Amplite 荧光法L-丙氨酸检测试剂盒

	货号	13825	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	200 Tests	价格	3924
	Ex (nm)	571	Em (nm)	585
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法L-丙氨酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测丙氨酸的试剂盒，L-丙氨酸（L-Ala）作为重要蛋白质的构建块起着至关重要的作用。 L-丙氨酸主要由来自乳酸的肌肉细胞合成并通过肝脏吸收到血液中。 它被谷氨酸丙酮酸转氨酶转化为丙酮酸，进入代谢主流。 L-Ala对葡萄糖的产生和血糖管理至关重要，并在免疫系统和预防肾结石方面发挥重要作用。 L-丙氨酸的缺乏通常是营养不良，低蛋白饮食和压力的标志。 AAT Bioquest的Amplite 荧光L-丙氨酸测定试剂盒提供了一种灵敏的荧光测定方法，用于量化生物样品中的L-丙氨酸。 它利用一种酶偶合反应释放过氧化氢，Quest Fluor L-丙氨酸传感器在Ex / Em = 540/590 nm处使用荧光酶标仪进行检测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法L-丙氨酸检测试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备测试样品以及连续稀释的L-丙氨酸标准品（50 µL）
2.加入等体积的L-丙氨酸工作溶液（50 µL）
3.在37°C下孵育30分钟至1小时
4.监测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 Quest Fluor L-丙氨酸传感器储备溶液（200X）：
将55 µL DMSO（组分E）添加到Quest Fluor L-丙氨酸传感器（组分A）中，制成200X Quest Fluor L-丙氨酸传感器储备溶液。

1.2 L-丙氨酸标准溶液（1 mM）：
将10 µL 100 mM L-丙氨酸（组分D）加到990 µL PBS（pH 7.0）中，得到1 mM L-丙氨酸溶液。

2.标准溶液

L-丙氨酸标准
向900 µL PBS中加入100 µL 1 mM L-丙氨酸标准溶液，制成100 µM L-丙氨酸溶液（AS7）。进行1：2连续稀释以获得连续稀释的L-丙氨酸标准品（AS6-AS1）。

3.工作溶液

3.1 将5 mL测定缓冲液（组分C）加入一瓶酶混合1瓶（组分B1）中，并充分混合。

3.2 将100μLddH2O加入一个酶混合物2小瓶（组分B2）中并充分混合。

3.3 将整个小瓶（100μL）的Enzyme Mix 2和25 uL的200X L-丙氨酸传感器储备溶液转移到Enzyme Mix 1瓶中； 混合均匀。 注意：工作解决方案不稳定。 立即使用，避免直接暴露在光线下。

样品操作及实验分析

表1.黑色96孔微孔板中L-丙氨酸标准品和测试样品的布局。 AS = L-丙氨酸标准品（AS1-AS7，1.5至100 µM）； BL =空白对照； TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和表2提供的布局，准备L-丙氨酸标准品（AS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.将50 µL L-丙氨酸工作溶液添加到L-Alanine标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，以使L-Alanine测定的总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，将25 µL L-丙氨酸工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。 注意：在pH 6.5至7.0下运行L-丙氨酸测定。

3.将反应混合物在37°C孵育30分钟至1小时。

4.使用荧光板读数器在Ex / Em = 540/590 nm（截止：570 nm）下监测荧光的增加。

参考文献

Reactivity of beta-methylamino-L-alanine in complex sample matrixes complicating detection and quantification by mass spectrometry
Authors: Glover WB, Liberto CM, McNeil WS, Banack SA, Shipley PR, Murch SJ.
Journal: Anal Chem (2012): 7946

Synthesis and characterization of silver/alanine nanocomposites for radiation detection in medical applications: the influence of particle size on the detection properties
Authors: Guidelli EJ, Ramos AP, Zaniquelli ME, Nicolucci P, Baffa O.
Journal: Nanoscale (2012): 2884

Detection of farnesyltransferase interface hot spots through computational alanine scanning mutagenesis
Authors: Perez MA, Sousa SF, Oliveira EF, Fernandes PA, Ramos MJ.
Journal: J Phys Chem B (2011): 15339

Molecular beacon based bioassay for highly sensitive and selective detection of nicotinamide adenine dinucleotide and the activity of alanine aminotransferase
Authors: Tang Z, Liu P, Ma C, Yang X, Wang K, Tan W, Lv X.
Journal: Anal Chem (2011): 2505

Highly specific substrates of proteinase 3 containing 3-(2-benzoxazol-5-yl)-l-alanine and their application for detection of this enzyme in human serum
Authors: Wysocka M, Lesner A, Guzow K, Kulczycka J, Legowska A, Wiczk W, Rolka K.
Journal: Anal Chem (2010): 3883

In-capillary derivatization and stacking electrophoretic analysis of gamma-aminobutyric acid and alanine in tea samples to redeem the detection after dilution to decrease matrix interference
Authors: Su YS, Lin YP, Cheng FC, Jen JF.
Journal: J Agric Food Chem (2010): 120

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Authors: Schwimmer JB, Dunn W, Norman GJ, Pardee PE, Middleton MS, Kerkar N, Sirlin CB.
Journal: Gastroenterology (2010): 1357

[Rapid detection of alanine aminotransferase with near-infrared spectroscopy]
Authors: Huang FR, Zhang J, Luo YH, Li SP, Zheng SF, Chen XD.
Journal: Guang Pu Xue Yu Guang Pu Fen Xi (2010): 2620

An electrochemical biosensor array for rapid detection of alanine aminotransferase and aspartate aminotransferase
Authors: Song MJ, Yun DH, Hong SI.
Journal: Biosci Biotechnol Biochem (2009): 474

Detection of the mitochondrial and catalytically active alanine aminotransferase in human tissues and plasma
Authors: Glinghammar B, Rafter I, Lindstrom AK, Hedberg JJ, Andersson HB, Lindblom P, Berg AL, Cotgreave I.
Journal: Int J Mol Med (2009): 621

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	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Amplite 比色法丙氨酸转氨酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测转氨酶的试剂盒，丙氨酸氨基转移酶（ALT），也称为血清谷氨酸丙酮酸转氨酶（GPT），是转移酶家族的成员。 它催化丙氨酸和谷氨酸之间α-氨基的可逆转移，是氨基酸代谢中的重要酶。 ALT主要存在于肝脏中，少量存在于心脏，肌肉和肾脏中。 在健康受试者中，血清ALT水平低。 然而，当细胞受损时，例如急性和慢性肝炎，阻塞性黄疸，肝癌，心肌梗塞，ALT可能会渗入血流并且ALT水平显着升高。 因此，测定血清ALT水平具有重要的临床和诊断意义。

Amplite 比色法丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒为各种生物样品中的ALT测量提供了一种快速而灵敏的方法。 ALT催化丙氨酸和α-酮戊二酸与丙酮酸和谷氨酸的反应：

丙氨酸（Ala）+α-酮戊二酸＝丙酮酸+谷氨酸（Glu）

通过酶偶联反应循环产生蓝色产物来测量产物谷氨酸。 可以通过吸光度酶标仪在~575nm处读取信号，或者通过A570nm至A610nm的吸光度比率来读取信号以提高测定灵敏度。 使用Amplite 比色法丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒，在100μL反应体积中检测到少至10 mU / mL的ALT。 该测定是稳健的，并且可以容易地适用于各种各样的应用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 比色法丙氨酸转氨酶检测试剂盒。

产品说明书

96孔板测定示例

概述

准备ALT反应混合物（50μL）

加入ALT标准品或测试样品（50μL）

孵育于37°C 30分钟至60分钟

监测吸光度在575±5 nm处增加或在A570nm / A610nm处的吸光度比率

注意：在开始实验之前，在室温下解冻一个组分A和B

操作方法

1.准备ALT标准品的连续稀释液（1至1000 mU / mL）：

1.1将100μLDPBS加入ALT阳性对照（组分D）小瓶中，制成100U / mL ALT储备液。

注意：未使用的ALT原液应分成单次使用的等分试样并储存在20℃。

1.2将10μL的100 U / mL ALT标准溶液（来自步骤1.1）加入含有0.1％BSA的990L DPBS缓冲液中，以产生1U / mL ALT标准溶液。

1.3取300μL1U/ mL ALT标准溶液进行1：3连续稀释，得到300,100,30,10,3,1和0 mU / mL ALT标准品系列稀释液。

1.4如说明书中的表1和2中所述，将ALT标准品和含有ALT的测试样品的系列稀释液加入白色/透明底96孔微孔板中。

注意：如果需要，将测试样品稀释至含有0.1％BSA的DPBS缓冲液中的浓度范围。

2.准备ALT测定混合物：

2.1将100μLDdH2O加入到NAD小瓶（组分C）中，得到100X NAD溶液。

2.2将10 mL ALT分析缓冲液（组分B）加入ALT酶混合物瓶中（组分A），并充分混合。

2.3将整瓶100X NAD溶液（来自步骤2.1）加入ALT酶混合物溶液（来自步骤2.2）以得到ALT测定混合物。

注意1：该ALT测定混合物足以用于两个96孔板。在室温下不稳定，应在2小时内及时使用，避免暴露在光线下。

注意2：或者，可以通过向组分A的瓶中加入200μLH2O制备50X的ALT酶混合物原液，然后通过将原液与测定缓冲液（组分B）和100x NAD混合制备ALT测定混合物。 按比例解决。 将未使用的50X ALT酶混合物原液和100X NAD溶液分装并储存在-20℃，避免冻融循环。

3.运行ALT测定：

3.1将50μLALT测定混合物（来自步骤2.3）添加至ALT标准品，空白对照和测试样品（参见步骤1.4）的每个孔中，以使总ALT测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLALT测定混合物。

3.2在37°C下孵育反应30分钟至60分钟，避光。

注意：空白控制的背景随着时间的推移而增加。

3.3使用吸光度读数器在575±5 nm或吸光度比率A570nm / A610nm监测吸光度增加，以提高检测灵敏度。

参考文献

Spermidine confers liver protection by enhancing NRF 2 signaling through a MAP 1S-mediated non-canonical mechanism
Authors: Pengfei Liu, Montserrat Rojo de la Vega, Matthew Dodson, Fei Yue, Boyun Shi, Deyu Fang, Eli Chapman, Leyuan Liu, Donna D Zhang
Journal: Hepatology (2019)

A mouse model study of toxicity and biodistribution of a replication defective adenovirus serotype 5 virus with its genome engineered to contain a decoy hyper binding site to sequester and suppress oncogenic HMGA1 as a new cancer treatment therapy
Authors: Faizule Hassan, Sarah L Lossie, Ellen P Kasik, Audrey M Channon, Shuisong Ni, Michael A Kennedy
Journal: PloS one (2018): e0192882

Reparative effects of astaxanthin-hyaluronan nanoaggregates against retrorsine-CCl4-induced liver fibrosis and necrosis
Authors: Yi Jhen Wu, Yu Chiuan Wu, I-Fen Chen, Yi-Lung Wu, Chin Wen Chuang, Han Hsiang Huang, Shyh Ming Kuo
Journal: Molecules (2018): 726

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Authors: Kazuaki Taguchi, Hongxu Lu, Yanyan Jiang, Tzong-Tyng Hung, Martina Heide Stenzel
Journal: Journal of Materials Chemistry B (2018)

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	货号	13802	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	200 Tests	价格	3924
	Ex (nm)	571	Em (nm)	585
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法丙氨酸转氨酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测丙氨酸的试剂盒，丙氨酸氨基转移酶（ALT），也称为血清谷氨酸丙酮酸转氨酶（GPT），是转移酶家族的成员。它催化丙氨酸和谷氨酸之间α-氨基的可逆转移，是氨基酸代谢中的重要酶。 ALT主要存在于肝脏中，少量存在于心脏，肌肉和肾脏中。在健康受试者中，血清ALT水平低。然而，当细胞受损时，例如急性和慢性肝炎，阻塞性黄疸，肝癌，心肌梗塞，ALT可能会渗入血流并且ALT水平显着升高。因此，测定血清ALT水平具有重要的临床和诊断意义。 Amplite 荧光丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒为各种生物样品中的ALT测量提供了一种快速而灵敏的方法。 ALT催化丙氨酸和α-酮戊二酸与丙酮酸和谷氨酸的反应。通过酶偶联反应循环产生红色荧光产物来测量产物谷氨酸。可以通过荧光酶标仪在Ex / Em = 530-570nm / 590-600nm（最佳Ex / Em = 540nm / 590nm）下读取信号。使用Amplite 荧光丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒，在100μL反应体积中检测到低至4 mU / mL的ALT。该测定是稳健的，并且可以容易地适用于各种各样的应用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法丙氨酸转氨酶检测试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备ALT工作溶液（50 µL）
2.加入ALT标准液或测试样品（50 µL）
3.在37°C下孵育30分钟至60分钟
4.监测Ex / Em = 540/590 nm时的荧光增加

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 ALT标准溶液：
将100 µL DPBS加到ALT阳性对照（成分D）的小瓶中，制成100 U / mL ALT储备液。

2.标准溶液

ALT标准
将10 µL 100 U / mL ALT标准溶液加到含0.1％BSA的990 µL DPBS缓冲液中，以生成1000 mU / mL ALT标准溶液（ALT7）。 取1000 mU / mL ALT标准溶液并进行1：3连续稀释，以得到ALT标准品（ALT6-ALT1）的连续稀释液。

3.工作溶液

3.1 NAD解决方案（100X）：
将100 µL ddH2O加入NAD小瓶（组分C）。

3.2 ALT酶混合物溶液：
将10 mL ALT分析缓冲液（组分B）添加到ALT酶混合物（组分A）瓶中，并充分混合。

3.3 ALT工作溶液：
将整个小瓶100X NAD溶液（从1）添加到ALT酶混合物溶液（从2）中，以得到ALT工作溶液。

注意：此ALT工作溶液足以容纳两个96孔板。 它在室温下不稳定，应在2小时内及时使用，并避免暴露在光线下。或者，可以通过将200μLH₂O加入组分A的瓶子中制成50倍的ALT酶混合物储备溶液，然后通过将储备溶液与测定缓冲液（组分B）和100x NAD溶液按比例混合来制备ALT工作溶液。

样品操作及实验分析

表1.黑色96孔微孔板中的ALT标准品和测试样品的布局。 ALT = ALT标准（ALT1-ALT7，1至1000 mU / mL）; BL =空白对照； TS =测试样品。

表2.黑色96孔微孔板中ALT标准品和测试样品的布局

1.根据表1和表2提供的布局，将ALT标准品（ALT），空白对照（BL）和测试样品（TS）制成黑色96孔微孔板。对于384孔板，请使用25 µL 每孔试剂，而不是50 µL。 注意：如果需要，在含0.1％BSA的DPBS缓冲液中将测试样品稀释至合适的浓度范围（按ALT标准指示）。

2.在ALT标准液，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL ALT工作溶液，以使ALT总测定体积为100 µL /孔。 对于384孔微孔板，向每孔中加入25 µL ALT工作溶液，总体积为50 µL /孔。

3.避光保存，在37°C下孵育反应30分钟至60分钟。 注意：空白控件的背景将随着时间而增加。

4.使用荧光板读数器在激发= 530-570 nm，发射= 590-600 nm（最佳Ex / Em = 540/590 nm，在570 nm截止）下监测荧光的增加。

参考文献

Coexistence of non-alcoholic fatty liver disease with elevated alanine aminotransferase is associated with insulin resistance in young Han males
Authors: Wang R, Lu Q, Feng J, Yin F, Qin C, Liu B, Liu Y, Liu X.
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Authors: Tapper EB, Cohen EB, Patel K, Bacon B, Gordon S, Lawitz E, Nelson D, Nasser IA, Challies T, Afdhal N.
Journal: Clin Gastroenterol Hepatol. (2012)

Pegylated interferon alpha-2b plus ribavirin for Japanese chronic hepatitis C patients with normal alanine aminotransferase
Authors: Kainuma M, Furusyo N, Azuma K, Kajiwara E, Takahashi K, Nomura H, Tanabe Y, Satoh T, Maruyama T, Nakamuta M, Kotoh K, Shimoda S, Hayashi J.
Journal: Hepatol Res (2012): 33

Association of serum alanine aminotransferase and gamma-glutamyltransferase levels within the reference range with metabolic syndrome and nonalcoholic fatty liver disease
Authors: Oh HJ, Kim TH, Sohn YW, Kim YS, Oh YR, Cho EY, Shim SY, Shin SR, Han AL, Yoon SJ, Kim HC.
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Changes in serum levels of HBV DNA and alanine aminotransferase determine risk for hepatocellular carcinoma
Authors: Chen CF, Lee WC, Yang HI, Chang HC, Jen CL, Iloeje UH, Su J, Hsiao CK, Wang LY, You SL, Lu SN, Chen CJ.
Journal: Gastroenterology (2011): 1240

Ferritin/alanine aminotransferase ratio as a possible marker for predicting the prognosis of acute liver injury
Authors: Ozawa E, Abiru S, Nagaoka S, Yano K, Komori A, Migita K, Yatsuhashi H, Taura N, Ichikawa T, Ishibashi H, Nakao K.
Journal: J Gastroenterol Hepatol (2011): 1326

Gender differences in healthy ranges for serum alanine aminotransferase levels in adolescence
Authors: Poustchi H, George J, Esmaili S, Esna-Ashari F, Ardalan G, Sepanlou SG, Alavian SM.
Journal: PLoS One (2011): e21178

Non-alcoholic fatty liver disease’s prevalence and impact on alanine aminotransferase associated with metabolic syndrome in the Chinese
Authors: Hou XH, Zhu YX, Lu HJ, Chen HF, Li Q, Jiang S, Xiang KS, Jia WP.
Journal: J Gastroenterol Hepatol (2011): 722

Nonalcoholic fatty liver disease is associated with blood pressure in hypertensive and nonhypertensive individuals from the general population with normal levels of alanine aminotransferase
Authors: Lopez-Suarez A, Guerrero JM, Elvira-Gonzalez J, Beltran-Robles M, Canas-Hormigo F, Bascunana-Quirell A.
Journal: Eur J Gastroenterol Hepatol (2011): 1011

Relationship of hepatic steatosis and alanine aminotransferase with coronary calcification
Authors: Targher G.
Journal: Clin Chem Lab Med (2011): 741

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