荧光探针 Fluoro-Jade B （停产）

简要概述

荧光探针 Fluoro-Jade B 是美国AAT Bioquest生产的荧光探针，Fluoro-Jade®B是一种聚阴离子荧光素衍生物，可灵敏地特异性结合退化神经元。它具有绿色荧光，激发峰在480nm处，发射峰在525nm处。用于可视化Fluoro-Jade B的过滤器是FITC滤波片。Fluoro-Jade B可用于大多数组织切片类型和厚度，包括冷冻，振动低温恒温器或3-50微米的石蜡包埋切片。Fluoro-Jade B比旧方法（例如抑制银）更快且更可靠，用于明确定性检测和定量测量粗大和细小神经元变性。Fluoro-Jade B不会区分凋亡神经元和坏死神经元。Fluoro-Jade B偶尔会观察到星形胶质细胞标记，特别是在慢性研究中。目前Fluoro-Jade B 已停产，类似产品请点击查看。

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产品说明书

操作步骤

1.按照动物供应商的建议，采用适当的措施善待动物。

2.通过升主动脉用300mL 0.1M中性磷酸盐缓冲的10％福尔马林（4％甲醛）灌注动物，同时夹住降主动脉。

3.在相同的固定液和20％蔗糖中将大脑至少一夜之后。

4.在厚度为25微米的冷冻滑动切片机上切割组织。

5.收集0.1M磷酸盐缓冲液（pH 7.4）中的切片。安装在2％明胶涂覆的载玻片上，然后在50℃的载玻片加热器上空气干燥至少半小时。

6.将载玻片浸入1％NaOH和80％乙醇（20mL 5％NaOH至80mL无水乙醇）中5分钟，然后在70％乙醇中浸泡2分钟，然后在ddH 2 O中浸泡2分钟。

7.将载玻片转移到0.06％高锰酸钾溶液中10分钟，轻轻摇动。

8.用ddH2O冲洗载玻片2分钟。

9.将10毫克染料粉末加入100毫升ddH2O中，制备0.01％Fluoro-Jade®B原液，混合均匀。

10.通过将4mL储备溶液加入96mL 0.1％乙酸中，制备100mL 0.0004％Fluoro-Jade B染色溶液。

11.将染色液中的载玻片染色20分钟，用ddH₂O冲洗1分钟X 3次。

12.将载玻片垂直放在纸巾上。将载玻片在载玻片加热器（约50℃）上干燥5-10分钟直至它们完全干燥。

13.用非水性非荧光塑料封固剂如DPX（Sigma Chemicals Co.，St.Louis，MO）盖上盖玻片，然后浸入二甲苯中至少1分钟，清除干燥的载玻片。

参考文献

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