7活性。将Jurkat细胞(200,000个细胞/孔/ 96孔板)用1μM星形孢菌素或DMSO处理4小时。将细胞与Caspase 3/7底物工作溶液在37°C下孵育1小时。使用FITC滤波片组,用荧光显微镜拍摄图像。

 

参考文献

Cell culture conditions affect the ability of high content imaging assay to detect drug-induced changes in cellular parameters in human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes (hiPSC-CMs).
Authors: Balasubramanian, Bharathi and Belak, Vaclav and Verma, Isha and Prysiazhniuk, Yeva and Sannajust, Frederick and Trepakova, Elena S
Journal: Toxicology reports (2019): 305-320

In- and ex-vivo molecular imaging of apoptosis to assess sensitivity of non-small cell lung cancer to EGFR inhibitors using probe-based confocal laser endomicroscopy.
Authors: Guisier, Florian and Bohn, Pierre and Patout, Maxime and Piton, Nicolas and Farah, Insaf and Vera, Pierre and Thiberville, Luc and Salaün, Mathieu
Journal: PloS one (2017): e0180576

Polyphenols act synergistically with doxorubicin and etoposide in leukaemia cell lines.
Authors: Mahbub, A A and Le Maitre, C L and Haywood-Small, S L and Cross, N A and Jordan-Mahy, N
Journal: Cell death discovery (2015): 15043

Monitoring cleaved caspase-3 activity and apoptosis of immortalized oligodendroglial cells using live-cell imaging and cleaveable fluorogenic-dye substrates following potassium-induced membrane depolarization.
Authors: Smith, Graham S T and Voyer-Grant, Janine A M and Harauz, George
Journal: Journal of visualized experiments : JoVE (2012)

说明书
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