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Cell Navigator NBD神经酰胺高尔基体染色试剂盒 绿色荧光
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货号 | 22750 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 100 Tests | 价格 | 2604 | |
| Ex (nm) | 467 | Em (nm) | 538 | |
| 分子量 | 溶剂 | |||
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
高尔基体是大多数真核细胞胞质内囊泡和折叠膜的复合体，参与分泌和细胞内运输。它修饰内质网（ER）中内置的蛋白质和脂质，并准备将其输出到细胞外。它还在脂质在整个细胞中的运输和溶酶体的形成中起着重要作用。该Cell Navigator™NBD神经酰胺高尔基染色试剂盒提供了一种简便，快速的方法，可以选择性地对活细胞或醛固定细胞中的高尔基染色。将C6 NBD神经酰胺与牛血清白蛋白（C6-NBD-Ceramide-BSA）形成复合物给予细胞。高尔基体通过形成相应的荧光代谢产物而被染色。
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适用仪器
| 荧光显微镜 | |
| 激发： | 488nm |
| 发射： | 525nm |
| 推荐孔板： | 黑色透明 |
| 滤波片： | FITC滤波片组 |
产品说明书
样品实验方案
简要概述
- 根据需要处理细胞
- 加入C6 NBD神经酰胺工作溶液，在室温或37°C下孵育15〜30分钟
- 更换染色缓冲液，在室温或37°C下孵育15〜30分钟
- 使用FITC滤镜套件在显微镜下观察
- 可选：用4％甲醛固定细胞
储备溶液配制
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。
1. C6 NBD神经酰胺储备溶液（100X）：
将100 µL DMSO（组分C）加入小瓶C6 NBD神经酰胺（组分A）中并充分混合。注：将未使用的C6 NBD神经酰胺原液在-20℃保存。避免冻融循环。
工作溶液配制
1. C6 NBD神经酰胺工作液：
将10 µL NBD神经酰胺原液（100X）添加到990 µL染色缓冲液（组分B）中，制成NBD神经酰胺工作液。
可选：将10 µL Hoechst 33342（组分D）添加到1mL NBD神经酰胺工作溶液中以进行核染色。
操作步骤
- 接种并根据需要处理细胞。
- 直接在细胞培养基中加入100µL C6 NBD神经酰胺工作溶液。
- 在室温或37°C下孵育15〜30分钟。
- 除去C6 NBD神经酰胺工作溶液，并用100 µL /孔的染色缓冲液（组分B）代替。
- 在室温或37°C下孵育10〜15分钟。
- 在装有FITC滤光片的荧光显微镜下观察。
- 从步骤4中除去染色缓冲液，然后向每个孔中添加100 µL /孔/ 96孔板的4％甲醛固定缓冲液（未提供）。 注意：对于非贴壁细胞，请添加所需量（例如2X106细胞/ mL）的4％甲醛固定液。（可选）
- 在室温下将平板孵育20至30分钟。 去除固定剂。 用PBS洗涤细胞2-3次，然后用100 µL /孔的染色缓冲液（组分B）替换。（可选）
图例
图1. HeLa细胞中NBD神经酰胺高尔基染色的荧光图像。 细胞在37°C下用100 µL C6 NBD神经酰胺工作溶液染色20分钟，然后用Hoechst 33342染色。 高尔基体被认为是部分包围细胞核的强烈荧光线状结构。
参考文献
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Authors: Z. Xie
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Functions of neutral ceramidase in the Golgi apparatus
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Authors: S. B. Mitchell
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An inducible ER-Golgi tether facilitates ceramide transport to alleviate lipotoxicity
Authors: L. K. Liu
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Ceramide Transport from the Endoplasmic Reticulum to the Trans Golgi Region at Organelle Membrane Contact Sites
Authors: K. Hanada
Journal: Adv Exp Med Biol (2017): 69-81
Endoplasmic reticulum is the sorting core facility in the Golgi-lacking protozoan Giardia lamblia
Authors: N. Zamponi
Journal: Traffic (2017): 604-621