上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Spexyte 细胞内pH校准缓冲液试剂盒
| 货号 | 21235 | 存储条件 | 在2-8度冷藏保存 |
| 规格 | 100 Tests | 价格 | 2604 |
| Ex (nm) | Em (nm) | ||
| 分子量 | 溶剂 | ||
| 产品详细介绍 | |||
简要概述
细胞内pH（pHi）在许多细胞事件中起着重要的调节作用，包括细胞体积调节，细胞代谢，钙调节，受体介导的信号转导，离子转运，内吞作用和其他细胞过程。胞浆中的细胞内pH通常为6.8〜7.4，酸性细胞器中的pH为4.5〜6.0。细胞内pH变化具有显着的生理学作用，例如，细胞内信使例如Ca 2+和cAMP的pH依赖性浓度影响细胞信号传导。最近的几篇报道表明，pH失调正在成为癌细胞的标志。 Spexyte 细胞内pH校准缓冲液试剂盒提供了一系列带有尼日尔霉素的pH校准缓冲液（pH 4.5〜8.0），在100–150 mM K +的存在下，它们可通过外部pH调节细胞内pH。当与pH指示剂（例如BCFL，AM或BCECF，AM）结合使用时，Spexyte 细胞内pH校准缓冲液试剂盒可创建用于确定细胞内pH的标准曲线。
适用仪器
| 荧光显微镜 | |
| 激发： | Texas Red |
| 发射： | Texas Red |
| 推荐孔板： | 黑色透明 |
| 荧光酶标仪 | |
| 激发： | 440，500nm |
| 发射： | 530nm |
| cutoff: | 515nm |
| 推荐孔板： | 黑色透明 |
产品说明书
样品实验方案
简要概述
1.带有pH指示剂的染色细胞（例如：BCFL，AM）
2.用HH缓冲液洗涤细胞
3.准备细胞内pH校准缓冲液
4.向细胞添加细胞内pH校准缓冲液
5.在37°C孵育10分钟
6.使用适当的Ex / Em过滤器分析细胞
溶液配制
1.储备溶液的制备
所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1. Nigericin储备溶液（10 mM）：
将276 µL DMSO（组分J）添加到小瓶尼日尔霉素（组分I）中，制成10 mM Nigericin储备溶液。
2.工作溶液的制备
将1 µL 10mM Nigericin储备溶液添加到1 mL标准pH缓冲液（组分A至组分H）中，制成细胞内pH校准缓冲液。
点击查看样品制备方案
样品示例及操作
这是使用BCFL，AM pH指示剂校准细胞内pH的样品实验方案。
1.用BCFL，AM染色细胞：
1.1在DMSO溶液中制备5 mM BCFL，AM（Cat＃21190）。
1.2在HH缓冲液+ 0.02％PF127（Cat＃20053）中稀释至5 µM。
1.3从细胞中去除生长培养基。
1.4加入100 µL BCFL，AM染色液。
1.5在37°C下孵育30分钟。
1.6去除BCFL，AM染色溶液，并用HH Buffer洗涤一次。
1.7清空每个孔。
2.制作细胞内pH标准曲线：
2.1向细胞中添加100 µL细胞内pH校准缓冲液。
2.2在37°C下孵育5-10分钟。
2.3使用适当的Ex / Em过滤器分析细胞。 例如：BCFL，AM：Ex = 440、500nm，Em = 530nm。
参考文献
PHD2 is a regulator for glycolytic reprogramming in macrophages
Authors: Annemarie Guentsch, Angelika Beneke, Lija Swain, Katja Farhat, Shunmugam Nagarajan, Ben Wielockx, Kaamini Raithatha, Jan Dudek, Peter Rehling, Anke Zieseniss
Journal: Molecular and Cellular Biology (2016): MCB–00236
Design, calibration and application of broad-range optical nanosensors for determining intracellular pH
Authors: R. V. Sondergaard
Journal: Nat Protoc (2014): 2841-58
Manipulation of intracellular pH by electroporation: an alternative method for fast calibration of pH in living cells
Authors: J. Vecer
Journal: Anal Biochem (2004): 348-50
Flow cytometric calibration of intracellular pH measurements in viable cells using mixtures of weak acids and bases
Authors: S. Chow
Journal: Cytometry (1996): 360-7
Calibration methods and avoidance of errors in measurement of intracellular pH (pHcyt) using the indicator bis(carboxyethyl)-5(6)-carboxyfluorescein (BCECF) in human platelets
Authors: P. A. Valant
Journal: J Fluoresc (1992): 191-206
A novel method for absolute calibration of intracellular pH indicators
Authors: D. A. Eisner
Journal: Pflugers Arch (1989): 553-8
Intracellular calibration of a pH-sensitive dye in isolated, perfused salamander proximal tubules
Authors: J. R. Chaillet
Journal: J Gen Physiol (1985): 765-94
Umbelliferone as an Intracellular pH-sensitive fluorescent indicator and blood-brain barrier probe: instrumentation, calibration, and analysis
Authors: T. M. Sundt
Journal: J Neurophysiol (1980): 60-75