Mabtech的经过仔细验证的ELISAPRO试剂盒提供了所有必需的试剂，以方便，可靠，特异的方式方便地定量测定血清，血浆和细胞培养上清液中的分析物。

ELISAPRO试剂盒随附有预先涂有单克隆抗体（mAb）。样品中的分析物被包被的mAb捕获，并被生物素化的检测mAb和链霉亲和素-HRP（SA-HRP）检测。注：TMB底物的添加将导致底物出现颜色。用硫酸终止反应，并且可以使用ELISA板读数器定量光密度。通过与平行分析的ELISA标准品的系列稀释液比较来确定分析物的浓度。

ELISAPRO试剂盒包括Apo ELISA缓冲液，一种可防止假阳性信号的缓冲液。缓冲液可阻止嗜异性抗体交联测定抗体。嗜异性抗体通常存在于人血清/血浆中，也可以存在于其他物种中。缓冲液已使用来自健康人类献血者的血清/血浆样品进行了验证。

1. 酶标仪可在450 nm读取
2. ELISA平板清洗器；自动或手动（例如，多移液管或喷射瓶）•精密移液管，吸头和量筒
3. 用于标准和样品稀释的试管
4. 蒸馏水或去离子水 

Stop溶液0.18 M H2SO4（<1％）对眼睛和皮肤有刺激性，应小心处理。由于不知道暴露的影响，因此应仔细处理该标准。溶液中的缓冲液和试剂含有防腐剂Kathon CG（0.002％），这是一种潜在的过敏原，可能通过皮肤接触引起过敏。人和动物样品应被视为潜在危险的生物材料。所有材料应按照当地法规进行处理。有关更多信息，请查阅我们网站上的《安全数据表》。

在开始测定之前，让板和测定试剂达到室温（TMB底物除外，最好使用冷底物）。
计划板布局，使其一式两份，包括标准曲线，样品和测定背景对照。每孔的体积不应超过100μl。

样品实验方案

储备溶液配制

将50 ml洗涤缓冲液浓缩液添加到950 ml蒸馏水或去离子水中（足以完成1个板的所有洗涤步骤）。如果在20倍浓缩物中形成了晶体，则将其升至室温并轻轻混合以溶解。

用蒸馏水或去离子水将Apo ELISA缓冲液浓缩液稀释5倍，以制备所需体积的Apo ELISA缓冲液。对于每个板，将30 ml Apo ELISA缓冲液浓缩液添加到120 ml水中。

所有样品均应在Apo ELISA缓冲液中稀释至少2倍。除去可见的沉淀物并在聚丙烯管/板中稀释，应在样品之前添加缓冲液。高度溶血和高血脂的样品可能会导致定量结果不准确。含有超出分析标准范围的高水平分析物的样品将需要进一步稀释。避免重复冻融循环，将样品储存在-20°C和更高的温度下会产生假高水平。

根据对空腹健康受试者的反复分析，我们建议稀释系数为200,000X。精确的移液非常重要，在稀释步骤之间更换吸头，并使用新鲜制成的稀释液。指示的数量足以重复。

通过添加1 ml标准重构缓冲液将ELISA标准液重构为4μg/ ml的储液，请勿搅拌。让标准液溶解15分钟，然后涡旋3秒。标准液应等份保存在-20°C下。避免重复冻融循环。

如图所示，稀释标准储备溶液以创建标准曲线。指示的数量足以重复。最后一个样品瓶用作测定背景对照，即应省略标准液。在使用30分钟内准备标准曲线。

操作步骤

1. 用洗涤缓冲液（300μl/孔）洗涤板5次。最后一次洗涤后，将其倒置并用吸水纸吸水。然后立即进行下一步。
2. 添加样品（至少稀释2倍），标准液和测定背景对照（100μl/孔）。用粘性板盖覆盖板，并在室温下孵育2小时。
3. 如上所述清洗板。
4. 添加检测抗体（100微升/孔），盖好板并在室温下孵育1小时。
5. 如上所述清洗板。
6. 加入抗生蛋白链菌素-HRP（100μl/孔），盖好板并在室温下孵育1小时。
7. 如上所述清洗板。
8. 添加TMB底物（100微升/孔），在避开直射光的室温下孵育15分钟。
9. 向所有孔（100μl/孔）中添加Stop溶液以停止颜色显影。
10. 在15分钟内测量450 nm处的吸光度。