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品牌：Wako
CAS No.：9011-18-1 储存条件：室温 纯度：– |
| 产品编号
(生产商编号) |
等级 | 规格 | 运输包装 | 零售价(RMB) | 库存情况 | 参考值 |
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191-08365 |
for Biochemistry | 500 g | – | 咨询 | – | – |
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货号 | 15259 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 400 Tests | 价格 | 3924 | |
| Ex (nm) | 571 | Em (nm) | 585 | |
| 分子量 | 溶剂 | |||
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
Amplite NADP+/NADPH检测试剂盒（荧光法） 红色荧光是AAT Bioquest研发的检测NADP+/NADPH的试剂盒，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD +）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP +）是细胞中发现的两种重要的辅因子。NADH是NAD +的还原形式，NAD +是NADH的氧化形式。 NAD形成NADP，通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的2’位置。NADP用于合成代谢生物反应，例如脂肪酸和核酸合成，其需要NADPH作为还原剂。在叶绿体中，NADP是在光合作用的初步反应中重要的氧化剂。通过光合作用产生的NADPH用作卡尔文光合作用循环中生物合成反应的还原能力。
现有的NADP / NADPH测定通过吸收在UV范围内进行。该测定具有低灵敏度和高干扰。这种Amplite™荧光总NADP和NADPH检测试剂盒为敏感检测NADP和NADPH提供了一种便捷的方法。系统中的酶特异性识别酶循环反应中的NADP / NADPH，其显着提高了检测灵敏度。此外，该测定具有非常低的背景，因为其在红色可见范围内运行，这显著降低了生物样品的干扰。无需从样品混合物中纯化NADP / NADPH。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite NADP+/NADPH检测试剂盒。
Amplite™荧光总NADP和NADPH分析试剂盒提供灵敏的一步法分析，可在100μL分析体积（10 nM;图1）中检测少至1皮摩尔的NADP（H）。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化。 其信号可通过Ex / Em = 540/590 nm的荧光酶标仪或~576 nm的吸光度酶标仪轻松读取。红色发射时间越长，生物样品的自发荧光干扰越小。
适用仪器
| 光吸收酶标仪 | |
| 吸收： | 576 ± 5 nm |
| 推荐孔板： | 透明底板 |
产品说明书
96孔板测定示例
概述
准备NADP / NADPH反应混合物（50μL）
加入NADPH标准品或测试样品（50μL）
在室温下孵育15分钟–2小时
监测Ex / Em = 540 / 590nm处的荧光强度
注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分中的一个。
操作方法
1.准备NADPH原液：
将200μLPBS缓冲液加入到NADPH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol / L）NADPH储备溶液。
注意：未使用的NADPH原液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。
2.制备NADP / NADPH反应混合物：
将10mL NADP / NADPH传感器缓冲液（组分B）加入NADP / NADPH再循环酶混合物（组分A）的瓶中，并充分混合。
注意：这种NADP / NADPH反应混合物足以用于两个96孔板。 未使用的NADP / NADPH反应混合物应分成一次性等分试样并储存在-20℃。
3.准备NADPH标准品的连续稀释液（0至10μM）：
3.1将10μLNADPH储备溶液（来自步骤1）加入990L PBS缓冲液中以产生10M（10pmol / L）NADPH标准溶液。
注意：稀释的NADPH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。
3.2取200μL10μMNADPH标准溶液进行1：3连续稀释，得到NADPH标准品的3,1,0.3,0.1,0.03,0.01,0.003和0μM连续稀释液。
3.3如表1和2中所述，将含有NADPH标准品和含NADP / NADPH的测试样品的系列稀释液加入到固体黑色96孔微量培养板中。
注意：根据需要准备细胞或组织样本。
表1.实心黑色96孔微孔板中NADPH标准品和测试样品的布局
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BL |
BL |
TS |
TS |
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NS1 |
NS1 |
…. |
…. |
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NS2 |
NS2 |
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NS3 |
NS3 |
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NS4 |
NS4 |
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NS5 |
NS5 |
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NS6 |
NS6 |
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NS7 |
NS7 |
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注意：NS = NADPH标准，BL =空白对照，TS =测试样品。
表2.每个孔的试剂组成
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NADPH Standard |
Blank Control |
Test Sample |
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Serial Dilutions*: 50 μL |
PBS: 50 μL |
50 μL |
注意：将连续稀释的NADPH标准品从0.003μM至3μM加入NS1至NS7的孔中，一式两份。 高浓度的NADPH（例如，>100μM，最终浓度）可能由于NADPH传感器（对非荧光产物）的过度氧化而导致荧光信号降低。
4.在上清液中运行NADP / NADPH测定：
4.1将50μLNADPH反应混合物（来自步骤2）加入NADPH标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3.3），使总NADPH测定体积为100μL/孔
注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLNADPH反应混合物。
4.2在室温下孵育反应15分钟至2小时，避光。
4.3在Ex / Em = 530-570 / 590-600nm（最佳540 / 590nm）下用荧光板读数器监测荧光增加。
注意1：也可将板的内容物转移到白色透明底板上，用吸光度酶标仪在576±5nm波长下读数。与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。
注意2：对于NADP / NADPH比率测量，建议使用Cat#15264。
注意3：对于基于细胞的NADP / NADPH测量，建议使用ReadiUse™哺乳动物细胞裂解缓冲液* 5X *（Cat#20012）裂解细胞。
数据分析
空白孔中的荧光（仅用PBS缓冲液）用作对照，并从NADPH反应孔的值中减去。 NADPH标准曲线如图1所示。
注意：荧光背景随时间增加，因此减去每个数据点的空白孔的荧光强度值是很重要的。
图1.使用NOVOStar酶标仪（BMG Labtech），在黑色96孔板中用Amplite™荧光总NADP和NADPH测定试剂盒测量NADPH剂量反应。在孵育30分钟（n = 3）时可以检测到低至10nM（1pmol /孔）的NADPH，而NADH没有响应。
参考文献
Cancer-specific chemotherapeutic strategy based on the vitamin K3 mediated ROS regenerative feedback and visualized drug release in vivo
Authors: Gang-Gang Yang, Hang Zhang, Dong-Yang Zhang, Qian Cao, Jing Yang, Liang-Nian Ji, Zong-Wan Mao
Journal: Biomaterials (2018)
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Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff
Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705
Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway
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Journal: Biochemistry (2017)
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Authors: Gang Luo, Bingqing Huang, Xiang Qiu, Lin Xiao, Ning Wang, Qin Gao, Wei Yang, Liping Hao
Journal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)
A Snapshot of the Plant Glycated Proteome STRUCTURAL, FUNCTIONAL, AND MECHANISTIC ASPECTS
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Journal: Journal of Biological Chemistry (2016): 7621–7636
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Journal: Aging cell (2016): 416–427
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货号 | 2294 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 1 mg | 价格 | 1272 | |
| Ex (nm) | 682 | Em (nm) | 701 | |
| 分子量 | 1317.7 | 溶剂 | DMSO | |
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
Tide Fluor 6WS（TF6）系列具有与Cy5.5，IRDye 700和Alexa Fluor 680相似的光谱特性。它们的荧光在pH值为3到11时不受pH值的影响。这些特性使这种新染料家族对pH值更稳定更敏感。 在某些情况下，用TF6标记的肽和核苷酸比用Cy5.5，IRDye 700和Alexa Fluor 680标记的肽和核苷酸表现出更强的荧光和更高的光稳定性。与我们的Tide Quencher™6WS（TQ6WS）配对，可以使用多种FRET肽和核苷酸 可开发用于检测蛋白酶和分子信标的方法，具有更高的灵敏度和稳定性。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Tide Fluor 6WS琥珀酰亚胺酯 Cy5.5的卓越代替品。
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产品说明书
用Tide Fluor 染料标记氨基修饰的寡核苷酸
以下方案已经过优化，可用于标记200μg（~6 A260 nm单位）的专有寡核苷酸。 您需要根据您的实验调整相应的实验步骤以达到实验的最佳效果。 您的氨基改性OLIGO必须进行处理以去除快速反应并消耗染料SUCCINIMIDYL酯的氨。
1.准备Oligo溶液
1.1将氨基修饰的oligo（~200μg）溶解在四硼酸盐缓冲液（100μL，pH 8.5±0.5）中。
注1：寡核苷酸必须在5’末端用胺基合成。 参见Appenxidx 1纯化氨基修饰的寡核苷酸。
注2：避免使用含有伯胺的缓冲液，如Tris，因为它们与胺反应性化合物竞争结合。
2.准备染料溶液
2.1通过上下吸移将1mg染料SE溶解在100μLDMSO中（如果可能，> 10mg / mL）。 将小瓶侧面的溶液原液离心至小瓶底部。
注意：在开始缀合之前准备DMSO染料溶液。 染料溶液的长期储存可降低染料活性。 任何含有染料的溶液都应避光。 我们不建议您存储DMSO染料溶液以备将来使用。
3.运行共轭反应
3.1在搅拌或摇动（保持反应混合物避光）的同时向染料溶液（B，20-50μL）中加入寡聚物溶液（A，100μL）。
3.2在室温下在旋转器或振荡器上旋转或摇动反应混合物4-6小时。
注意：在第一个小时内每10分钟轻轻涡旋一下小瓶，以确保反应溶液保持充分混合。 不要剧烈混合，因为材料可能留在小瓶的两侧。 六小时后，应标记50-90％的胺修饰的寡核苷酸分子。 如果更方便的话，反应可以孵育过夜。 然而，在大多数情况下，过夜孵育不会导致更高的标记效率。
4.纯化染料 – 寡糖结合物
4.1通过乙醇沉淀标记的寡核苷酸进行初步纯化
4.1.1将20μL（一般十分之一反应溶液体积）的3M NaCl和300μL冷无水乙醇（通常为两个半反应溶液体积）加入反应小瓶中。
4.1.2充分混合溶液并将其置于-20℃下30分钟。
4.1.3将该溶液在微量离心机中以10,000至15,000×g离心30分钟。
注意：如果离心时间不够长，可能会导致样品丢失。
4.1.4小心取出上清液，用冷的70％乙醇冲洗沉淀1-3次并短暂干燥。
注意：一些未反应的标记试剂可能在反应过程中沉淀或可能粘在反应瓶的壁上。在离心之前，通过大量涡旋混合将该材料完全再溶解。重新溶解标记试剂可确保沉淀的寡核苷酸最少被未反应的标记物污染。
4.2通过HPLC或凝胶电泳进行最终纯化
使用Tide Fluor 染料标记肽
以下方案已经过优化，用于标记10 mg仅含有一个游离氨基的专利肽（MW~2000）。您需要根据您的实验，调整相应的步骤以达到最佳的实验效果。
1.制备肽溶液（溶液A）
1.1将肽（~10 mg）溶解在DMF（~1 ml）中。
注1：肽必须用碱如三乙胺或碳酸钾中和。
注2：避免使用含有伯胺的缓冲液，如Tris，因为它们与胺反应性化合物竞争结合。
2.准备染料溶液（溶液B）
2.1通过上下吸移将5mg染料SE溶解在500μLDMF中（如果可能，> 10mg / mL）。
注意：在开始缀合之前准备DMF染料溶液。染料溶液的长期储存可降低染料活性。任何含有染料的溶液都应避光。我们不建议您存储DMF染料溶液以备将来使用。
3.运行共轭反应
3.1向染料溶液（B，500μL）中加入肽溶液（A，1mL），搅拌或摇动（保持反应混合物不发光）。
3.2在室温下搅拌反应混合物4-6小时。
4.纯化染料 – 肽缀合物
4.1浓缩反应溶液并在C18柱上纯化，得到所需的缀合物。通过HPLC分析级分，合并> 97％纯度的级分并冻干。
注1：HPLC纯化条件：TEAB缓冲液（三乙基碳酸氢铵，0.25mmol，pH = 7.0-8.0）用作缓冲液A，乙腈用作缓冲液B. HPLC在60分钟内从0％B至30％B进行（流速：100毫升/分钟）。
注2：操作过程中避免强光。
参考文献
Inhibiting fibronectin polymerization alleviates kidney injury due to ischemia/reperfusion
Authors: Stephanie LK Bowers, Stephanie Davis-Rodriguez, Zachary M Thomas, Valeriia Rudomanova, W Clark Bacon, Alex Beiersdorfer, Qing Ma, Prasad Devarajan, Burns C Blaxall
Journal: American Journal of Physiology-Renal Physiology (2019)
A mechanistic model to predict effects of cathepsin B and cystatin C on β-amyloid aggregation and degradation
Authors: Tyler J Perlenfein, Regina M Murphy
Journal: Journal of Biological Chemistry (2017): jbc–M117
Real-Time Detection of a Self-Replicating RNA Enzyme
Authors: Charles Olea, Gerald F Joyce
Journal: Molecules (2016): 1310
Development of a universal RNA beacon for exogenous gene detection
Authors: Yuanjian Guo, Zhongju Lu, Ira Stephen Cohen, Suzanne Scarlata
Journal: Stem cells translational medicine (2015): 476–482
Development of Multi-Parametric/Multimodal Spectroscopy Apparatus for Characterization of Functional Interfaces
Authors: Lang Zhou, Mary Arugula, Christopher J Easley, Curtis Shannon, Aleksandr Simonian
Journal: ECS Transactions (2015): 9–16
Maternal serum glycosylated fibronectin as a point-of-care biomarker for assessment of preeclampsia
Authors: Juha Rasanen, Matthew J Quinn, Amber Laurie, Eric Bean, Charles T Roberts, Srinivasa R Nagalla, Michael G Gravett
Journal: American journal of obstetrics and gynecology (2015): 82–e1
Array of biodegradable microrafts for isolation and implantation of living, adherent cells
Authors: Yuli Wang, Colleen N Phillips, Gabriela S Herrera, Christopher E Sims, Jen Jen Yeh, Nancy L Allbritton
Journal: RSC advances (2013): 9264–9272
Development of SNAP-Tag Fluorogenic Probes for Wash-Free Fluorescence Imaging
Authors: Xiaoli Sun, Aihua Zhang, Brenda Baker, Luo Sun, Angela Howard, John Buswell, Damien Maurel, Anastasiya Masharina, Kai Johnsson, Christopher J Noren
Journal: ChemBioChem (2011): 2217–2226
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Journal: Unknown
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货号 | 16995 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 1 mg | 价格 | 1944 | |
| Ex (nm) | 640 | Em (nm) | 654 | |
| 分子量 | ~52000 | 溶剂 | Water | |
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
产品基本信息
货号：16995
产品名称：链霉亲和素偶联物 iFluor 633-标记
规格：1mg
储存条件：-15℃避光防潮
保质期：12个月
产品物理化学光谱特性
分子量：N/A
溶剂：水
激发波长(nm)：638
发射波长(nm)：652
产品介绍
链霉亲和素偶联物 iFluor 633-标记是美国AAT Bioquest生产的链霉亲和素，AAT 生物科技公司的 iFluor 染料在标记蛋白尤其是标记抗体是最佳的。这些染料是非常明亮的并且耐光性好，在标记蛋白质时具有最小的荧光淬灭。他们可以很好的被现有的主要的激光荧光激发仪器(如350、405、488、555和633nm)激发。链霉亲和素轭合物是与生物素共轭广泛应用于特殊检测的多种蛋白质,蛋白质片段、核酸a和其他来自链霉亲和素的分子，与生物素具有很高的亲和力。众多的供应商提供各种各样的互补性生物素衍生物试剂。这一iFluor 633 -链霉亲和素是由包括链霉亲和素(如生物素结合的蛋白)和iFluor 633(如荧光标签)通过共价链接生成。用于与生物素结合的抗体时它常用作第二步间接免疫荧光染色试剂。iFluor 633山羊抗-老鼠免疫球蛋白（ (H+L)轭合物 的荧光激发波长和发射波长分别是 638nm 和 ~655 nm。这些卓越的性能使这一类最新探针家族成为 Alexa Fluor® 633山羊抗-老鼠免疫球蛋白（ (H+L)轭合物（Alexa Fluor®是Invitrogee的产品)一个非常优秀的标记探针替代品。它是以生物素莲亲和素无基础的生物测定和实验的一个非常有价值的工具。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的链霉亲和素偶联物 iFluor 633-标记。
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参考文献
Overexpression of MACC1 and the association with hepatocyte growth factor/c-Met in epithelial ovarian cancer
Authors: Hongyu Li, Hui Zhang, Shujun Zhao, Yun Shi, Junge Yao, Yanyan Zhang, Huanhuan Guo, Xingsuo Liu
Journal: Oncology letters (2015): 1989–1996
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| 链霉亲和素 HRP-标记 | Cat#16920 |
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| 链霉亲和素偶联物 trFluor Eu-标记 | Cat#16925 |
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品牌：Enzo
CAS No.：26048-05-5 储存条件：-20℃ 纯度：– |
| 产品编号
(生产商编号) |
等级 | 规格 | 运输包装 | 零售价(RMB) | 库存情况 | 参考值 |
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ALX-380-315-M001 |
– | 1 mg | – |
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– | – |
* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用
* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动，恕不另行通知，确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司客服。
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