Portelite 荧光总核酸定量试剂盒 *针对 Cytocite 和 Qubit 荧光计进行了优化*

简要概述

Portelite 荧光总核酸定量试剂盒用于快速测量核酸总量，包括样品中的双链 DNA (dsDNA)、单链 DNA (ssDNA) 和 RNA。 该试剂盒包含所有基本试剂，包括 Helixyte Green ssDNA 试剂、稀释缓冲液和预稀释的 DNA 标准品。 Helixyte Green All 试剂是一种灵敏的荧光核酸探针，用于测量样品中可能含有双链 DNA (dsDNA)、单链 DNA (ssDNA)、RNA 和长寡核苷酸的核酸总量。 Helixyte Green All 试剂不加选择地与 dsDNA、ssDNA 和 RNA 结合。 Portelite 荧光总核酸定量试剂盒针对使用 CytoCite 或 Qubit® 荧光计测量核酸总量进行了优化。

适用仪器

产品说明书

实验方案

概述

1.准备 Helixyte Green All 工作溶液
2.在每个 0.2 mL PCR 管中加入 190 µL 1X Helixyte Green All 工作溶液
3.在每管中加入 10 µL 核酸标准品或测试样品
4.在室温下孵育 2 分钟
5.使用 CytoCite 荧光计或 Qubit 荧光计检测荧光强度

溶液制备

Helixyte Green ALL工作溶液
1.用检测缓冲液（组分 B）将 Helixyte Green All 试剂（组分 A）稀释 200 倍。 例如，要为 5 个样品制备足够的工作溶液，将 5 μL Helixyte Green All（组分 A）添加到 1 mL 检测缓冲液（组分 B）中。
注意：通过用箔纸覆盖或将其置于黑暗中来保护工作溶液免受光照。 建议在塑料容器而不是玻璃容器中制备溶液，因为染料可能会吸附到玻璃表面。 为获得最佳效果，该溶液应在稀释后几小时内使用。

操作步骤 

样品体积的可接受范围是 1~20 μL，具体取决于核酸样品的估计浓度。
以下方案是基于 10 μL 的样品体积生成的。
1.将 190 µL 1X Helixyte Green All 工作溶液添加到每个 Cytocite 样品管 (#CCT100) 或等效的 0.2 mL PCR 管中。
注意 使用薄壁、聚丙烯、透明的 0.2 mL PCR 管，例如 AAT Cat#CCT100。
2.每管加入10 μL核酸标准品或测试样品，涡旋2~3秒混匀。
3.在室温下孵育所有管子 2 分钟。
4.将样品插入 CytoCite 或 Qubit 并使用绿色荧光通道检测荧光强度。

标准校准曲线的制作
对于 Portelite 检测，您可以选择使用核酸标准品制作校准曲线。 这是生成定制 DNA 标准曲线的简要方案。
1.进行 1:2 连续稀释：将 10 ng/μL 核酸标准品 #2（组分 D）添加到检测缓冲液（组分 B）中以获得 10、5、2.5、1.25、0.62、0.31、0.15 ng/μL DNA 标准品 稀释。
2.将 190 µL Helixyte Green All 工作溶液加入每个管中。
3.将 10 µL 标准品加入 0.2 mL PCR 管中，然后涡旋混合 2~3 秒。
4.在室温下孵育反应 2 分钟。
5.将样品插入 CytoCite 并使用绿色荧光通道检测荧光强度。

图示

图 1. 使用 Qubit 荧光计（蓝色）或 CytoCite 荧光计（红色）比较总核酸剂量反应。

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